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公开(公告)号：CN105624295B
公开(公告)日：2020-02-07
申请号：CN201610055659.6
申请日：2016-01-28
Applicant: 中国海洋大学
IPC: C12Q1/6851 , C12R1/89
Abstract: 本发明公开了一种多形微眼藻荧光定量PCR检测方法，其中，包括A、藻种培养及收集，B、藻类总DNA的提取，C、核糖体18S rDNA的PCR扩增，D、电泳检测及测序，其特征在于，进一步包括如下步骤：E、多形微眼藻荧光定量PCR特异性引物的设计和验证，F、多形微眼藻18S rDNA质粒标准品制备，G、多形微眼藻细胞‑质粒标准曲线的建立，H、环境样品中多形微眼藻的定量。本发明利用多形微眼藻的特异性引物通过荧光定量PCR技术对海水中的多形微眼藻进行检测，在确保准确性的基础上，不仅提高了灵敏度，而且实现了样品在短时间内进行大批次处理的目的，大大缩短了工作时间，为实现对多形微眼藻进行快速、准确的定性定量研究提供了强大的工具。
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公开(公告)号：CN102115779B
公开(公告)日：2013-05-08
申请号：CN201010580036.3
申请日：2010-12-09
Applicant: 中国海洋大学
Abstract: 本发明公开了一种用于检测赤潮藻种类和数量的检测方法，其中，包括联吡啶钌标记寡核苷酸探针的步骤、构建标准曲线的步骤和样品检测的步骤，具体为：将联吡啶钌标记探针(Bio-NPA-Ru)与目标藻细胞中的rRNA进行杂交反应，经核酸S1酶酶切后去除掉不匹配或游离的Bio-NPA-Ru探针；剩余的杂交复合体变性后，带有生物素标记的Bio-NPA-Ru探针与链霉亲和素包被的磁珠相结合，磁珠被工作电极下面的磁极吸附于电极表面，缓冲液去除多余成分后，加入三丙胺溶液液，在电极加压的情况下启动电致化学发光反应。从而建立定量关系实现对目标藻的定量检测。本发明灵敏度高，重现性好，连续可测，操作简便，易于控制，分析时间短。
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公开(公告)号：CN1298865C
公开(公告)日：2007-02-07
申请号：CN200410067807.3
申请日：2004-11-04
Abstract: 一种赤潮异弯藻的检测探针，属于核酸检测领域。用于对该藻进行S1酶保护分析和夹心杂交检测，具体包括三条相互关联的寡核苷酸探针：S1酶保护分析探针，在进行生物信息学比对分析时，仅与赤潮异弯藻核糖体小亚基150～300区域核苷酸互补，而与其它藻核糖体RNA无同源性，长度为59bp，在一定的条件下可特异性结合于赤潮异弯藻的rRNA上，序列为：5’-GGCAGAAACTTGAATGAACCATCGACCGAAGTCGATTCGCACAGTTACTATGATTCACC。本发明探针适用性好，大大方便了特异探针的寻找和实现。本发明的稳定性远远高于夹心杂交技术。
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公开(公告)号：CN1786715A
公开(公告)日：2006-06-14
申请号：CN200510109494.8
申请日：2005-10-24
Applicant: 中国海洋大学
IPC: G01N33/569 , G01N33/558 , G01N33/531 , C12Q1/02
Abstract: 本发明描述了一种基于胶体金免疫层析分析技术(gold immuno chromato graphy assay，GICA)的半定量检测裸甲藻试纸条。包括塑料载体板、硝酸纤维素膜和玻璃纤维素膜。检测试纸条硝酸纤维层、玻璃纤维层分别用胶固定在塑料载体板上；检测试纸条硝酸纤维膜上设有裸甲藻抗原分级标记线、质控线；吸水玻璃纤维素膜层置于硝酸纤维膜检测层右端上方；该载体中部设有硝酸纤维膜检测层，在该检测层与加样端吸水层交界处，设有载有胶体金标记的兔抗裸甲藻抗体的玻璃纤维素膜抗体标记层。本发明为常规环境监测、渔业养殖水体检测、以及赤潮生效过程监测的现场实验，提供快速简便的对赤潮多发藻进行半定量的检测方法。
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公开(公告)号：CN1661092A
公开(公告)日：2005-08-31
申请号：CN200410075533.2
申请日：2004-12-17
Applicant: 中国海洋大学
IPC: C12Q1/68
Abstract: 本发明公开了一种共生藻的检测探针，属于核酸检测领域。具体针对共生藻的rRNA特定区域合成以S1酶保护分析探针为核心的一组探针，联合S1酶保护分析和夹心杂交技术实现对共生藻rRNA的定性定量检测。所述检测探针包括三条相互关联的寡核苷酸探针：S1酶保护分析探针、抓捕探针、信号探针或者连接探针。本发明探针适用性好，大大方便了特异探针的寻找和实现。本发明的稳定性远远高于夹心杂交技术。
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公开(公告)号：CN1624477A
公开(公告)日：2005-06-08
申请号：CN200410075536.6
申请日：2004-12-17
Applicant: 中国海洋大学
Abstract: 本发明公开了一种红色裸甲藻的检测探针，属于核酸检测领域。具体针对红色裸甲藻的rRNA特定区域合成以S1酶保护分析探针为核心的一组探针，联合S1酶保护分析和夹心杂交技术实现对红色裸甲藻rRNA的定性定量检测。所述检测探针包括三条相互关联的寡核苷酸探针：S1酶保护分析探针、抓捕探针、信号探针或者连接探针。本发明探针适用性好，大大方便了特异探针的寻找和实现。本发明的稳定性远远高于夹心杂交技术。
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公开(公告)号：CN115961084A
公开(公告)日：2023-04-14
申请号：CN202310031737.9
申请日：2023-01-10
Applicant: 中国海洋大学
IPC: C12Q1/6895 , C12Q1/6844 , C12Q1/04 , C12N15/11 , C12R1/89
Abstract: 本发明提供一种尖刺拟菱形藻的快速显色检测方法，其中使用的引物组包含如序列为SEQ ID NO.1：ATTGCGCTGTACTGGTCT的引物F3、序列为SEQ ID NO.2：TAGTGCGCAAACCAACAA的引物B3、序列为SEQ ID NO.3：GTAAACGATGGGCACCCTCACATGTTTGGGTGGAA TCTGT的引物FIP、序列为SEQ ID NO.4：TTAGAGTGTTCAAAGCAG GCTTATAGGTCCTATATCATTATTCCATGC的引物BIP和序列为SEQ ID NO.5：GTACGACAACTTAATGC的引物LF。本发明提出了一种尖刺拟菱形藻的快速检测方法，在核酸提取阶段无需复杂的DNA提取步骤，在常温条件下，30分钟内即可实现藻种核酸的粗提；针对尖刺拟菱形藻18SrDNA V4区序列设计出了一组特异性引物，利用该引物组配合羟基萘酚蓝染色剂，在63℃恒温条件下，可以对靶序列在30到40分钟实现扩增并完成检测，特异性好，灵敏度高，且无需复杂的变温过程以及精密仪器，大大简化了赤潮藻分子检测的流程，适合现场样品的快速检测。
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公开(公告)号：CN1793920B
公开(公告)日：2010-11-10
申请号：CN200510045194.8
申请日：2005-11-18
Applicant: 中国海洋大学
Abstract: 本发明涉及海洋浮游植物检测的技术领域，是一种基于双特异分子探针分析方法的全自动生化分析仪，包括采样预处理模块，裂解破碎模块，探针液槽模块，升降盘模块，恒温模块，单、多吸液头模块，定量移液和加液模块，恒温震荡模块，洗板模块，酶标模块，三维机械手，气、液控制系统，电器控制系统等装置。本发明的优点是可以全自动的流程，实现近海水域的表、中、深三层水样的藻类检测与分析，可以并行测定多达20个水样，一个水样中可测定多种优势藻类的含量，克服了传统方法人力、物力上的浪费，减小了由于复杂的手工操作带来的人为误差，提高了检测的速度和精度。本发明不仅能船装载使用，也可置于岸上使用。
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