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公开(公告)号：CN104131105A
公开(公告)日：2014-11-05
申请号：CN201410390057.7
申请日：2014-08-11
Applicant: 复旦大学附属中山医院 , 上海艾津生物医药科技有限公司
IPC: C12Q1/68
CPC classification number: C12N15/1048 , C12Q2565/125
Abstract: 本发明涉及一种利用毛细管电泳技术筛选甲胎蛋白特异性核酸适配体的方法，包括以下步骤：设计并构建随机寡核苷酸文库，联合毛细管电泳技术与SELEX筛选方法，富集到能与甲胎蛋白结合的寡核苷酸，经克隆、测序、毛细管电泳分析以及免疫荧光验证，最终获得能与甲胎蛋白特异性结合的寡核苷酸，即适配体。本发明提供了一种高效、特异的适配体筛选方法。本发明的优点在于：依赖于毛细管电泳技术的优势，缩短了筛选时间，仅用4轮循环即可完成；同时减少了由基质作用引起的非特异性筛选。
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公开(公告)号：CN101831404B
公开(公告)日：2012-05-23
申请号：CN201010153268.0
申请日：2010-04-22
Applicant: 复旦大学附属中山医院
Abstract: 本发明提供了淋巴结靶向转移性人肝癌细胞株，母细胞为红色荧光蛋白表达肝癌细胞HCCLM3-R，其特征在于，所述细胞为分类命名：淋巴结靶向转移人肝癌细胞株HCCLM3-R-LnM1，保藏编号：3645，具有以下生物学特性：细胞呈多边形上皮样，贴壁生长，接触性生长抑制丧失，亚三倍体核型，染色体数目50-58条，均分泌AFP蛋白。所述的建立方法包括采用裸鼠皮下和肝脏原位移植瘤模型自发性淋巴结转移筛选，淋巴结转移人肝癌细胞再进行体外克隆扩增纯化。本发明在肝癌基础研究及药物临床前期研究中具有广阔的应用前景和潜在的社会与经济价值。
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公开(公告)号：CN101381706A
公开(公告)日：2009-03-11
申请号：CN200710045676.2
申请日：2007-09-06
Applicant: 复旦大学附属中山医院
Abstract: 本发明属微生物动物细胞系领域，涉及可发射高强度红色或绿色荧光，具肺与淋巴结高转移能力的人肝癌细胞系及其建立方法。本发明以肺与淋巴结高转移的人肝癌细胞系HCCLM3、HCCLM6为母细胞，通过慢病毒包装质粒对293细胞的质粒DNA共转染，获得真核表达红色或绿色荧光蛋白基因的假慢病毒颗粒，感染上述母细胞肝癌细胞株，得到染色体整合型、可稳定表达红色或绿色荧光的肺及淋巴结高转移肝癌细胞系。本发明的肺与淋巴结人高转移肝癌细胞系在体内外可作为肿瘤细胞的示踪研究、肝癌复发与转移的分子机理研究，以及抗肿瘤新药临床前期的药物疗效研究等，有广阔的应用前景。
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公开(公告)号：CN116769720A
公开(公告)日：2023-09-19
申请号：CN202310671540.1
申请日：2023-06-07
Applicant: 复旦大学附属中山医院
Abstract: 本发明公开了一种靶向GPC3且高表达CCL‑19的四代CART细胞及其制备方法与应用。本发明根据GPC3单克隆抗体的氨基酸序列，按照VL‑Linker‑VH方式拼接成scFv，并根据密码子偏爱性转换为核苷酸序列，同时5’端加入BamHI酶切位点和信号肽，3’端加入NheI酶切位点，之后进行全基因合成，然后，CAR载体通过病毒转染进入到T淋巴细胞内。本发明针对肿瘤细胞具有免疫逃逸的特性，将高特异性GPC3抗体的单链可变区融合构建入CAR载体，能够更特异性识别和杀伤GPC3阳性表达的肝癌细胞；通过调整合适长度且灵活性的铰链区，保障CART的有效杀伤性；同时，高表达CCL‑19具有更强的活性。
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公开(公告)号：CN101831405A
公开(公告)日：2010-09-15
申请号：CN201010153285.4
申请日：2010-04-22
Applicant: 复旦大学附属中山医院
Abstract: 本发明提供了肺靶向转移性人肝癌细胞株及其建立方法。所述的肺靶向转移性人肝癌细胞株，其特征在于，母细胞为红色荧光蛋白表达肝癌细胞HCCLM3-R，所述细胞为分类命名：肺靶向转移人肝癌细胞株HCCLM3-R-LM1，保藏编号：3644，具有以下生物学特性：细胞呈多边形上皮样，贴壁生长，接触性生长抑制丧失，亚三倍体核型，染色体数目50-58条，均分泌AFP蛋白、肺靶向转移克隆选择优势。所述的建立方法包括采用裸鼠皮下及肝脏原位移植瘤模型自发性肺转移筛选，肺转移人肝癌细胞再进行体外克隆扩增纯化。本发明在肝癌基础研究及药物临床前期研究中具有广阔的应用前景和潜在的社会与经济价值。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN101831405B
公开(公告)日：2012-06-27
申请号：CN201010153285.4
申请日：2010-04-22
Applicant: 复旦大学附属中山医院
Abstract: 本发明提供了肺靶向转移性人肝癌细胞株及其建立方法。所述的肺靶向转移性人肝癌细胞株，其特征在于，母细胞为红色荧光蛋白表达肝癌细胞HCCLM3-R，所述细胞为分类命名：肺靶向转移人肝癌细胞株HCCLM3-R-LM1，保藏编号：3644，具有以下生物学特性：细胞呈多边形上皮样，贴壁生长，接触性生长抑制丧失，亚三倍体核型，染色体数目50-58条，均分泌AFP蛋白、肺靶向转移克隆选择优势。所述的建立方法包括采用裸鼠皮下及肝脏原位移植瘤模型自发性肺转移筛选，肺转移人肝癌细胞再进行体外克隆扩增纯化。本发明在肝癌基础研究及药物临床前期研究中具有广阔的应用前景和潜在的社会与经济价值。
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公开(公告)号：CN101380478A
公开(公告)日：2009-03-11
申请号：CN200710045675.8
申请日：2007-09-06
Applicant: 复旦大学附属中山医院
Abstract: 本发明属微生物动物细胞系领域，涉及可自发高强度红色或绿色荧光，具转移能力的荧光可视人肝癌裸鼠模型的建立方法。本发明用假慢病毒感染的方法获得荧光基因高染色体整合度、高荧光强度、表达稳定的人高转移荧光肝癌细胞系HCCLM3－R，HCCLM3－G，HCCLM6－R和HCCLM6－G后，置荧光表达肝癌细胞于裸鼠皮下建立荧光可视高转移人肝癌裸鼠皮下肿瘤模型或置皮下荧光表达肿瘤组织至裸鼠肝脏，建立荧光可视高转移人肝癌裸鼠肝脏原位肿瘤模型。所得模型可作为动物在体肝癌细胞的示踪，可用于肝癌复发与转移的分子机理研究，以及抗肝癌新疗法和抗肝癌新药临床前期的疗效判别等。
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公开(公告)号：CN116410982A
公开(公告)日：2023-07-11
申请号：CN202310342787.9
申请日：2023-04-03
Applicant: 复旦大学附属中山医院
IPC: C12N15/115 , A61K47/54 , A61K47/69 , A61K45/00 , A61K31/704 , A61P35/00
Abstract: 本发明公开了靶向肝癌标志物GPC3的核酸适配体、载药脂质体及其制备方法和应用，其中核酸适配体为靶向肝癌标志物GPC3蛋白的核酸适配体APS613‑1，其5’端修饰荧光基团和3’端修饰胆固醇基团得到靶向探针，本发明还提供载药脂质体纳米粒子通过薄膜水合法制备球状空心结构的纳米脂质体后，药物以主动载药的方式进入纳米脂质体中，靶向探针与纳米脂质体按比例混合孵育，待靶向探针固定于纳米脂质体表面上形成递药载体，其中药物包括小分子药物、蛋白质药物或核酸药物等，其具有高亲和力和高特异性，用于制备抗肝癌药物可以延长体循环时间，增强药物疗效，具有广阔的应用前景。
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公开(公告)号：CN112779217B
公开(公告)日：2023-04-11
申请号：CN202110332346.1
申请日：2021-03-29
Applicant: 复旦大学附属中山医院
IPC: C12N5/0783 , A61K35/17 , A61P35/00
Abstract: 本发明公开了一种高记忆表型肿瘤浸润T淋巴细胞的培养方法，包括：无菌切取肿瘤组织置于培养液中，在无菌冷链条件下将瘤体机械剪碎、消化，获取单细胞悬液，分离提取肿瘤浸润T淋巴细胞，加入到含有分离诱导培养液的培养基中进行体外扩增和诱导分化，培养7–21天得到高记忆表型肿瘤浸润T淋巴细胞，分离诱导培养液为含有IL‑2、IL‑7、IL‑15浓度分别为10ng/ml、10ng/ml、20ng/ml的培养基。本发明通过分离诱导培养液对TIL细胞进行体外扩增和诱导分化，最大限度获得具有高效增殖活性及强大肿瘤杀伤能力的高记忆表型TILs，方法简单且高效，记忆表型T淋巴细胞占比高，可用于治疗晚期恶性黑色素瘤。
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公开(公告)号：CN104745530A
公开(公告)日：2015-07-01
申请号：CN201310733452.6
申请日：2013-12-26
Applicant: 复旦大学附属中山医院 , 上海睿智化学研究有限公司
IPC: C12N5/09 , A01K67/027 , A61K49/00 , C12Q1/02 , C12R1/91
Abstract: 本发明公开了一种人肝细胞癌细胞系及其建立方法和应用。所述的人肝细胞癌细胞系保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：C201114。建立方法的步骤：1）获得新鲜的临床肝癌手术切除标本，切成20～50mg的小块，接种哺乳动物；2）接种70～90天后，将荷瘤动物处死，取出肿瘤组织，进行癌细胞的原代培养和传代培养。本发明的人肝细胞癌细胞系性状稳定，可稳定多次传代，具有成瘤性，可以成功制备肝癌动物模型，可用来分析体外、体内药物敏感性进而建立体外、体内两个相关联的药物筛选平台，是应用于基础研究和临床前期应用的理想人原发性肝癌细胞系。
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