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公开(公告)号：CN117126875A
公开(公告)日：2023-11-28
申请号：CN202311362429.0
申请日：2023-10-20
Applicant: 中国农业科学院生物技术研究所
IPC: C12N15/81 , C12N15/90 , C12N15/31 , C12N15/113
Abstract: 本发明涉及农业生物技术领域，具体涉及一种适用于毕赤酵母的4‑异丙基苯甲酸诱导表达系统及诱导表达方法。本发明选用强组成型启动子PGCW14，并筛选了含有操纵基因CuO且具有启动活性的启动子PGCWCuO1；同时通过截短强启动子PGAP，筛选了可调控阻遏蛋白CymR适度表达的表达元件PGAP200/cymR。基于PGCWCuO1和PGAP200/cymR搭建新型毕赤酵母严谨性诱导表达系统。根据本申请的毕赤酵母诱导表达系统在表达重组蛋白时，以廉价的葡萄糖作为碳源和低浓度廉价无毒的4‑异丙基苯甲酸作为诱导剂，即可实现重组蛋白尤其是对毕赤酵母细胞有毒性的重组蛋白安全低成本生产。
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公开(公告)号：CN105734061B
公开(公告)日：2019-07-23
申请号：CN201610179949.1
申请日：2016-03-25
Applicant: 中国农业科学院生物技术研究所
IPC: C12N15/113 , C12N15/81 , C12N1/19
Abstract: 本发明公开了鼠李糖诱导型启动子及其应用。本发明首先公开了从毕赤酵母中分离的核苷酸序列为SEQ ID NO.5所示的鼠李糖诱导型启动子，验证了所述鼠李糖诱导型启动子启动外源基因表达的强度，并确证了能有效调控目的基因表达的最短启动子。本发明还公开了含有所述鼠李糖诱导型启动子的重组真核表达载体及宿主细胞。本发明进一步提供了一种调控目的异源性基因在毕赤酵母中进行适时表达的方法，包括：用所述的鼠李糖诱导型启动子和待表达的目的异源性基因构建真核表达载体；将构建的真核表达载体转化到酵母中得到重组酵母；通过控制培养基中诱导物鼠李糖的添加量和添加时间来调控目的蛋白适时的表达，实现外源蛋白表达的精确控制。
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公开(公告)号：CN106350461A
公开(公告)日：2017-01-25
申请号：CN201610582793.1
申请日：2016-07-21
Applicant: 中国农业科学院生物技术研究所
Abstract: 本发明公开了根瘤农杆菌介导的特异腐质霉遗传转化方法及其表达载体，属于特异腐质霉的遗传转化领域。本发明特异腐质霉遗传转化方法，包括：(1)构建目的基因的表达质粒；(2)将表达质粒转化根瘤农杆菌感受态细胞，得到转入目的质粒的根瘤农杆菌，将其扩大培养得到根瘤农杆菌菌液；(3)将特异腐质霉涂布在平板上进行预萌发；(5)将根瘤农杆菌菌液与已萌发有菌丝的特异腐质霉进行共培养，再通过选择性培养，获得转化子。本发明利用上述方法构建突变库并获得一株纤维素酶高产突变株Y1-T4。本发明转化方法操作简单，稳定，使得在特异腐质霉中进行同源和异源基因表达成为可能，为建立特异腐质霉的高效表达体系提供了必要的技术保障。
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公开(公告)号：CN119193525B
公开(公告)日：2025-03-04
申请号：CN202411700314.2
申请日：2024-11-26
Applicant: 中国农业科学院生物技术研究所
Abstract: 本发明公开了α‑葡聚糖磷酸化酶5CC5单位点突变体E535V及其制备方法和应用。本发明针对纤维素制淀粉的关键酶元件存在催化效率低、稳定性和适配性差、异源表达难等问题，通过宏基因组和公共数据库的大数据分析及生物信息学方法，精准挖掘新型纤维素降解和淀粉合成关键酶元件，挖掘鉴定得到来自烟草的α‑葡聚糖磷酸化酶，其较土豆来源的PGP具有更好的酶活及淀粉合成功能；本发明进一步对该α‑葡聚糖磷酸化酶的Cap结构域进行单位点突变，结果发现将氨基酸序列为SEQ ID No.1所示的烟草来源的α‑葡聚糖磷酸化酶进行E535V单位点突变所获得的单位点突变体，其酶活以及表达量均显著高于野生型α‑葡聚糖磷酸化酶。
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公开(公告)号：CN119177224A
公开(公告)日：2024-12-24
申请号：CN202411700313.8
申请日：2024-11-26
Applicant: 中国农业科学院生物技术研究所
Abstract: 本发明公开了α‑葡聚糖磷酸化酶突变体及其制备方法和应用。本发明针对纤维素制淀粉的关键酶元件存在催化效率低、稳定性和适配性差、异源表达难等问题，通过宏基因组和公共数据库的大数据分析及生物信息学方法，精准挖掘新型纤维素降解和淀粉合成关键酶元件挖掘鉴定得到来自烟草的α‑葡聚糖磷酸化酶，该酶较土豆来源的α‑葡聚糖磷酸化酶具有更好的酶活及淀粉合成功能；本发明进一步对来源于烟草的α‑葡聚糖磷酸化酶的Cap结构域进行单位点突变，结果发现将氨基酸序列为SEQ ID No.1所示的烟草来源的α‑葡聚糖磷酸化酶进行N563T单位点突变所获得的单位点突变体，其酶活以及表达量均显著高于野生型α‑葡聚糖磷酸化酶。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN112195190A
公开(公告)日：2021-01-08
申请号：CN202011414501.6
申请日：2020-12-07
Applicant: 中国农业科学院生物技术研究所
Abstract: 本发明公开了来源于贝莱斯芽孢杆菌质粒的复制元件及其应用。本发明首先提供了从贝莱斯菌株内生性质粒中分离鉴定质粒的复制元件，其核苷酸序列为SEQ ID NO.2所示。本发明进一步将从贝莱斯菌株内生性质粒中分离鉴定质粒的复制元件应用于构建芽孢杆菌表达系统，将外源基因在芽孢杆菌中进行高效表达；进一步的，本发明提供了一种芽孢杆菌表达载体，包括启动子、在芽孢杆菌中进行自主复制的复制元件、在大肠杆菌中进行自主复制的复制元件以及在芽孢杆菌中表达的外源基因。应用本发明提供的复制元件能够介导外源基因在芽孢杆菌中高拷贝复制并高强度表达。
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公开(公告)号：CN111733169B
公开(公告)日：2020-12-22
申请号：CN202010708586.2
申请日：2020-07-22
Applicant: 中国农业科学院生物技术研究所
Abstract: 本发明公开了调控真菌木质纤维素降解酶系表达的元件及其应用。本发明首次发现转录因子HIKLF12在特异腐质霉木质纤维素降解酶系表达过程中具有重要的全局调控作用，Hiklf12基因的高表达能够明显提高特异腐质霉中多种纤维素酶、半纤维素酶和木质素降解酶的表达量。由此，将Hiklf12基因在特异腐质霉中高表达能够构建特异腐质霉的纤维素酶高产工程菌株或显著提高特异腐质霉的纤维素酶的工业生产水平，有效降低工业生产成本，在生物质能源开发、酿造工业、纺织工业及高效外源基因表达等领域具有重要的应用前景。
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公开(公告)号：CN106350461B
公开(公告)日：2019-08-23
申请号：CN201610582793.1
申请日：2016-07-21
Applicant: 中国农业科学院生物技术研究所
Abstract: 本发明公开了根瘤农杆菌介导的特异腐质霉遗传转化方法及其表达载体，属于特异腐质霉的遗传转化领域。本发明特异腐质霉遗传转化方法，包括：(1)构建目的基因的表达质粒；(2)将表达质粒转化根瘤农杆菌感受态细胞，得到转入目的质粒的根瘤农杆菌，将其扩大培养得到根瘤农杆菌菌液；(3)将特异腐质霉涂布在平板上进行预萌发；(5)将根瘤农杆菌菌液与已萌发有菌丝的特异腐质霉进行共培养，再通过选择性培养，获得转化子。本发明利用上述方法构建突变库并获得一株纤维素酶高产突变株Y1‑T4。本发明转化方法操作简单，稳定，使得在特异腐质霉中进行同源和异源基因表达成为可能，为建立特异腐质霉的高效表达体系提供了必要的技术保障。
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公开(公告)号：CN105695492A
公开(公告)日：2016-06-22
申请号：CN201610179466.1
申请日：2016-03-25
Applicant: 中国农业科学院生物技术研究所
Abstract: 本发明公开了果胶裂解酶优化基因及其表达载体和应用。本发明首先在不改变果胶裂解酶氨基酸序列的前提下，通过包括密码子使用频率和分布,密码子适应指数CAI，改变特定基因区域的GC含量等多种序列优化方式，得到3个果胶裂解酶优化基因。进一步本发明将上述3个果胶裂解酶基因和1个野生型基因转入到毕赤酵母中进行表达，最终筛选出在毕赤酵母中的分泌表达量显著提高、酶活力最强的核苷酸序列为SEQ ID No.2所示的果胶裂解酶优化基因。本发明果胶裂解酶优化基因所表达的果胶裂解酶能够有效地降解苹果中的果胶类物质，提高出汁率，为进一步工业化扩大生产奠定了基础。
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公开(公告)号：CN104293812A
公开(公告)日：2015-01-21
申请号：CN201410528596.2
申请日：2014-10-09
Applicant: 中国农业科学院生物技术研究所
Abstract: 本发明公开了耐热中性纤维素酶Cel6C及其编码基因和应用。本发明从特异腐质霉中分离得到耐热中性纤维素酶编码基因，其核苷酸序列为SEQ ID No.3所示，所编码的氨基酸序列为SEQ ID No.4所示；本发明进一步提供了成熟耐热中性纤维素酶，其氨基酸序列为SEQ ID No.2所示，其编码的核苷酸序列为SEQ ID No.1所示。本发明还公开了含有所述编码基因的重组表达载体和重组宿主细胞。本发明耐热中性纤维素酶热稳定性优良，在中性和碱性范围内具有较高酶活力，可高效降解纤维素、半纤维素、地衣多糖、羧甲基纤维素钠、大分子多糖、蛋白质或脂类等物质，能够应用于酿酒、纺织、能源工业等领域。
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