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公开(公告)号：CN104076111B
公开(公告)日：2016-03-30
申请号：CN201410320892.3
申请日：2014-07-08
Applicant: 复旦大学
IPC: G01N30/06
Abstract: 本发明属于生物分析与检测技术领域，具体为一种用于膜蛋白线鉴定的膜蛋白富集、纯化、酶解一体化装置。该装置由高压泵、六通阀、膜蛋白共价固定反应柱及有关连接组成。所述膜蛋白固定反应柱中填料表面的活性基团能够与膜蛋白游离氨基、羧基发生反应，从而将膜蛋白牢牢固定在反应柱上。本发明利用共价键合的原理将膜蛋白固定在反应柱内，增溶剂以及磷脂等干扰物可通过流动相在线冲洗的方法除去，不会造成额外的样品损失，从而达到理想的鉴定效果。实验表明，利用本发明装置具有反应效率高、非特异性吸附小等优点，并成功运用到大鼠鼠肝组织膜蛋白组的鉴定中。本发明装置结构新颖，实用高效，具有推广应用潜力。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN105400855B
公开(公告)日：2019-06-21
申请号：CN201510820527.3
申请日：2015-11-24
Applicant: 复旦大学
Abstract: 本发明属于生物分析与检测技术领域，具体为一种基于蛋白质可逆固定的两步酶解鉴定方法。本发明首先在Fe3O4@PEG磁性纳米材料表面修饰醛基、环氧基和三氟乙磺酸酯基等活性基团，再在其外层键合上含有二硫键的基团，得到磁性纳米材料Fe3O4@PEG@ADC；然后采用两步酶解的策略：先用胰蛋白酶进行第一步酶切，使疏水性的膜蛋白暴露出亲水性的羧基；然后再进行还原烷基化，破坏未被酶切的肽段与材料之间的二硫键；从材料表面洗脱下来的残余肽段继续被Glu‑C酶解。实验证明，两步酶解策略对于特殊膜蛋白，如细菌视紫红质，具有很好的酶解效果，在复杂样品的膜蛋白组学研究中也有很好的结果。本发明实用高效，重复性好，稳定性高，在膜蛋白的大规模鉴定中有广阔的应用前景。
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公开(公告)号：CN105400855A
公开(公告)日：2016-03-16
申请号：CN201510820527.3
申请日：2015-11-24
Applicant: 复旦大学
Abstract: 本发明属于生物分析与检测技术领域，具体为一种基于蛋白质可逆固定的两步酶解鉴定方法。本发明首先在Fe3O4@PEG磁性纳米材料表面修饰醛基、环氧基和三氟乙磺酸酯基等活性基团，再在其外层键合上含有二硫键的基团，得到磁性纳米材料Fe3O4@PEG@ADC；然后采用两步酶解的策略：先用胰蛋白酶进行第一步酶切，使疏水性的膜蛋白暴露出亲水性的羧基；然后再进行还原烷基化，破坏未被酶切的肽段与材料之间的二硫键；从材料表面洗脱下来的残余肽段继续被Glu-C酶解。实验证明，两步酶解策略对于特殊膜蛋白，如细菌视紫红质，具有很好的酶解效果，在复杂样品的膜蛋白组学研究中也有很好的结果。本发明实用高效，重复性好，稳定性高，在膜蛋白的大规模鉴定中有广阔的应用前景。
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公开(公告)号：CN104090050B
公开(公告)日：2015-10-28
申请号：CN201410320891.9
申请日：2014-07-08
Applicant: 复旦大学
Abstract: 本发明属于生物分析与检测技术领域，具体为一种基于磁性材料的膜蛋白共价固定方法。本发明利用一锅法合成包有长链聚乙二醇的磁球Fe3O4@PEG，再在PEG的末端羟基上接上三氟乙磺酰基或者将其氧化为醛基。这些活性基团稀疏地分布在磁性材料的表面，与膜蛋白上不同位点的游离氨基发生高效反应，从而将膜蛋白牢固地键合到材料表面。因此，膜蛋白的增溶剂以及磷脂等干扰物便可通过洗涤以及磁性分离的方法被轻松除去，从而达到理想的鉴定效果。实验表明，利用该磁性材料固定膜蛋白具有反应效率高、非特异性吸附小等优点，并成功运用到膜蛋白组的鉴定上。本发明新颖便捷，实用高效，重复性好，稳定性高，具有巨大的推广应用潜力。
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公开(公告)号：CN104090050A
公开(公告)日：2014-10-08
申请号：CN201410320891.9
申请日：2014-07-08
Applicant: 复旦大学
Abstract: 本发明属于生物分析与检测技术领域，具体为一种基于磁性材料的膜蛋白共价固定方法。本发明利用一锅法合成包有长链聚乙二醇的磁球Fe3O4@PEG，再在PEG的末端羟基上接上三氟乙磺酰基或者将其氧化为醛基。这些活性基团稀疏地分布在磁性材料的表面，与膜蛋白上不同位点的游离氨基发生高效反应，从而将膜蛋白牢固地键合到材料表面。因此，膜蛋白的增溶剂以及磷脂等干扰物便可通过洗涤以及磁性分离的方法被轻松除去，从而达到理想的鉴定效果。实验表明，利用该磁性材料固定膜蛋白具有反应效率高、非特异性吸附小等优点，并成功运用到膜蛋白组的鉴定上。本发明新颖便捷，实用高效，重复性好，稳定性高，具有巨大的推广应用潜力。
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公开(公告)号：CN104076111A
公开(公告)日：2014-10-01
申请号：CN201410320892.3
申请日：2014-07-08
Applicant: 复旦大学
IPC: G01N30/06
Abstract: 本发明属于生物分析与检测技术领域，具体为一种用于膜蛋白线鉴定的膜蛋白富集、纯化、酶解一体化装置。该装置由高压泵、六通阀、膜蛋白共价固定反应柱及有关连接组成。所述膜蛋白固定反应柱中填料表面的活性基团能够与膜蛋白游离氨基、羧基发生反应，从而将膜蛋白牢牢固定在反应柱上。本发明利用共价键合的原理将膜蛋白固定在反应柱内，增溶剂以及磷脂等干扰物可通过流动相在线冲洗的方法除去，不会造成额外的样品损失，从而达到理想的鉴定效果。实验表明，利用本发明装置具有反应效率高、非特异性吸附小等优点，并成功运用到大鼠鼠肝组织膜蛋白组的鉴定中。本发明装置结构新颖，实用高效，具有推广应用潜力。
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