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公开(公告)号：CN112375843A
公开(公告)日：2021-02-19
申请号：CN202011073280.0
申请日：2020-10-09
Applicant: 吉林医药学院
IPC: C12Q1/6897 , C12Q1/02
Abstract: 本发明涉及生物医药领域，特别涉及FRT细胞株在制备筛选TRPV4调节剂的制剂或试剂盒中的应用。RT‑PCR和Western blot证实FRT细胞内源性表达TRPV4；倒置荧光显微镜下可观察到ANO1清晰表达在FRT细胞膜上，YFP‑H148Q/I152L清晰表达在FRT细胞的胞浆中，成功构建了共表达ANO1和YFP‑H148Q/I152L的FRT细胞模型；荧光淬灭动力学实验证实该模型可以筛选TRPV4调节剂；该模型可敏感检测细胞内钙浓度变化；Z＇因子为0.728，该模型可高通量筛选TRPV4调节剂。综上，本发明成功构建了一种可以敏感高效筛选TRPV4调节剂的高通量模型。
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公开(公告)号：CN112359136A
公开(公告)日：2021-02-12
申请号：CN202011073293.8
申请日：2020-10-09
Applicant: 吉林医药学院
IPC: C12Q1/6897 , C12Q1/02
Abstract: 本发明涉及生物医药领域，特别涉及FRT细胞株在制备筛选Chrm3调节剂的制剂或试剂盒中的应用。FRT细胞在mRNA及蛋白水平均内源性表达Chrm3；成功构建了稳定共表达ANO1和YFP‑H148Q/I152L的FRT细胞模型；该细胞模型可敏感检测细胞内钙浓度，荧光变化的斜率值与Chrm3调节剂浓度成剂量依赖关系，可用于Chrm3调节剂的筛选；该模型的Z＇因子值为0.678，满足高通量筛选的要求。此细胞模型通过敏感检测钙信号实现了对Chrm3调节剂的高通量筛选，也可应用于对其他与钙离子信号相关GPCR靶点的筛选。
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公开(公告)号：CN112280819A
公开(公告)日：2021-01-29
申请号：CN202011074664.4
申请日：2020-10-09
Applicant: 吉林医药学院
Abstract: 本发明涉及生物医药领域，特别涉及FRT细胞株在制备筛选CaCC调节剂的制剂或试剂盒中的应用。倒置荧光显微镜下观察到ANO1表达在细胞膜上，YFP‑H148Q/I152L表达于胞浆中；该模型具有经典的钙激活氯离子通道的生理特性；成功构建共表达ANO1和YFP‑H148Q/I152L的FRT细胞模型；该模型可筛选CaCC调节剂，荧光变化斜率值与CaCC调节剂浓度成剂量依赖关系；荧光变化斜率值可反映胞浆内Ca2+浓度，该模型可敏感检测胞浆内Ca2+浓度。此细胞模型可以高效敏感检测胞浆内第二信使Ca2+浓度，为Ca2+信号相关靶点的研究提供了一种简便快捷的方法。
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公开(公告)号：CN112322689A
公开(公告)日：2021-02-05
申请号：CN202011073285.3
申请日：2020-10-09
Applicant: 吉林医药学院
Abstract: 本发明涉及生物医药领域，特别涉及FRT细胞株在制备筛选组胺H2受体调节剂的制剂或试剂盒中的应用。FRT细胞在mRNA及蛋白质水平内源性表达H2。倒置荧光显微镜观察到FRT细胞膜和胞浆中均有绿色荧光，证实成功构建共表达CFTR和YFP‑H148Q/I152L细胞模型。荧光淬灭动力学实验证明该模型具有cAMP激活氯离子通道的特性，可用于调节剂的筛选；荧光斜率值与H2受体调节剂成剂量依赖曲线关系，可用于H2受体调节剂的筛选。Z'因子测得0.7，证明所建立的细胞模型可用于高通量筛选且有良好的稳定性。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN112280820A
公开(公告)日：2021-01-29
申请号：CN202011074687.5
申请日：2020-10-09
Applicant: 吉林医药学院
Abstract: 本发明涉及生物医药领域，特别涉及FRT细胞株在制备筛选CFTR调节剂的制剂或试剂盒中的应用。倒置荧光显微镜下观察到CFTR表达在细胞膜上，YFP‑H148Q/I152L表达于胞浆中；成功构建共表达CFTR和YFP‑H148Q/I152L的FRT细胞模型；荧光变化斜率值与CFTR调节剂浓度成剂量依赖关系，该模型可筛选CFTR调节剂；荧光变化斜率值可反映胞浆内cAMP浓度，该模型可敏感检测胞浆内cAMP浓度。
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公开(公告)号：CN112176020B
公开(公告)日：2024-08-20
申请号：CN202011076553.7
申请日：2020-10-10
Applicant: 吉林医药学院
Abstract: 本发明公开了一种钙激活氯离子通道激活剂的筛选方法，包括：分别构建ANO1和YFP‑H148Q/I152L的真核表达载体；将所述真核表达载体分别稳定转染入FRT细胞中，且使所述FRT细胞共表达ANO1和YFP‑H148Q/I152L两种蛋白后，经过多次有限稀释，获取FRT细胞克隆模型；将所述FRT细胞克隆模型传代到黑壁透明底的微孔板中，且使细胞密度为每孔20000个细胞，48h后细胞汇合度达到90％以上；向所述黑壁微孔板中分别加入待测试化合物和碘化钠PBS后测试所述YFP‑H148Q/I152L荧光蛋白的相对荧光强度，当所述相对荧光强度迅速下降时，所述待测试化合物为钙激活氯离子通道激活剂，持续检测相对荧光强度一直保持下降为直接作用于钙激活氯离子通道的激活剂。
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公开(公告)号：CN112359088A
公开(公告)日：2021-02-12
申请号：CN202011073297.6
申请日：2020-10-09
Applicant: 吉林医药学院
IPC: C12Q1/02 , C12N5/10 , C12N15/85 , C12N15/65 , A61K45/00 , A61P9/04 , A61P9/10 , A61P11/00 , A61P35/00 , A61P27/02 , A61P1/04 , A61P29/00 , A61P15/08
Abstract: 本发明涉及生物医药领域，特别涉及FRT细胞株及其在制备检测胞浆内钙离子浓度的制剂或试剂盒中的应用。本发明通过荧光淬灭动力学试验证实该细胞模型可筛选P2ry2调节剂，应用Fura‑2表明该细胞模型可敏感地检测胞浆内钙离子浓度的变化且Ca2+浓度与P2ry2调节剂及相对荧光强度呈剂量依赖关系；Z'因子为0.75，说明该细胞模型可以高通量筛选P2ry2的调节剂且有良好的稳定性与可重复性。
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公开(公告)号：CN112280741A
公开(公告)日：2021-01-29
申请号：CN202011074693.0
申请日：2020-10-09
Applicant: 吉林医药学院
Abstract: 本发明涉及生物医药领域，特别涉及FRT细胞株在制备筛选Piezo1调节剂的制剂或试剂盒中的应用。RT‑PCR、DNA测序比对和Western印迹结果表明，FRT细胞内源性表达Piezo1。ANO1和YFP‑H148Q/I152L表达清晰，位置正确，并且ANO1被激活后模型荧光淬灭，证实转染基因表达的蛋白具有生物学活性，FRT模型细胞构建成功。Fura‑2实验结果证明模型能敏感的反应细胞内钙信号变化。模型Z′因子为0.82，信噪比为13.29：1，可用于Piezo1通道调节剂高通量筛选。
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公开(公告)号：CN112176020A
公开(公告)日：2021-01-05
申请号：CN202011076553.7
申请日：2020-10-10
Applicant: 吉林医药学院
Abstract: 本发明公开了一种钙激活氯离子通道激活剂的筛选方法，包括：分别构建ANO1和YFP‑H148Q/I152L的真核表达载体；将所述真核表达载体分别稳定转染入FRT细胞中，且使所述FRT细胞共表达ANO1和YFP‑H148Q/I152L两种蛋白后，经过多次有限稀释，获取FRT细胞克隆模型；将所述FRT细胞克隆模型传代到黑壁透明底的微孔板中，且使细胞密度为每孔20000个细胞，48h后细胞汇合度达到90％以上；向所述黑壁微孔板中分别加入待测试化合物和碘化钠PBS后测试所述YFP‑H148Q/I152L荧光蛋白的相对荧光强度，当所述相对荧光强度迅速下降时，所述待测试化合物为钙激活氯离子通道激活剂，持续检测相对荧光强度一直保持下降为直接作用于钙激活氯离子通道的激活剂。
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