公开(公告)号：CN112375843A

公开(公告)日：2021-02-19

申请号：CN202011073280.0

申请日：2020-10-09

Applicant: 吉林医药学院

Inventor： 郝峰 ,  李明光 ,  张丽 ,  郑锴 ,  肖云萍 ,  解宇浩 ,  张嘉琪

IPC: C12Q1/6897 ,  C12Q1/02

Abstract: 本发明涉及生物医药领域，特别涉及FRT细胞株在制备筛选TRPV4调节剂的制剂或试剂盒中的应用。RT‑PCR和Western blot证实FRT细胞内源性表达TRPV4；倒置荧光显微镜下可观察到ANO1清晰表达在FRT细胞膜上，YFP‑H148Q/I152L清晰表达在FRT细胞的胞浆中，成功构建了共表达ANO1和YFP‑H148Q/I152L的FRT细胞模型；荧光淬灭动力学实验证实该模型可以筛选TRPV4调节剂；该模型可敏感检测细胞内钙浓度变化；Z＇因子为0.728，该模型可高通量筛选TRPV4调节剂。综上，本发明成功构建了一种可以敏感高效筛选TRPV4调节剂的高通量模型。

公开(公告)号：CN112176020B

公开(公告)日：2024-08-20

申请号：CN202011076553.7

申请日：2020-10-10

Applicant: 吉林医药学院

Inventor： 郝峰 ,  郑锴 ,  李明光 ,  张丽 ,  王双 ,  解宇浩 ,  张嘉琪

IPC: C12Q1/02 ,  C12N15/85 ,  C12N15/65 ,  G01N21/64

Abstract: 本发明公开了一种钙激活氯离子通道激活剂的筛选方法，包括：分别构建ANO1和YFP‑H148Q/I152L的真核表达载体；将所述真核表达载体分别稳定转染入FRT细胞中，且使所述FRT细胞共表达ANO1和YFP‑H148Q/I152L两种蛋白后，经过多次有限稀释，获取FRT细胞克隆模型；将所述FRT细胞克隆模型传代到黑壁透明底的微孔板中，且使细胞密度为每孔20000个细胞，48h后细胞汇合度达到90％以上；向所述黑壁微孔板中分别加入待测试化合物和碘化钠PBS后测试所述YFP‑H148Q/I152L荧光蛋白的相对荧光强度，当所述相对荧光强度迅速下降时，所述待测试化合物为钙激活氯离子通道激活剂，持续检测相对荧光强度一直保持下降为直接作用于钙激活氯离子通道的激活剂。

公开(公告)号：CN112176020A

公开(公告)日：2021-01-05

申请号：CN202011076553.7

申请日：2020-10-10

Applicant: 吉林医药学院

Inventor： 郝峰 ,  李明光 ,  张丽 ,  郑锴 ,  王双 ,  解宇浩 ,  张嘉琪

IPC: C12Q1/02 ,  C12N15/85 ,  C12N15/65 ,  G01N21/64

Abstract: 本发明公开了一种钙激活氯离子通道激活剂的筛选方法，包括：分别构建ANO1和YFP‑H148Q/I152L的真核表达载体；将所述真核表达载体分别稳定转染入FRT细胞中，且使所述FRT细胞共表达ANO1和YFP‑H148Q/I152L两种蛋白后，经过多次有限稀释，获取FRT细胞克隆模型；将所述FRT细胞克隆模型传代到黑壁透明底的微孔板中，且使细胞密度为每孔20000个细胞，48h后细胞汇合度达到90％以上；向所述黑壁微孔板中分别加入待测试化合物和碘化钠PBS后测试所述YFP‑H148Q/I152L荧光蛋白的相对荧光强度，当所述相对荧光强度迅速下降时，所述待测试化合物为钙激活氯离子通道激活剂，持续检测相对荧光强度一直保持下降为直接作用于钙激活氯离子通道的激活剂。