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公开(公告)号：CN117126875A
公开(公告)日：2023-11-28
申请号：CN202311362429.0
申请日：2023-10-20
Applicant: 中国农业科学院生物技术研究所
IPC: C12N15/81 , C12N15/90 , C12N15/31 , C12N15/113
Abstract: 本发明涉及农业生物技术领域，具体涉及一种适用于毕赤酵母的4‑异丙基苯甲酸诱导表达系统及诱导表达方法。本发明选用强组成型启动子PGCW14，并筛选了含有操纵基因CuO且具有启动活性的启动子PGCWCuO1；同时通过截短强启动子PGAP，筛选了可调控阻遏蛋白CymR适度表达的表达元件PGAP200/cymR。基于PGCWCuO1和PGAP200/cymR搭建新型毕赤酵母严谨性诱导表达系统。根据本申请的毕赤酵母诱导表达系统在表达重组蛋白时，以廉价的葡萄糖作为碳源和低浓度廉价无毒的4‑异丙基苯甲酸作为诱导剂，即可实现重组蛋白尤其是对毕赤酵母细胞有毒性的重组蛋白安全低成本生产。
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公开(公告)号：CN107345225B
公开(公告)日：2020-04-14
申请号：CN201710423347.0
申请日：2014-09-29
Applicant: 中国农业科学院生物技术研究所
Abstract: 本发明属于基因工程和遗传工程领域，公开了一种具有高转糖苷活性的β‑半乳糖苷酶组合突变体，其是在去除了自身信号肽的亮白曲霉和米曲霉的β‑半乳糖苷酶的氨基酸序列的基础上，通过双位点的定点饱和突变所获得的，在低聚糖生成量保持不变的情况下，该突变体的转糖苷反应速率比野生型提高100％以上。同时，本发明还公开了编码上述组合突变体的DNA分子、含有上述DNA分子的重组表达载体以及表达上述DNA分子的宿主细胞。此外，本发明还提供了采用上述重组表达载体制备具有高转糖苷活性的β‑半乳糖苷酶的方法以及上述组合突变体、DNA分子、重组表达载体和宿主细胞在制备β‑半乳糖苷酶中的应用。
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公开(公告)号：CN103881994B
公开(公告)日：2020-03-27
申请号：CN201410148999.4
申请日：2014-04-14
Applicant: 中国农业科学院生物技术研究所
Abstract: 本发明属于基因工程和遗传工程领域，公开了一种具有高转糖苷活性的β‑半乳糖苷酶突变体，其是在去除了自身信号肽的亮白曲霉和米曲霉的β‑半乳糖苷酶的氨基酸序列的基础上，通过单位点的定点饱和突变所获得的，该突变体的转糖苷活性比野生型提高15%以上。同时，本发明还公开了编码上述突变体的DNA分子、含有上述DNA分子的重组表达载体以及表达上述DNA分子的宿主细胞。此外，本发明还提供了采用上述重组表达载体制备具有高转糖苷活性的β‑半乳糖苷酶的方法以及上述突变体、DNA分子、重组表达载体和宿主细胞在制备β‑半乳糖苷酶中的应用。
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公开(公告)号：CN105734061B
公开(公告)日：2019-07-23
申请号：CN201610179949.1
申请日：2016-03-25
Applicant: 中国农业科学院生物技术研究所
IPC: C12N15/113 , C12N15/81 , C12N1/19
Abstract: 本发明公开了鼠李糖诱导型启动子及其应用。本发明首先公开了从毕赤酵母中分离的核苷酸序列为SEQ ID NO.5所示的鼠李糖诱导型启动子，验证了所述鼠李糖诱导型启动子启动外源基因表达的强度，并确证了能有效调控目的基因表达的最短启动子。本发明还公开了含有所述鼠李糖诱导型启动子的重组真核表达载体及宿主细胞。本发明进一步提供了一种调控目的异源性基因在毕赤酵母中进行适时表达的方法，包括：用所述的鼠李糖诱导型启动子和待表达的目的异源性基因构建真核表达载体；将构建的真核表达载体转化到酵母中得到重组酵母；通过控制培养基中诱导物鼠李糖的添加量和添加时间来调控目的蛋白适时的表达，实现外源蛋白表达的精确控制。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN109321586A
公开(公告)日：2019-02-12
申请号：CN201811304241.X
申请日：2018-11-03
Applicant: 中国农业科学院生物技术研究所
Abstract: 本发明公开了葡萄糖氧化酶优化基因及其表达载体和应用。本发明将黑曲霉来源的葡萄糖氧化酶基因在不改变蛋白质氨基酸序列的前提下，采用包括密码子使用频率，不同基因区域GC含量的分布，密码子适应指数CAI，mRNA结构优化，5’mRNA自由能优化，不稳定序列的删除等多策略方式进行优化；毕赤酵母表达结果发现，优化后的AGOD-m3以及AGOD-m5这两条基因能够提高酶蛋白在毕赤酵母中的分泌表达量，其中，AGOD-m3在毕赤酵母中的分泌表达量提高尤为显著、酶活力也最强。本发明进一步提供了含有所述优化基因的重组表达载体及其在制备葡萄糖氧化酶中的应用。本发明为葡萄糖氧化酶的大规模工业化生产奠定了基础。
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公开(公告)号：CN106350461A
公开(公告)日：2017-01-25
申请号：CN201610582793.1
申请日：2016-07-21
Applicant: 中国农业科学院生物技术研究所
Abstract: 本发明公开了根瘤农杆菌介导的特异腐质霉遗传转化方法及其表达载体，属于特异腐质霉的遗传转化领域。本发明特异腐质霉遗传转化方法，包括：(1)构建目的基因的表达质粒；(2)将表达质粒转化根瘤农杆菌感受态细胞，得到转入目的质粒的根瘤农杆菌，将其扩大培养得到根瘤农杆菌菌液；(3)将特异腐质霉涂布在平板上进行预萌发；(5)将根瘤农杆菌菌液与已萌发有菌丝的特异腐质霉进行共培养，再通过选择性培养，获得转化子。本发明利用上述方法构建突变库并获得一株纤维素酶高产突变株Y1-T4。本发明转化方法操作简单，稳定，使得在特异腐质霉中进行同源和异源基因表达成为可能，为建立特异腐质霉的高效表达体系提供了必要的技术保障。
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公开(公告)号：CN103484488A
公开(公告)日：2014-01-01
申请号：CN201310421943.7
申请日：2013-09-16
Applicant: 中国农业科学院生物技术研究所
Abstract: 本发明公开了优化的牛凝乳酶原基因及其分泌表达方法和应用。本发明综合考虑密码子使用频率、GC含量的调整、不稳定序列的删除、mRNA二级结构及密码子分布不同而引起的蛋白翻译速率之间的差异等影响因素，按照毕赤酵母的偏爱密码子对牛凝乳酶原基因进行改造分别获得SEQ ID NO.1、2、3所示的优化的牛凝乳酶原基因。本发明还提供了一种重组牛凝乳酶原的生产方法，包括：将含有优化的牛凝乳酶原基因的重组表达载体转化宿主细胞，得到重组菌株；培养重组菌株，诱导重组牛凝乳酶原的表达，回收并纯化所表达的产物。相比原始牛凝乳酶原基因，优化后的牛凝乳酶原基因在毕赤酵母中的分泌表达量以及酶活均有显著提升。
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公开(公告)号：CN102876694A
公开(公告)日：2013-01-16
申请号：CN201210431520.9
申请日：2012-11-01
Applicant: 中国农业科学院生物技术研究所
Abstract: 本发明公开了优化的葡聚糖酶基因及其重组植物表达载体和应用。本发明将来源于Bispora sp.MEY-1的葡聚糖酶基因通过一系列的优化手段得到SEQ ID NO.2所示的优化的葡聚糖酶基因；本发明进一步构建了能够在作物种子中定点表达葡聚糖酶的重组植物表达载体，在此基础上，本发明提供了一种在作物种子中定点表达葡聚糖酶的转基因植物的构建方法。本发明方法能够将葡聚糖酶在玉米等作物种子中进行定点高效的表达，优化后的葡聚糖酶基因在玉米种子所表达的葡聚糖酶的酶活及表达量较优化前有显著提升，并且在进一步的饲料加工过程以及在动物胃内可以保持较高的稳定性。
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公开(公告)号：CN102776215A
公开(公告)日：2012-11-14
申请号：CN201210195026.7
申请日：2012-06-13
Applicant: 中国农业科学院生物技术研究所
Abstract: 本发明公开了优化的乳糖酶基因及其分泌表达方法和应用。本发明将源于米曲霉（Aspergillus oryzae）的乳糖酶基因按照巴斯德毕赤酵母的偏爱密码子进行改造得到核苷酸序列为SEQ ID NO.1所示的乳糖酶优化基因，优化后的乳糖酶基因降低了转录能量屏障，提高了转录效率，显著提升了其在毕赤酵母中的分泌表达水平，所表达的重组乳糖酶酶活高。牛奶水解实验结果表明，本发明所制备的重组乳糖酶在不同温度下乳糖水解率均可达到80%以上，水解乳糖效果良好。本发明为乳糖酶进一步工业化扩大生产奠定了基础。
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