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公开(公告)号：CN102994550B
公开(公告)日：2016-03-23
申请号：CN201210408558.4
申请日：2012-10-24
Applicant: 中国农业科学院生物技术研究所
IPC: C12N15/866
Abstract: 本发明公开了一种在动物细胞或动物组织中表达外源基因的方法。本发明提供了一种将外源基因导入哺乳动物细胞或组织中进行基因呈递的家蚕杆状病毒载体，包括骨架载体家蚕杆状病毒BmNPV以及重组到骨架载体上的外源基因的表达盒；所述外源基因的表达盒由哺乳动物启动子、外源基因和终止子组成。本发明进一步公开了一种在动物细胞或动物组织中表达外源基因的方法，包括：将构建的家蚕杆状病毒载体感染昆虫宿主或昆虫细胞；培养被感染的昆虫宿主或昆虫细胞对家蚕杆状病毒载体进行扩增；收获并纯化所扩增产物。本发明所构建的家蚕杆状病毒基因呈递载体在动物细胞中具有不可扩增、不会与动物细胞基因组进行重组、体外大量扩增方便、安全性高等优点。
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公开(公告)号：CN102876800B
公开(公告)日：2015-08-19
申请号：CN201210400763.6
申请日：2012-10-19
Applicant: 中国农业科学院生物技术研究所
IPC: C12Q1/68
Abstract: 本发明公开了一种转植酸酶基因玉米种子或含有该玉米种子的饲料中植酸酶基因的定量检测方法，包括以下步骤：(1)建立转植酸酶基因玉米定量检测标准曲线和线性方程；(2)以待检测样品的DNA为模板，分别以扩增玉米内参基因的一对特异引物、扩增植酸酶基因的一对特异引物或者扩增植酸酶基因表达框中构建载体终止子与基因结合区域的一对特异引物进行实时荧光定量PCR扩增，计算出Ct值差值，将Ct值差值代入所构建的标准曲线和线性方程，得到待检测样品中植酸酶基因的含量。本发明方法能够快速、准确、高通量的测定转基因玉米或添加了转植酸酶基因玉米饲料中的转植酸酶基因的含量，具有操作简便、准确、灵敏度高、避免交叉污染等优点。
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公开(公告)号：CN102352406B
公开(公告)日：2014-08-06
申请号：CN201110326940.6
申请日：2011-10-25
Applicant: 中国农业科学院生物技术研究所
IPC: C12Q1/44
Abstract: 本发明公开了一种高通量测定转植酸酶作物种子中植酸酶活性的方法，该方法包括：（1）、以磷含量为横坐标，吸光值为纵坐标，建立磷标准曲线；（2）、将待检测样品中的植酸酶浸提出来，得到植酸酶的浸提液；（3）、将植酸酶的浸提液在96孔微孔板中进行植酸酶的酶活性测定反应；（4）、测定反应溶液的吸光值，对应磷标准曲线建立的直线回归方程计算出各个待测样品中的磷浓度，再依据酶活计算公式计算出待检测样品的植酸酶活性。准确度和灵敏度试验结果表明，本发明方法测定结果准确性好、误差小、稳定性高、重复性好，变异系数也远低于现有的微板法。本发明检测方法具有高通量、检测效率高、操作简便、成本低、准确性高等优点。
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公开(公告)号：CN102876694A
公开(公告)日：2013-01-16
申请号：CN201210431520.9
申请日：2012-11-01
Applicant: 中国农业科学院生物技术研究所
Abstract: 本发明公开了优化的葡聚糖酶基因及其重组植物表达载体和应用。本发明将来源于Bispora sp.MEY-1的葡聚糖酶基因通过一系列的优化手段得到SEQ ID NO.2所示的优化的葡聚糖酶基因；本发明进一步构建了能够在作物种子中定点表达葡聚糖酶的重组植物表达载体，在此基础上，本发明提供了一种在作物种子中定点表达葡聚糖酶的转基因植物的构建方法。本发明方法能够将葡聚糖酶在玉米等作物种子中进行定点高效的表达，优化后的葡聚糖酶基因在玉米种子所表达的葡聚糖酶的酶活及表达量较优化前有显著提升，并且在进一步的饲料加工过程以及在动物胃内可以保持较高的稳定性。
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公开(公告)号：CN100497612C
公开(公告)日：2009-06-10
申请号：CN200610001785.X
申请日：2006-01-25
Applicant: 中国农业科学院生物技术研究所 , 中国农业科学院饲料研究所
IPC: C12N9/38 , C12N15/866 , C12N15/85 , C12N7/01 , C12N15/56
Abstract: 本发明公开了一种新的耐高温乳糖酶的制备方法，属于生物技术领域。本发明方法包括以下步骤：将耐高温乳糖酶基因构建到杆状病毒运载载体上，得到重组杆状病毒运载载体；通过体内或体外重组，将耐高温乳糖酶基因整合到杆状病毒的基因组上，得到重组杆状病毒；用所得到的重组杆状病毒感染昆虫宿主；培养被感染的昆虫宿主使其进行耐高温乳糖酶的表达；收集、纯化所表达的产物即得。本发明方法可以高效、廉价、大规模的生产耐高温乳糖酶，所获得的耐高温乳糖酶能够广泛的应用于食品及饲料生产领域。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN1314800C
公开(公告)日：2007-05-09
申请号：CN200510080492.0
申请日：2005-07-06
Applicant: 江南大学 , 中国农业科学院生物技术研究所
Abstract: 本发明涉及一种乳糖酶的固定化方法及固定化乳糖酶的应用。该发明利用发明人筛选得到的树脂作为载体吸附固定用重组毕赤酵母发酵得到过滤清液中的胞外游离乳糖酶；再将这种吸附了酶的载体用海藻酸钙包埋方法与戊二醛交联方法处理，制备成高结合强度的固定化乳糖酶。以该方法制备的固定化乳糖酶作为生物催化剂水解5%乳糖溶液，固定化酶用量为10～100%(w/v)，5～60℃下作用0.5～1小时，连续转化52批，乳糖水解率保持在75%以上；以该方法制备的固定化乳糖酶处理新鲜牛奶，5～60℃下转化0.2～8小时，连续转化30批，乳糖水解率保持在70%以上。
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公开(公告)号：CN119193525B
公开(公告)日：2025-03-04
申请号：CN202411700314.2
申请日：2024-11-26
Applicant: 中国农业科学院生物技术研究所
Abstract: 本发明公开了α‑葡聚糖磷酸化酶5CC5单位点突变体E535V及其制备方法和应用。本发明针对纤维素制淀粉的关键酶元件存在催化效率低、稳定性和适配性差、异源表达难等问题，通过宏基因组和公共数据库的大数据分析及生物信息学方法，精准挖掘新型纤维素降解和淀粉合成关键酶元件，挖掘鉴定得到来自烟草的α‑葡聚糖磷酸化酶，其较土豆来源的PGP具有更好的酶活及淀粉合成功能；本发明进一步对该α‑葡聚糖磷酸化酶的Cap结构域进行单位点突变，结果发现将氨基酸序列为SEQ ID No.1所示的烟草来源的α‑葡聚糖磷酸化酶进行E535V单位点突变所获得的单位点突变体，其酶活以及表达量均显著高于野生型α‑葡聚糖磷酸化酶。
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公开(公告)号：CN119177224A
公开(公告)日：2024-12-24
申请号：CN202411700313.8
申请日：2024-11-26
Applicant: 中国农业科学院生物技术研究所
Abstract: 本发明公开了α‑葡聚糖磷酸化酶突变体及其制备方法和应用。本发明针对纤维素制淀粉的关键酶元件存在催化效率低、稳定性和适配性差、异源表达难等问题，通过宏基因组和公共数据库的大数据分析及生物信息学方法，精准挖掘新型纤维素降解和淀粉合成关键酶元件挖掘鉴定得到来自烟草的α‑葡聚糖磷酸化酶，该酶较土豆来源的α‑葡聚糖磷酸化酶具有更好的酶活及淀粉合成功能；本发明进一步对来源于烟草的α‑葡聚糖磷酸化酶的Cap结构域进行单位点突变，结果发现将氨基酸序列为SEQ ID No.1所示的烟草来源的α‑葡聚糖磷酸化酶进行N563T单位点突变所获得的单位点突变体，其酶活以及表达量均显著高于野生型α‑葡聚糖磷酸化酶。
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公开(公告)号：CN118222523A
公开(公告)日：2024-06-21
申请号：CN202410645986.1
申请日：2024-05-23
Applicant: 中国农业科学院生物技术研究所
Abstract: 本发明公开了PET塑料降解酶BMHETase突变体及其应用。本发明将SEQ ID No.1所示的野生型BMHETase进行单位点或多位点突变得到单位点突变体或多位点突变体，这些突变体对BHET和MHET的降解活性相比野生型均有明显提高，且随着突变位点的叠加或增加，多位点突变体降解MHET以及BHET的活性逐渐提高，其中，六位点突变体BMHETase6M水解活性最高，分别是野生型BMHETase降解MHET、BHET的7.53倍和2.31倍；最佳反应温度检测结果表明，BMHETase6M降解MHET和BHET的最适反应温度分别为60℃和65℃，均比野生型BMHETase提高了5℃。
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