公开(公告)号：CN118360236A

公开(公告)日：2024-07-19

申请号：CN202410259112.2

申请日：2021-10-20

Applicant: 扬州大学

Inventor： 胡增垒 ,  刘秀梵 ,  张艳焱 ,  胡娇 ,  黄雅 ,  石磊 ,  何晓政 ,  邓婧

IPC: C12N5/071 ,  C12N5/10 ,  C12N15/65 ,  C12N15/44 ,  C12N15/867 ,  G01N33/68 ,  C12R1/91

Abstract: 本发明提供了一种用于H7N9亚型禽流感血清杀伤效应测定的靶细胞及鉴定方法，其包括如下步骤：PCR扩增目标基因片段、目的基因包装到载体中、转染、慢病毒分离和检测、测定HA蛋白表达情况、测定血清杀伤活性。本发明有着如下有益效果：本发明构建的细胞株高效均一地表达HA蛋白，在普通二级实验室即可操作，为测定H7N9血清杀伤效应提供稳定、可靠的靶细胞来源；本发明提供的细胞系带有ZSgreen荧光报告基因，无需额外的标记，且能区分靶细胞与效应细胞；本发明建立的检测H7N9禽流感免疫血清Fc效应的方法，为全面认识H7N9疫苗的免疫保护机理提供有力工具；除了针对特定的病菌外，本发明还可以对其他家禽疫苗抗体Fc免疫效应的测定提供了技术参考。

公开(公告)号：CN111825763B

公开(公告)日：2022-04-19

申请号：CN202010681212.6

申请日：2020-07-15

Applicant: 扬州大学

Inventor： 胡增垒 ,  赵江艳 ,  石磊 ,  刘秀梵

IPC: C07K16/10 ,  C07K14/11 ,  C12N5/20 ,  C12N15/13 ,  G01N33/577 ,  G01N33/569

Abstract: 本发明属于生物技术领域，涉及一种识别流感病毒HA茎部的单克隆抗体、抗原表位、编码基因及其应用。本发明提供一株流感病毒HA茎部特异性单克隆抗体，包括重链可变区和轻链可变区，重链可变区的核苷酸与氨基酸序列分别如SEQ ID NO.1‑2所示；轻链可变区的核苷酸与氨基酸序列分别如SEQ ID NO.6‑7所示。该单克隆抗体特异性识别HA蛋白茎部以第431位W、433位Y、437位L为核心基序的抗原表位。该单克隆抗体由H7N9亚型禽流感病毒HA蛋白作为抗原免疫小鼠得到，亲和力高、敏感性强，与group 1和group 2的流感病毒具有良好的交叉反应性，在流感病毒的广谱免疫学检测方面具有较高的应用价值。

公开(公告)号：CN113943751A

公开(公告)日：2022-01-18

申请号：CN202111237226.X

申请日：2021-10-20

Applicant: 扬州大学

Inventor： 胡增垒 ,  刘秀梵 ,  张艳焱 ,  胡娇 ,  黄雅 ,  石磊 ,  何晓政 ,  邓婧

IPC: C12N15/867 ,  C12N15/65 ,  C12N5/10 ,  C12N15/44 ,  C12Q1/02

Abstract: 本发明提供了一种用于H7N9亚型禽流感血清杀伤效应测定的靶细胞及鉴定方法，其包括如下步骤：PCR扩增目标基因片段、目的基因包装到载体中、转染、慢病毒分离和检测、测定HA蛋白表达情况、测定血清杀伤活性。本发明有着如下有益效果：本发明构建的细胞株高效均一地表达HA蛋白，在普通二级实验室即可操作，为测定H7N9血清杀伤效应提供稳定、可靠的靶细胞来源；本发明提供的细胞系带有ZSgreen荧光报告基因，无需额外的标记，且能区分靶细胞与效应细胞；本发明建立的检测H7N9禽流感免疫血清Fc效应的方法，为全面认识H7N9疫苗的免疫保护机理提供有力工具；除了针对特定的病菌外，本发明还可以对其他家禽疫苗抗体Fc免疫效应的测定提供了技术参考。

公开(公告)号：CN111825763A

公开(公告)日：2020-10-27

申请号：CN202010681212.6

申请日：2020-07-15

Applicant: 扬州大学

Inventor： 胡增垒 ,  赵江艳 ,  石磊 ,  刘秀梵

IPC: C07K16/10 ,  C07K14/11 ,  C12N5/20 ,  C12N15/13 ,  G01N33/577 ,  G01N33/569

Abstract: 本发明属于生物技术领域，涉及一种识别流感病毒HA茎部的单克隆抗体、抗原表位、编码基因及其应用。本发明提供一株流感病毒HA茎部特异性单克隆抗体，包括重链可变区和轻链可变区，重链可变区的核苷酸与氨基酸序列分别如SEQ ID NO.1-2所示；轻链可变区的核苷酸与氨基酸序列分别如SEQ ID NO.6-7所示。该单克隆抗体特异性识别HA蛋白茎部以第431位W、433位Y、437位L为核心基序的抗原表位。该单克隆抗体由H7N9亚型禽流感病毒HA蛋白作为抗原免疫小鼠得到，亲和力高、敏感性强，与group 1和group 2的流感病毒具有良好的交叉反应性，在流感病毒的广谱免疫学检测方面具有较高的应用价值。

公开(公告)号：CN109666767A

公开(公告)日：2019-04-23

申请号：CN201910104444.2

申请日：2019-02-01

Applicant: 扬州大学

Inventor： 刘秀梵 ,  刘东 ,  张竹君 ,  何丽红 ,  刘娇 ,  石磊 ,  胡娇 ,  顾敏 ,  刘晓文 ,  王晓泉

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/686 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明涉及一种检测并区分H7亚型禽流感病毒强弱毒的一步法实时荧光定量PCR引物、探针及试剂盒。所述引物是检测H7亚型禽流感病毒强弱毒的通用引物H7-FP和H7-RP，所述探针是检测H7N9亚型禽流感病毒强毒的探针H7-HPProbe:和检测H7N9亚型禽流感病毒弱毒的探针H7-LPProbe。本发明还公开了包括上述引物和探针的试剂盒。本发明可以特异性地检测H7亚型禽流感病毒并区分其强毒和弱毒，对其他亚型禽流感病毒或其他禽类病毒均无明显扩增曲线。单个反应系统可以同时检测出最低50拷贝每反应体系的H7亚型禽流感病毒弱毒的基因片段或50拷贝每反应体系的H7亚型禽流感病毒弱毒的基因片段。

公开(公告)号：CN118207188A

公开(公告)日：2024-06-18

申请号：CN202410130522.7

申请日：2024-01-30

Applicant: 扬州大学

Inventor： 石磊 ,  何涛 ,  贾禄强 ,  高亚军 ,  马梦瑶 ,  王若宇

IPC: C12N9/36 ,  C12N15/81 ,  A23L3/3571

Abstract: 本发明公开了一种强化重组毕赤酵母表达人源溶菌酶的方法及其在食品保鲜中的应用。所述强化重组毕赤酵母表达hLYZ的方法，具体为当重组毕赤酵母的发酵进入甲醇流加阶段时，交替式地将培养环境从“甲醇受限/溶解氧浓度充足”环境切换至“甘油充足/溶解氧浓度受限”环境，并重复上述循环。相比与执行甲醇单独诱导控制策略(甲醇受限/DO充足)，采用周期控制方法时hLYZ的活性提高了77.6％，达到了2.61×105IU/mL的最高水平。在此基础上，将采用上述优化控制方法时所获得的发酵上清液应用至草莓的保鲜过程，最终在室温保存7d的条件下草莓的失重率最低(30.15％vs36.80％)、保鲜效果最优。