公开(公告)号：CN101777122B

公开(公告)日：2012-01-04

申请号：CN201010115606.1

申请日：2010-03-02

Applicant: 中国海洋大学

Inventor： 姬光荣 ,  郑海永 ,  张浩 ,  王国宇 ,  于志刚

IPC: G06K9/54 ,  C12N1/12 ,  C12R1/89

Abstract: 本发明提供一种角毛藻显微图像细胞目标提取方法，包括以下步骤：a.将角毛藻原始图像转换为灰度图像；b.构建灰度图像方向角模型，分别构成两幅灰度图像；c.对两幅灰度图像分别采用增强大津法自动阈值二值化后再进行逻辑与运算；d.对所得到的二值图像做双向滤波和中值滤波以去掉二值图像中小的噪声点；e.进行形态学膨胀操作以连接目标细胞断裂的边缘；f.提取二值图像的最大轮廓并填充后再进行形态学腐蚀操作；g.用腐蚀后的二值图像与原始图像做逻辑与运算，得到细胞目标图像。本发明方法能够从带有泥沙、残骸等干扰物的角毛藻显微图像中较为精确的提取目标细胞，提高效率和识别准确率。

公开(公告)号：CN101130820B

公开(公告)日：2011-05-04

申请号：CN200710121496.8

申请日：2007-09-07

Applicant: 中国海洋大学

Inventor： 于志刚 ,  何闪英 ,  赵丽媛 ,  孙静 ,  米铁柱 ,  甄毓

IPC: C12Q1/68

Abstract: 本发明公开了一种中肋骨条藻PCNA基因检测方法，包括：a.提取中肋骨条藻的RNA；b.分离并克隆中肋骨条藻PCNA基因部分序列，通过3’RACE对获得的中肋骨条藻PCNA序列进行3’端延伸，获得750～850bp的PCNA序列；c.根据获得的750～850 bp的PCNA序列构建标准曲线，通过标准曲线检测待测中肋骨条藻PCNA基因。使用本发明中肋骨条藻PCNA基因检测方法，可以通过中肋骨条藻PCNA基因检测估算浮游藻类生产力、研究浮游藻种群变迁、构建生态动力学模型乃至赤潮预测，克服现有技术中单一品种浮游藻现场基本生态学参数无法测定的缺陷。

公开(公告)号：CN101838700A

公开(公告)日：2010-09-22

申请号：CN201010184785.4

申请日：2010-05-28

Applicant: 中国海洋大学

Inventor： 米铁柱 ,  孙静 ,  甄毓 ,  于志刚

IPC: C12Q1/68 ,  C12Q1/04 ,  G01N27/447

Abstract: 本发明公开了一种浮游植物群落结构的检测方法，其中，包括以下步骤：a、浮游植物水样采集，b、DNA的提取，c、PCR及琼脂糖电泳检测，d、使用变性梯度凝胶电泳技术进行浮游植物群落结构分析，e、图形处理，f、数据分析。本发明中PCR产物分析采用8％的聚丙烯酰胺凝胶，变性剂浓度从35％到50％(100％的变性剂为7M的尿素和40％的去离子甲酰胺的混合物)，150V，1×TAE缓冲液中电泳6h；或者，PCR产物分析采用10％的聚丙烯酰胺凝胶，变性剂浓度从30％到55％，150V，1×TAE缓冲液中电泳8h。本发明可精确检测浮游植物群落的结构组成，有利于浮游植物赤潮的爆发预警。

公开(公告)号：CN101831502A

公开(公告)日：2010-09-15

申请号：CN201010184812.8

申请日：2010-05-28

Applicant: 中国海洋大学

Inventor： 孙静 ,  米铁柱 ,  甄毓 ,  于志刚

IPC: C12Q1/68 ,  C12Q1/04 ,  G01N27/447

Abstract: 本发明公开了一种变性梯度凝胶电泳技术的使用方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)藻细胞搜集，(2)总DNA的提取，(3)PCR引物设计及优化，(4)琼脂糖电泳检测，(5)变性梯度凝胶的制备，(6)电泳条件的优化，(7)运用变性梯度凝胶电泳技术对微藻进行分析。从GenBank中下载常见微藻的18S？rDNA，28S？rDNA及ITS区序列；运用DNAStar软件进行MegAlign分析，选择序列高变区；针对高变区两侧的保守区用Primerpremier？5.0进行引物设计；然后对所设计的引物用Oligo软件对各参数进行评估，选出最优引物进行合成。本发明可精确检测浮游植物群落的结构组成，有利于浮游植物赤潮的爆发预警。

公开(公告)号：CN1632577B

公开(公告)日：2010-09-01

申请号：CN200410075535.1

申请日：2004-12-17

Applicant: 中国海洋大学

Inventor： 于志刚 ,  李荣秀 ,  蔡青松 ,  米铁柱 ,  甄毓

IPC: G01N33/50 ,  C12Q1/68

Abstract: 本发明公开了一种锥状斯氏藻的检测探针，属于核酸检测领域。具体是针对锥状斯氏藻的rRNA特定区域合成以S1酶保护分析探针为核心的一组探针，联合S1酶保护分析和夹心杂交技术实现对锥状斯氏藻rRNA的定性定量检测。所述检测探针包括三条相互关联的寡核苷酸探针：S1酶保护分析探针、抓捕探针、信号探针或者连接探针。本发明探针适用性好，大大方便了特异探针的寻找和实现。本发明的稳定性远远高于夹心杂交技术。

公开(公告)号：CN101777122A

公开(公告)日：2010-07-14

申请号：CN201010115606.1

申请日：2010-03-02

Applicant: 中国海洋大学

Inventor： 姬光荣 ,  郑海永 ,  张浩 ,  王国宇 ,  于志刚

IPC: G06K9/54 ,  C12N1/12 ,  C12R1/89

Abstract: 本发明提供一种角毛藻显微图像细胞目标提取方法，包括以下步骤：a.将角毛藻原始图像转换为灰度图像；b.构建灰度图像方向角模型，分别构成两幅灰度图像；c.对两幅灰度图像分别采用增强大津法自动阈值二值化后再进行逻辑与运算；d.对所得到的二值图像做双向滤波和中值滤波以去掉二值图像中小的噪声点；e.进行形态学膨胀操作以连接目标细胞断裂的边缘；f.提取二值图像的最大轮廓并填充后再进行形态学腐蚀操作；g.用腐蚀后的二值图像与原始图像做逻辑与运算，得到细胞目标图像。本发明方法能够从带有泥沙、残骸等干扰物的角毛藻显微图像中较为精确的提取目标细胞，提高效率和识别准确率。

公开(公告)号：CN101130820A

公开(公告)日：2008-02-27

申请号：CN200710121496.8

申请日：2007-09-07

Applicant: 中国海洋大学

Inventor： 于志刚 ,  何闪英 ,  赵丽媛 ,  孙静 ,  米铁柱 ,  甄毓

IPC: C12Q1/68

Abstract: 本发明公开了一种中肋骨条藻PCNA基因检测方法，包括：a.提取中肋骨条藻的RNA；b.分离并克隆中肋骨条藻PCNA基因部分序列，通过3’RACE对获得的中肋骨条藻PCNA序列进行3’端延伸，获得750～850bp的PCNA序列；c.根据获得的750～850bp的PCNA序列构建标准曲线，通过标准曲线检测待测中肋骨条藻PCNA基因。使用本发明中肋骨条藻PCNA基因检测方法，可以通过中肋骨条藻PCNA基因检测估算浮游藻类生产力、研究浮游藻种群变迁、构建生态动力学模型乃至赤潮预测，克服现有技术中单一品种浮游藻现场基本生态学参数无法测定的缺陷。

公开(公告)号：CN100357739C

公开(公告)日：2007-12-26

申请号：CN200510109493.3

申请日：2005-10-24

Applicant: 中国海洋大学

Inventor： 米铁柱 ,  甄毓 ,  亓海刚 ,  孙静 ,  何闪英 ,  赵丽媛 ,  于志刚

IPC: G01N33/569 ,  G01N33/558

Abstract: 本发明描述了一种基于胶体金免疫层析分析技术(gold immunochromato graphy assay，GICA)的半定量检测赤潮异湾藻试纸条。包括塑料载体板、硝酸纤维素膜和玻璃纤维素膜。检测试纸条硝酸纤维层、玻璃纤维层分别用胶固定在塑料载体板上；检测试纸条硝酸纤维膜上设有赤潮异湾藻抗原分级标记线、质控线；吸水玻璃纤维素膜层置于硝酸纤维膜检测层右端上方；该载体中部设有硝酸纤维膜检测层，在该检测层与加样端吸水层交界处，设有载有胶体金标记的兔抗赤潮异湾藻抗体的玻璃纤维素膜抗体标记层。本发明为常规环境监测、渔业养殖水体检测、以及赤潮生效过程监测的现场实验，提供快速简便的对赤潮多发藻进行半定量的检测方法。

公开(公告)号：CN1786716A

公开(公告)日：2006-06-14

申请号：CN200510109495.2

申请日：2005-10-24

Applicant: 中国海洋大学

Inventor： 米铁柱 ,  孙静 ,  甄毓 ,  亓海刚 ,  何闪英 ,  赵丽媛 ,  于志刚

IPC: G01N33/569 ,  G01N33/558 ,  G01N33/531 ,  G01N33/52

Abstract: 本发明描述了一种基于胶体金免疫层析分析技术(gold immuno chromato graphy assay，GICA)的半定量检测角毛藻试纸条。包括塑料载体板、硝酸纤维素膜和玻璃纤维素膜。检测试纸条硝酸纤维层、玻璃纤维层分别用胶固定在塑料载体板上；检测试纸条硝酸纤维膜上设有角毛藻抗原分级标记线、质控线；吸水玻璃纤维素膜层置于硝酸纤维膜检测层右端上方；该载体中部设有硝酸纤维膜检测层，在该检测层与加样端吸水层交界处，设有载有胶体金标记的兔抗角毛藻抗体的玻璃纤维素膜抗体标记层。本发明为常规环境监测、渔业养殖水体检测、以及赤潮生效过程监测的现场实验，提供快速简便的对赤潮多发藻进行半定量的检测方法。

公开(公告)号：CN1760674A

公开(公告)日：2006-04-19

申请号：CN200410067110.6

申请日：2004-10-13

Applicant: 中国海洋大学 ,  上海交通大学

Inventor： 于志刚 ,  李荣秀 ,  辛泽毓 ,  亓海刚 ,  米铁柱

IPC: G01N33/543 ,  G01N33/532

Abstract: 公开了一种检测待测样品中诺氏海链藻数量的免疫学方法，包括步骤：(a)使固定有诺氏海链藻细胞裂解碎片的固相载体同时与待测样品以及抗诺氏海链藻抗体接触；(b)将固相载体与待测样品和抗诺氏海链藻抗体分开；(c)检测与固相载体结合的抗诺氏海链藻抗体的量，所述固定在固相载体上的诺氏海链藻细胞裂解碎片与待测样品中的诺氏海链藻细胞竞争结合抗诺氏海链藻抗体，而且存在于所述待测样品中的诺氏海链藻细胞数目是根据抗诺氏海链藻抗体与固定在固相载体上的诺氏海链藻细胞裂解碎片结合或不结合的相对程度测定的。还公开了用于该检测方法的试剂盒及其用途。