公开(公告)号：CN117363613A

公开(公告)日：2024-01-09

申请号：CN202310430521.X

申请日：2023-04-16

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 万建民 ,  李超 ,  孙岩 ,  胡健健 ,  明子恒 ,  单调风 ,  刘裕强 ,  何俊 ,  刘喜

IPC: C12N15/113 ,  C12N9/22 ,  C12N15/55 ,  C12N15/84 ,  A01H5/00 ,  A01H6/46

Abstract: 本发明提供一种紧凑型CRISPR/Cas系统及其应用，包括以下单元：(1)pH‑Cas12j‑U3crRNA：依次设置的水稻OsU3启动子、pre‑crRNA、间隔区Spacer、crRNA、SUP4ter、玉米Ubi1启动子、Cas12j、连接序列、核定位信号、豌豆rbcS‑E9终止子；或(2)pH‑Cas12j‑tRNA：pH‑Cas12j‑tRNA：依次设置的柳枝稷Ubi1启动子、tRNA核酶序列、crRNA、间隔区spacer、tRNA核酶序列、花椰菜花叶病毒CaMV终止子、Ubipro、Cas12j、连接序列、核定位信号、豌豆rbcS‑E9终止子；或(3)pH‑Cas12j‑STU：依次设置的玉米Ubi启动子、Cas12j、连接序列、核定位信号、PolyA、pre‑crRNA、间隔区Spacer、crRNA、豌豆rbcS‑E9终止子；或(4)依次设置的黄叶卷曲病毒强启动子CmYLCVpro、crRNA、间隔区Spacer、花椰菜花叶病毒35S终止子、玉米Ubi1启动子、Csy4、P2A、Cas12j、连接序列、核定位信号、豌豆rbcS‑E9终止子。紧凑型CRISPR/Cas系统应用于基因编辑，能够显著提高编辑效率。

公开(公告)号：CN116063549A

公开(公告)日：2023-05-05

申请号：CN202210859265.1

申请日：2022-07-21

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 万建民 ,  李超 ,  张傲 ,  单调风 ,  孙岩 ,  刘裕强 ,  江玲 ,  刘世家

IPC: C07K19/00 ,  C12N15/62 ,  C12N15/82 ,  C12N15/113 ,  C12N15/55 ,  A01H5/00 ,  A01H6/46

Abstract: 本发明提供一种碱基编辑系统及其应用。该技术基于筛选出来的高效宽窗口腺嘌呤脱氨酶和胞嘧啶脱氨酶，通过在esgRNA的3′添加RNA配体来招募脱氨酶实现高效的碱基编辑；通过串联多个带有不同配体的sgRNA，可以同时在多个位点实现高效的多重碱基编辑。本发明能够实现效率更高、突变类型更丰富的碱基编辑，是一种用途更广的新型植物碱基编辑技术。

公开(公告)号：CN119082191A

公开(公告)日：2024-12-06

申请号：CN202411466005.3

申请日：2024-10-21

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 万建民 ,  李超 ,  纪元 ,  董小鸥 ,  孙岩 ,  周贺杰 ,  田云录

IPC: C12N15/82 ,  C12N9/22 ,  C12N15/113 ,  A01H6/46 ,  A01H5/00

Abstract: 一种适用于植物的基于Fanzor系统的基因编辑工具，包括以下任一单元：(a)pH‑SpuFz1‑STU：Ubi启动子、SpuFz1蛋白编码序列、连接序列、核定位信号、PolyA、SpuFz1的ωRNA、间隔区Spacer、rbcS‑E9终止子；(b)pH‑GtFz1‑STU：Ubi启动子、GtFz1蛋白编码序列、连接序列、核定位信号、PolyA、GtFz1的ωRNA、间隔区Spacer、rbcS‑E9终止子；(c)pH‑NlovFz2‑STU：Ubi启动子、NlovFz2蛋白编码序列、连接序列、核定位信号、PolyA、NlovFz2的ωRNA、间隔区Spacer、rbcS‑E9终止子；(d)pH‑MmeFz2‑STU：Ubi启动子、MmeFz2蛋白编码序列、连接序列、核定位信号、PolyA、MmeFz2的ωRNA、间隔区Spacer、rbcS‑E9终止子。Fanzor系统的效应蛋白体积小，蛋白结构简单，有利于载体构建和细胞间递送。Fanzor产生粘性末端的DSB切口，有利于大片段的删除和插入。该载体组装简单高效，对现有植物基因编辑工具箱有效拓展和补充。

公开(公告)号：CN117683805A

公开(公告)日：2024-03-12

申请号：CN202311681903.6

申请日：2023-12-08

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 万建民 ,  李超 ,  孙岩 ,  胡智超 ,  许根成 ,  纪元 ,  王益华 ,  周时荣 ,  陈亮明

IPC: C12N15/82 ,  C12N9/22 ,  C07K19/00 ,  C12N15/113 ,  A01H6/46 ,  A01H5/00

Abstract: 本发明提供一种可以拆分的紧凑型CRISPR/Cas系统。所述系统包括依次连接的以下单元：(a)Cas12j2‑STU.v4‑N：依次设置的玉米Ubi启动子、nCas12j2的N端、内含肽的N端、连接序列(SGGS linker)、核定位信号(BpNLS)；和(b)Cas12j2‑STU.v4‑C:依次设置的玉米Ubi启动子、内含肽的的C端、nCas12j2的C端、连接序列(SGGS linker)、核定位信号(BpNLS)、PolyA、Cas12j2的pre‑crRNA变体、间隔区Spacer、Cas12j2的crRNA变体、豌豆rbcS‑E9终止子(E9ter)。Cas12j2系统相比于常见的Cas9和Cas12a，体积小、结构简单且特异性较强，在细胞间递送效率上更有优势，有更广泛的适用场景。本方案在高效Cas12j2系统的基础上，选择Cas12j2蛋白上的关键氨基酸残基对Cas12j2基因编辑工具进行进一步拆分，在尽量不影响其效率的基础上缩小系统的整体体积，拓宽系统的递送方式。