公开(公告)号：CN105132462B

公开(公告)日：2019-03-26

申请号：CN201510570155.3

申请日：2015-09-09

Applicant: 广东省农业科学院动物卫生研究所

Inventor： 李林林 ,  胡奇林 ,  孙敏华 ,  董嘉文 ,  袁建丰 ,  邝瑞欢 ,  张建峰

IPC: C12N15/863

Abstract: 本发明公开了一种番鸭细小病毒VP3基因重组鸡痘病毒转移载体及其构建方法。以鸡痘病毒基因组为模板扩增TK基因的同源重组臂TKL、TKR，并将其连接成带有多克隆位点MCS的TK片段，再连入骨架质粒，得质粒pTK；合成反向串联表达盒S，并将其插入质粒pTK中，得质粒pTKS；在早期启动子P7.5后的MCS1处插入VP3基因，晚期启动子P11后的MCS2处插入EGFP BGH pA，即得目的转移载体pTKS‑VP3‑EGFP。将pTKS‑VP3‑EGFP转染鸡痘病毒感染的鸡胚成纤维细胞后，经RT‑PCR和荧光蛋白检测VP3能够正常表达。本发明为进一步研制安全、高效的MDPV重组鸡痘病毒疫苗奠定了基础。

公开(公告)号：CN105132462A

公开(公告)日：2015-12-09

申请号：CN201510570155.3

申请日：2015-09-09

Applicant: 广东省农业科学院动物卫生研究所

Inventor： 李林林 ,  胡奇林 ,  孙敏华 ,  董嘉文 ,  袁建丰 ,  邝瑞欢 ,  张建峰

IPC: C12N15/863

Abstract: 本发明公开了一种番鸭细小病毒VP3基因重组鸡痘病毒转移载体及其构建方法。以鸡痘病毒基因组为模板扩增TK基因的同源重组臂TKL、TKR，并将其连接成带有多克隆位点MCS的TK片段，再连入骨架质粒，得质粒pTK；合成反向串联表达盒S，并将其插入质粒pTK中，得质粒pTKS；在早期启动子P7.5后的MCS1处插入VP3基因，晚期启动子P11后的MCS2处插入EGFP BGH pA，即得目的转移载体pTKS-VP3-EGFP。将pTKS-VP3-EGFP转染鸡痘病毒感染的鸡胚成纤维细胞后，经RT-PCR和荧光蛋白检测VP3能够正常表达。本发明为进一步研制安全、高效的MDPV重组鸡痘病毒疫苗奠定了基础。

公开(公告)号：CN103614370A

公开(公告)日：2014-03-05

申请号：CN201310561323.3

申请日：2013-11-12

Applicant: 广东省农业科学院动物卫生研究所

Inventor： 袁建丰 ,  李林林 ,  孙敏华 ,  董嘉文 ,  向蓉 ,  胡奇林

IPC: C12N15/10 ,  C12R1/01

Abstract: 本发明公开了一种快速提取鸭疫里默氏杆菌基因组DNA的方法及试剂盒。该方法包括如下步骤：1）菌体裂解，2）沉淀菌体蛋白，3）去除菌体蛋白，4）沉淀基因组DNA，5）去离子，6）溶解DNA。其中步骤1）所用到的菌体裂解缓冲液含有：38～42mMTris-acetatepH7.8，18～22mMsodium-acetate，0.8～1.2mMEDTA，0.8～1.2%SDS。本发明方法提取获得的鸭疫里默氏杆菌基因组DNA，不仅提取效率高，而且基因组DNA的纯度高，为后续分子生物学的研究奠定了坚实基础，且操作简单可行，实用性强。