公开(公告)号：CN103898059B

公开(公告)日：2016-08-17

申请号：CN201410078438.1

申请日：2014-03-05

Applicant: 吉林医药学院

Inventor： 郝峰 ,  扈昕虹 ,  方芳 ,  杨敬研 ,  郑锴 ,  曲适 ,  杨娟 ,  王长文 ,  孙宝霄 ,  李艳 ,  许会静 ,  孙美艳 ,  陈爽 ,  于向博 ,  王彦力

IPC: C12N5/10 ,  C12N15/85 ,  C12Q1/02

Abstract: 本发明提供了一种筛选钙激活氯离子通道抑制剂的细胞模型及筛选方法，依次包括如下步骤：（1）构建Anoctamin1或Anocatmin2以及YFP?H148Q/I152L的真核表达载体；（2）将上述两种载体分别稳定转染入FRT细胞中，使FRT细胞共表达YFP?H148Q/I152L和Anoctamin1或Anocatmin2两种蛋白，经过多次有限稀释，获取FRT细胞模型；（3）将FRT细胞模型传代到黑壁透明底的黑壁微孔板中；（4）将待测小分子化合物加入黑壁微孔板中，孵育后加入使细胞内钙离子浓度升高的试剂和高浓度碘离子，通过检测相对荧光强度的变化，可筛选钙激活氯离子通道抑制剂。

公开(公告)号：CN112322689A

公开(公告)日：2021-02-05

申请号：CN202011073285.3

申请日：2020-10-09

Applicant: 吉林医药学院

Inventor： 郝峰 ,  郑锴 ,  王双 ,  杨娟 ,  解宇浩 ,  张嘉琪

IPC: C12Q1/02 ,  C12N5/10 ,  G01N21/64

Abstract: 本发明涉及生物医药领域，特别涉及FRT细胞株在制备筛选组胺H2受体调节剂的制剂或试剂盒中的应用。FRT细胞在mRNA及蛋白质水平内源性表达H2。倒置荧光显微镜观察到FRT细胞膜和胞浆中均有绿色荧光，证实成功构建共表达CFTR和YFP‑H148Q/I152L细胞模型。荧光淬灭动力学实验证明该模型具有cAMP激活氯离子通道的特性，可用于调节剂的筛选；荧光斜率值与H2受体调节剂成剂量依赖曲线关系，可用于H2受体调节剂的筛选。Z'因子测得0.7，证明所建立的细胞模型可用于高通量筛选且有良好的稳定性。

公开(公告)号：CN112280819A

公开(公告)日：2021-01-29

申请号：CN202011074664.4

申请日：2020-10-09

Applicant: 吉林医药学院

Inventor： 郝峰 ,  郑锴 ,  朱靓 ,  陈爽 ,  杨娟 ,  洪啟元 ,  解宇浩 ,  张嘉琪

IPC: C12Q1/02 ,  C12N5/10 ,  G01N21/64

Abstract: 本发明涉及生物医药领域，特别涉及FRT细胞株在制备筛选CaCC调节剂的制剂或试剂盒中的应用。倒置荧光显微镜下观察到ANO1表达在细胞膜上，YFP‑H148Q/I152L表达于胞浆中；该模型具有经典的钙激活氯离子通道的生理特性；成功构建共表达ANO1和YFP‑H148Q/I152L的FRT细胞模型；该模型可筛选CaCC调节剂，荧光变化斜率值与CaCC调节剂浓度成剂量依赖关系；荧光变化斜率值可反映胞浆内Ca2+浓度，该模型可敏感检测胞浆内Ca2+浓度。此细胞模型可以高效敏感检测胞浆内第二信使Ca2+浓度，为Ca2+信号相关靶点的研究提供了一种简便快捷的方法。

公开(公告)号：CN112280741A

公开(公告)日：2021-01-29

申请号：CN202011074693.0

申请日：2020-10-09

Applicant: 吉林医药学院

Inventor： 胡城 ,  郝峰 ,  杨娟 ,  王坤 ,  李颖卓 ,  丁旭 ,  解宇浩 ,  张嘉琪

IPC: C12N5/10 ,  C12N15/12 ,  G01N21/64

Abstract: 本发明涉及生物医药领域，特别涉及FRT细胞株在制备筛选Piezo1调节剂的制剂或试剂盒中的应用。RT‑PCR、DNA测序比对和Western印迹结果表明，FRT细胞内源性表达Piezo1。ANO1和YFP‑H148Q/I152L表达清晰，位置正确，并且ANO1被激活后模型荧光淬灭，证实转染基因表达的蛋白具有生物学活性，FRT模型细胞构建成功。Fura‑2实验结果证明模型能敏感的反应细胞内钙信号变化。模型Z′因子为0.82，信噪比为13.29：1，可用于Piezo1通道调节剂高通量筛选。