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公开(公告)号：CN103454371B
公开(公告)日：2015-10-07
申请号：CN201310310332.5
申请日：2013-07-23
Applicant: 复旦大学
IPC: G01N30/89
Abstract: 本发明属生物技术领域，涉及基于一维长柱液相色谱串联质谱的蛋白质组分离鉴定方法。该鉴定方法使用50cm的反相色谱柱，采用一维长梯度对蛋白质组学样品进行分离，经电喷雾电离，串联质谱进行一维蛋白质组分离鉴定，使用结果表明，本鉴定方法的实验操作简单、不需预分馏分，一次实验可达到传统二维分离质谱鉴定的效果；特别是对于少量样品的处理，一次实验仅需几微克样品就可完成一次蛋白质组学的数据分析，所需样品量少,对复杂生物蛋白质组的仪器分析效率达到7小时内实现对4000个以上蛋白质的分析鉴定，实现蛋白质的快速高效鉴定。
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公开(公告)号：CN114441264A
公开(公告)日：2022-05-06
申请号：CN202210063822.9
申请日：2022-01-20
Applicant: 复旦大学
Abstract: 本发明提出一种皮升级体积单细胞样品裂解酶解反应器，将毛细管反应器内表面修饰上与蛋白质反应的基团，通过注射泵连接毛细管，从头端依次吸入含有单个细胞的溶液及裂解缓冲溶液，缓慢推出两种溶液使二者悬挂在毛细管头端进行充分混合，再吸回毛细管内使单细胞内的蛋白质与毛细管内壁的基团反应后固定在反应器内表面、随后依次从毛细管头端吸入还原试剂、烷基化试剂及酶接触已固定的蛋白并反应，实现单细胞在毛细管管口的裂解，毛细管内蛋白质的固定及酶解，酶解后得到的肽直接转移至液质连用仪器中进行单细胞蛋白组分离鉴定。利用本发明实现了单个细胞样品的裂解酶解，处理体积为皮升级，改善了单细胞蛋白质样品处理中的样品损失问题，为单细胞蛋白质组学分析提供新的工具。
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公开(公告)号：CN102809600A
公开(公告)日：2012-12-05
申请号：CN201210249904.9
申请日：2012-07-19
Applicant: 复旦大学
IPC: G01N27/62
Abstract: 本发明涉及蛋白质组学技术领域，具体为一种用于一级相同质量二级b，y碎片离子对定量方法的数据分析方法，该方法采用Matlab语言编写，在Matlab界面下运行，其基于SEQUEST搜索引擎得到的蛋白定性结果，通过提取串级质谱中b，y碎片离子对的峰强度信息，做比值后得到肽段和蛋白的定量信息。该方法还加入了一个“谱图拆分”的优化模块，减少了b，y碎片离子对共碎裂谱图对肽段正确定性的影响。本发明还构造z统计量计算定量蛋白的显著性，为确定实际样品中上下调变化蛋白提供参考依据。本发明为一级相同质量二级b,y碎片离子对的定量蛋白质组学新方法的发展和应用，提供了一个通用的、开放的、准确的定量分析手段。
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公开(公告)号：CN102243218A
公开(公告)日：2011-11-16
申请号：CN201110123885.0
申请日：2011-05-13
Applicant: 复旦大学
Abstract: 一种基于细胞培养和串级质谱的蛋白质组学相对定量方法。在细胞培养过程中加入相同质量增加的重同位素标记的精氨酸或赖氨酸，细胞蛋白提取液按不同比例混合，经过特异性内切酶Lys-N和Arg-C酶解后，直接2D-LC-MS/MS分析，提取串级质谱中具有固定质量增加的b,y碎片离子对的峰强度，做比值后确定相应肽段和蛋白的相对量，该方法克服了一级质谱定量的复杂度增加的问题和同重同位素标签串级质谱定量的低质量端抑制效应，提高了一级质谱信号的灵敏度，同时由于在串级质谱中采用多对b,y碎片离子对进行定量，从而保证了该定量方法的准确性和可靠性。为定量蛋白质组学的研究和发展，提供了一个新的方法和技术平台。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN104076111B
公开(公告)日：2016-03-30
申请号：CN201410320892.3
申请日：2014-07-08
Applicant: 复旦大学
IPC: G01N30/06
Abstract: 本发明属于生物分析与检测技术领域，具体为一种用于膜蛋白线鉴定的膜蛋白富集、纯化、酶解一体化装置。该装置由高压泵、六通阀、膜蛋白共价固定反应柱及有关连接组成。所述膜蛋白固定反应柱中填料表面的活性基团能够与膜蛋白游离氨基、羧基发生反应，从而将膜蛋白牢牢固定在反应柱上。本发明利用共价键合的原理将膜蛋白固定在反应柱内，增溶剂以及磷脂等干扰物可通过流动相在线冲洗的方法除去，不会造成额外的样品损失，从而达到理想的鉴定效果。实验表明，利用本发明装置具有反应效率高、非特异性吸附小等优点，并成功运用到大鼠鼠肝组织膜蛋白组的鉴定中。本发明装置结构新颖，实用高效，具有推广应用潜力。
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公开(公告)号：CN104483434A
公开(公告)日：2015-04-01
申请号：CN201410702227.0
申请日：2014-11-29
Applicant: 复旦大学
IPC: G01N30/89
Abstract: 本发明属于生物分析与检测技术领域，具体为一种用于100个以内细胞的蛋白质组自动化分析系统及方法。本发明以一个可切换的十通阀为中心，与注射泵、多元梯度泵、质谱仪、上样泵、毛细管道连接组成系统切换流路。使用时将细胞直接注入切换系统的微反应通道中，经过酶解将肽段切换富集在捕集柱上，除盐纯化，再经切换，进行液相色谱-质谱分析。由于使用了在线系统，细胞的引入、酶解、捕集、除盐等步骤可自动完成，大大降低了微量样品的损失。实验结果表明该自动化分析系统对微量细胞的样品能够鉴定到较多种类的蛋白。本发明简单实用，灵敏度高，具有推广应用前景。
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公开(公告)号：CN103454371A
公开(公告)日：2013-12-18
申请号：CN201310310332.5
申请日：2013-07-23
Applicant: 复旦大学
IPC: G01N30/89
Abstract: 本发明属生物技术领域，涉及基于一维长柱液相色谱串联质谱的蛋白质组分离鉴定方法。该鉴定方法使用50cm的反相色谱柱，采用一维长梯度对蛋白质组学样品进行分离，经电喷雾电离，串联质谱进行一维蛋白质组分离鉴定，使用结果表明，本鉴定方法的实验操作简单、不需预分馏分，一次实验可达到传统二维分离质谱鉴定的效果；特别是对于少量样品的处理，一次实验仅需几微克样品就可完成一次蛋白质组学的数据分析，所需样品量少,对复杂生物蛋白质组的仪器分析效率达到7小时内实现对4000个以上蛋白质的分析鉴定，实现蛋白质的快速高效鉴定。
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公开(公告)号：CN104483434B
公开(公告)日：2016-07-06
申请号：CN201410702227.0
申请日：2014-11-29
Applicant: 复旦大学
IPC: G01N30/89
Abstract: 本发明属于生物分析与检测技术领域，具体为一种用于100个以内细胞的蛋白质组自动化分析系统及方法。本发明以一个可切换的十通阀为中心，与注射泵、多元梯度泵、质谱仪、上样泵、毛细管道连接组成系统切换流路。使用时将细胞直接注入切换系统的微反应通道中，经过酶解将肽段切换富集在捕集柱上，除盐纯化，再经切换，进行液相色谱-质谱分析。由于使用了在线系统，细胞的引入、酶解、捕集、除盐等步骤可自动完成，大大降低了微量样品的损失。实验结果表明该自动化分析系统对微量细胞的样品能够鉴定到较多种类的蛋白。本发明简单实用，灵敏度高，具有推广应用前景。
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公开(公告)号：CN104090050B
公开(公告)日：2015-10-28
申请号：CN201410320891.9
申请日：2014-07-08
Applicant: 复旦大学
Abstract: 本发明属于生物分析与检测技术领域，具体为一种基于磁性材料的膜蛋白共价固定方法。本发明利用一锅法合成包有长链聚乙二醇的磁球Fe3O4@PEG，再在PEG的末端羟基上接上三氟乙磺酰基或者将其氧化为醛基。这些活性基团稀疏地分布在磁性材料的表面，与膜蛋白上不同位点的游离氨基发生高效反应，从而将膜蛋白牢固地键合到材料表面。因此，膜蛋白的增溶剂以及磷脂等干扰物便可通过洗涤以及磁性分离的方法被轻松除去，从而达到理想的鉴定效果。实验表明，利用该磁性材料固定膜蛋白具有反应效率高、非特异性吸附小等优点，并成功运用到膜蛋白组的鉴定上。本发明新颖便捷，实用高效，重复性好，稳定性高，具有巨大的推广应用潜力。
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