一种番鸭细小病毒VP3基因重组鸡痘病毒转移载体及其构建方法

    公开(公告)号:CN105132462A

    公开(公告)日:2015-12-09

    申请号:CN201510570155.3

    申请日:2015-09-09

    Abstract: 本发明公开了一种番鸭细小病毒VP3基因重组鸡痘病毒转移载体及其构建方法。以鸡痘病毒基因组为模板扩增TK基因的同源重组臂TKL、TKR,并将其连接成带有多克隆位点MCS的TK片段,再连入骨架质粒,得质粒pTK;合成反向串联表达盒S,并将其插入质粒pTK中,得质粒pTKS;在早期启动子P7.5后的MCS1处插入VP3基因,晚期启动子P11后的MCS2处插入EGFP BGH pA,即得目的转移载体pTKS-VP3-EGFP。将pTKS-VP3-EGFP转染鸡痘病毒感染的鸡胚成纤维细胞后,经RT-PCR和荧光蛋白检测VP3能够正常表达。本发明为进一步研制安全、高效的MDPV重组鸡痘病毒疫苗奠定了基础。

    一种鸭疫里默氏杆菌的发酵工艺

    公开(公告)号:CN108949619A

    公开(公告)日:2018-12-07

    申请号:CN201810710104.X

    申请日:2018-07-02

    CPC classification number: C12N1/20

    Abstract: 本发明公开了一种鸭疫里默氏杆菌的发酵工艺,包括以下步骤:首先制备合格的鸭疫里默氏杆菌生产种子,然后接种在培养基中用发酵罐培养,控制溶解氧值为10~40%,发酵罐培养转速100~200 r/min,发酵7~8小时。本发酵工艺在发酵8小时活菌数达到高峰,收获时每ml菌液含活菌数≥1.0×1010CFU,4℃放置2天菌液的存活率较高,均≥75%。本发酵工艺发酵培养密度高、效率高、重复性好、可操作性好、有很大的推广价值,可有效提高抗原产量和培养基的利用率,缩短生产周期,降低生产成本,减少劳动强度,提高生产效率,为鸭疫里默杆菌弱毒疫苗生产提供了一种有效可行的抗原制备工艺,为研制高效疫苗打好基础。

    一种番鸭细小病毒VP3基因重组鸡痘病毒转移载体及其构建方法

    公开(公告)号:CN105132462B

    公开(公告)日:2019-03-26

    申请号:CN201510570155.3

    申请日:2015-09-09

    Abstract: 本发明公开了一种番鸭细小病毒VP3基因重组鸡痘病毒转移载体及其构建方法。以鸡痘病毒基因组为模板扩增TK基因的同源重组臂TKL、TKR,并将其连接成带有多克隆位点MCS的TK片段,再连入骨架质粒,得质粒pTK;合成反向串联表达盒S,并将其插入质粒pTK中,得质粒pTKS;在早期启动子P7.5后的MCS1处插入VP3基因,晚期启动子P11后的MCS2处插入EGFP BGH pA,即得目的转移载体pTKS‑VP3‑EGFP。将pTKS‑VP3‑EGFP转染鸡痘病毒感染的鸡胚成纤维细胞后,经RT‑PCR和荧光蛋白检测VP3能够正常表达。本发明为进一步研制安全、高效的MDPV重组鸡痘病毒疫苗奠定了基础。

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