可控性精氨酸偶联壳聚糖的制备方法

    公开(公告)号:CN103539866A

    公开(公告)日:2014-01-29

    申请号:CN201210235886.9

    申请日:2012-07-09

    Abstract: 本发明公开了一种可控性精氨酸偶联壳聚糖的制备方法,包括如下步骤:(1)精氨酸酯化;(2)对精氨酸酯进行氨基保护得到氨基保护精氨酸酯;(3)脱酯反应;(4)氨基保护的精氨酸修饰壳聚糖:将壳聚糖溶于醋酸水溶液中,加入氨基保护的精氨酸与偶联剂,室温搅拌,超滤或透析,冷冻干燥,得到氨基保护的精氨酸修饰的壳聚糖;(5)脱氨基保护得到可控制精氨酸偶联壳聚糖。本发明的方法能够控制精氨酸的取代度,并且证明在精氨酸的取代度为21.9-45.5%的范围内时,精氨酸修饰的壳聚糖载体的基因递送能力增强,基因表达效率显著性提高。本发明的方法制备简单。

    含人组织因子途径抑制因子和GFP的真核双表达载体及构建方法

    公开(公告)号:CN101955974A

    公开(公告)日:2011-01-26

    申请号:CN200910070830.0

    申请日:2009-10-16

    Abstract: 本发明公开了含人组织因子途径抑制因子和GFP的真核双表达载体及构建方法,载体是用下述方法制成:以序列表SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3所述序列为PCR引物,以pIRES-TFPI为模板,扩增出人组织因子途径抑制因子基因阅读框架,回收得SEQ ID NO.1所述的核苷酸序列,与pIRES2-AcGFP1-Nuc加入T4连接酶进行反应制成。本发明的载体,使得TFPI和GFP的基因从同一个双顺反子mRNA互不干扰地同时表达,实现了通过观察GFP即可确定TFPI基因表达的目的,同时经检测证明了该载体不但能够在细胞内互不干扰的同时表达TFPI和GFP基因而且能够分泌TFPI蛋白到细胞外。

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