过表达特定蛋白的成纤维细胞BALB/c-3T3在杂交瘤制备中的用途

    公开(公告)号:CN119307459A

    公开(公告)日:2025-01-14

    申请号:CN202411462614.1

    申请日:2024-10-19

    Abstract: 本发明属于医学和生物学技术领域,具体公开过表达特定蛋白的成纤维细胞BALB/c‑3T3在杂交瘤制备中的用途。一方面提供成纤维细胞BALB/c‑3T3在制备杂交瘤细胞株中的应用;另一方面提供过表达特定蛋白的成纤维细胞BALB/c‑3T3在杂交瘤细胞株中的应用;再就提供基于成纤维细胞BALB/c‑3T3的杂交瘤的制备方法。本公开中,利用过表达特定蛋白的成纤维细胞BALB/c‑3T3免疫可直接获得目标杂交瘤,具有较高的阳性率,并且单独使用就能实现制备杂交瘤细胞株而无需“蛋白+佐剂”免疫模式,更可以根据研究需求改变过表达的目标蛋白种类以制备不同的目标杂交瘤,另外也可以实现将综合成本降低为原来的一半。

    CD19-CAR-mRNA-LNP粒子及其制备方法和应用

    公开(公告)号:CN116970652A

    公开(公告)日:2023-10-31

    申请号:CN202310970999.1

    申请日:2023-08-03

    Inventor: 梅恒 胡豫 陈钊钊

    Abstract: 本发明涉及CAR转染技术领域,具体公开CD19‑CAR‑mRNA‑LNP粒子及其制备方法和应用。具体公开CAR‑mRNA‑LNP的制备方法,包括获取反应原料:获取脂质‑乙醇溶液,所述脂质‑乙醇溶液中的脂质纳米颗粒至少包括ALC‑0315、MC3、SM102中之一,获取mRNA‑柠檬酸缓冲液,所述mRNA‑柠檬酸缓冲液由柠檬酸缓冲液与mRNA混合形成,所述mRNA的序列如SEQ ID NO:1所示;微流控混合:将脂质‑乙醇溶液、mRNA‑柠檬酸缓冲液通过微米滤膜过滤,通过微流控技术混合制备得CAR‑mRNA‑LNP。还公开CAR‑mRNA‑LNP在制备CAR‑T转染试剂中的应用。本发明技术立足于临床需求,构建了一种基于CD19CAR‑mRNA脂质纳米颗粒(LNP)的转染载体,通过体外转染人原代T细胞生成CD19CAR‑T细胞,降低了成本并简化了CAR‑T制备流程,以期用于临床细胞治疗。

    单个细胞表面抗原表达数量定量方法

    公开(公告)号:CN116679059A

    公开(公告)日:2023-09-01

    申请号:CN202310662465.2

    申请日:2023-06-06

    Abstract: 本发明属于生物检测技术领域,具体公开单个细胞表面抗原表达数量定量方法,S0、绘制标准曲线并构建标准方程;S1、目标细胞处理:对目标细胞进行预处理,并将目标细胞和与荧光定量试剂盒类别相同的荧光素偶联抗体共孵育,所述目标细胞可被相应荧光素偶联抗体检测;S2、获取细胞表面目的抗原分子的数量:利用荧光定量试剂盒,并通过流式仪上机检测目标细胞表面的目的抗原分子的相应荧光通道平均荧光强度MFI,并根据式II:目的抗原分子绝对数目m=10^(b+a*Log10MFI)计算单个目标细胞表面目的抗原分子绝对数目m。本发明使检测单个细胞表面目的抗原分子表达数目更加简单易行,为体内外密切监测肿瘤细胞表面靶抗原表达、免疫细胞表面CAR表达以及其余目标细胞表面目标抗原表达提供可行性方案。

    荧光标记慢病毒载体及其制备方法和应用

    公开(公告)号:CN116355965A

    公开(公告)日:2023-06-30

    申请号:CN202310295684.1

    申请日:2023-03-24

    Inventor: 梅恒 胡豫 陈钊钊

    Abstract: 本发明属于慢病毒标记技术,尤其涉及荧光标记慢病毒载体及其制备方法和应用。荧光标记慢病毒载体的制备方法,包括获取N3‑LVs:将293T细胞与叠氮糖共孵育,通过糖代谢使细胞膜系统叠氮化,制得包膜表面可表达叠氮基团的N3‑293T细胞,将N3‑293T细胞与质粒包装系统共转染形成慢病毒载体N3‑LVs;制备Cy5‑LVs:将N3‑LVs与足量的二环并苯辛炔‑花菁素5(DBCO‑Cy5)混合,共孵育,去除多余二环并苯辛炔‑花菁素5,收集病毒浓缩液,获得荧光标记慢病毒载体Cy5‑LVs。本发明基于生物正交点击化学技术,通过在慢病毒包膜表面共价修饰荧光素,提供了一种简便易行的慢病毒荧光标记技术,成本较低。

    一种靶向多肽纳米探针及其制备方法和应用

    公开(公告)号:CN105963719A

    公开(公告)日:2016-09-28

    申请号:CN201610268526.7

    申请日:2016-04-27

    Inventor: 胡豫 梅恒 魏求哲

    CPC classification number: A61K49/14 A61K49/085

    Abstract: 本发明公开了一种靶向多肽纳米探针,此靶向多肽纳米探针能够特异性靶向动脉粥样斑块及血栓形成部位,可在该靶向部位进行磁共振成像并准确反映动脉粥样斑块在活体内发生以及发展的分子生物学过程,实现了动脉粥样斑块的精确可视化,为早期预防、诊断和治疗动脉粥样硬化疾病提供了更为全面的分子信息。此外,本发明还公开了此靶向多肽纳米探针的制备方法。

    CAR-T治疗白血病并发细胞因子释放综合征的动物模型及其制备方法和应用

    公开(公告)号:CN116762762A

    公开(公告)日:2023-09-19

    申请号:CN202310751294.0

    申请日:2023-06-25

    Abstract: 本发明涉及白血病的研究领域,具体公开CAR‑T治疗白血病并发细胞因子释放综合征的动物模型及其制备方法和应用。CAR‑T治疗白血病并发细胞因子释放综合征的动物模型的制备方法,包括制取CD19CAR‑T细胞:外周血单个核细胞分离,T细胞磁珠分选,T细胞激活,慢病毒感染,CAR‑T细胞扩增;构建高低剂量CAR‑T回输后的CRS动物模型:将Nalm‑6细胞系植入动物活体内,进行白血病瘤负荷,获得白血病瘤负荷的活体动物,将CD19CAR‑T细胞系注射入白血病瘤负荷的活体动物中。CAR‑T治疗白血病并发细胞因子释放综合征的动物模型的新用途。本发明通过使用重度联合免疫缺陷小鼠和接种高低负荷肿瘤细胞、回输不同剂量CAR‑T细胞,构建出能模拟临床CRS的体内模型,为临床发掘更有效的干预措施提供科研指导。

    PECAM-1靶向性诊疗一体化纳米探针及其制备方法和应用

    公开(公告)号:CN116370660A

    公开(公告)日:2023-07-04

    申请号:CN202310295680.3

    申请日:2023-03-24

    Abstract: 本发明属于纳米探针技术领域,具体公开PECAM‑1靶向性诊疗一体化纳米探针及其制备方法和应用。包括获取PECAM‑1_4G6mAb:将肼基烟酰胺与PECAM‑1_4G6在酸性环境下反应,将反应所得产物过滤后在还原剂条件下与放射性核素洗液反应,获得PECAM‑1_4G6mAb;获取αPECAM‑1_AT@HCNPs:向HCNPs纳米粒的水溶液中加入足量N,N'‑碳酸二琥珀酰亚胺基,加入PECAM‑1_4G6mAb,室温反应,得到αPECAM‑1‑HCNPs纳米粒水溶液,然后将αPECAM‑1_HCNPs纳米粒子与抗凝血酶等比例共同溶解,使抗凝血酶通过静电作用吸附负载至PECAM‑1_HCNPs纳米粒子上,纯化获得αPECAM‑1_AT@HCNPs。本发明:利用具有适合CAR‑T治疗时间窗半衰期(6~8天)的核素标记单链抗体4G6早期捕捉CRS靶器官微血管显影。

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