公开(公告)号：CN101381767A

公开(公告)日：2009-03-11

申请号：CN200810137388.4

申请日：2008-10-24

Applicant: 东北农业大学 ,  中华人民共和国黑龙江出入境检验检疫局

Inventor： 宋铭忻 ,  张子群 ,  袁金钱 ,  谢晓峰 ,  路义鑫 ,  李维刚 ,  韩彩霞 ,  由轩 ,  罗公平

IPC: C12Q1/68 ,  G01N21/64

Abstract: 本发明提供了一种旋毛虫通用型实时荧光PCR检测方法。确定以各旋毛虫隔离种线粒体LS－rRNA基因保守区序列作为扩增靶序列，设计合成了一对特异性引物和一条TaqMAN MGB探针应用于对旋毛虫的通用检测。根据不同浓度梯度的阳性质控标准品制作的定量标准曲线可以看出，不同梯度定量模板数的对数值与Ct值之间有较好的相关性，其相关系数为0.9984；同时，该检测方法具有很高的灵敏度，最低能检测到132个拷贝数和10－5条旋毛虫；对其他寄生虫和健康宿主及水对照进行检测表明，该方法具有很好的特异性；重复性实验表明，本发明提供的检测体系具有很好的稳定性，其检测结果变异较小，控制在统计学范围之内。

公开(公告)号：CN102839218B

公开(公告)日：2013-12-11

申请号：CN201210349684.7

申请日：2012-09-19

Applicant: 东北农业大学

Inventor： 宋铭忻 ,  张子群 ,  李巍 ,  付丽君 ,  韩彩霞 ,  李晓云 ,  唐颖 ,  俞昭旸

IPC: C12Q1/68

Abstract: 一种检测食品中旋毛虫和猪囊尾蚴的方法，涉及一种检测旋毛虫和猪囊尾蚴的方法。是要解决目前诊断食源性寄生虫的方法只能检测一种虫体的问题。方法：一、设计旋毛虫和猪囊尾蚴特异性引物，并采用生物素标记；二、样品处理；三、双重PCR扩增；四、探针的修饰；五、将光谱编号为38的微球与修饰后的旋毛虫Ts基因探针耦联，将光谱编号为44的微球与修饰后的猪囊尾蚴Cc基因探针耦联；六、配制微球工作液；七、配制显色液；八、将反应管和阴性对照管置于PCR仪中，杂交，读数，即完成食品中旋毛虫和猪囊尾蚴的检测。本发明方法用于检测旋毛虫和猪囊尾蚴。

公开(公告)号：CN101381767B

公开(公告)日：2010-12-08

申请号：CN200810137388.4

申请日：2008-10-24

Applicant: 东北农业大学 ,  中华人民共和国黑龙江出入境检验检疫局

Inventor： 宋铭忻 ,  张子群 ,  袁金钱 ,  谢晓峰 ,  路义鑫 ,  李维刚 ,  韩彩霞 ,  由轩 ,  罗公平

IPC: C12Q1/68 ,  G01N21/64

Abstract: 本发明提供了一种旋毛虫通用型实时荧光PCR检测方法。确定以各旋毛虫隔离种线粒体LS-rRNA基因保守区序列作为扩增靶序列，设计合成了一对特异性引物和一条TaqMAN MGB探针应用于对旋毛虫的通用检测。根据不同浓度梯度的阳性质控标准品制作的定量标准曲线可以看出，不同梯度定量模板数的对数值与Ct值之间有较好的相关性，其相关系数为0.9984；同时，该检测方法具有很高的灵敏度，最低能检测到132个拷贝数和10-5条旋毛虫；对其他寄生虫和健康宿主及水对照进行检测表明，该方法具有很好的特异性；重复性实验表明，本发明提供的检测体系具有很好的稳定性，其检测结果变异较小，控制在统计学范围之内。

公开(公告)号：CN102839218A

公开(公告)日：2012-12-26

申请号：CN201210349684.7

申请日：2012-09-19

Applicant: 东北农业大学

Inventor： 宋铭忻 ,  张子群 ,  李巍 ,  付丽君 ,  韩彩霞 ,  李晓云 ,  唐颖 ,  俞昭旸

IPC: C12Q1/68

Abstract: 一种检测食品中旋毛虫和猪囊尾蚴的方法，涉及一种检测旋毛虫和猪囊尾蚴的方法。是要解决目前诊断食源性寄生虫的方法只能检测一种虫体的问题。方法：一、设计旋毛虫和猪囊尾蚴特异性引物，并采用生物素标记，二、样品处理；三、双重PCR扩增；四、探针的修饰；五、将光谱编号为38的微球与修饰后的旋毛虫Ts基因探针耦联，将光谱编号为44的微球与修饰后的猪囊尾蚴Cc基因探针耦联；六、配制微球工作液；七、配制显色液；八、将反应管和阴性对照管置于PCR仪中，杂交，读数，即完成食品中旋毛虫和猪囊尾蚴的检测。本发明方法用于检测旋毛虫和猪囊尾蚴。

公开(公告)号：CN102702334A

公开(公告)日：2012-10-03

申请号：CN201210236741.0

申请日：2012-07-10

Applicant: 东北农业大学

Inventor： 张子群 ,  宋铭忻 ,  李巍 ,  付丽君 ,  韩彩霞 ,  路义鑫 ,  唐颖 ,  彭永刚

IPC: C07K14/15 ,  G01N33/68 ,  C12N15/70

Abstract: 一种诊断绵羊肺腺瘤病毒的重组蛋白抗原及其制备方法，涉及一种重组蛋白抗原及其制备方法。本发明提供一种诊断绵羊肺腺瘤病毒的重组蛋白抗原及其制备方法，目的是表达出完整的未被截短的CA蛋白，提高抗原性。诊断绵羊肺腺瘤病毒的重组蛋白抗原的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。方法：以提取的基因组DNA为模板进行PCR扩增，获得目的基因；与载体进行连接，得重组质粒；将重组质粒和表达载体pET-28a连接，转化感受态中，测序鉴定；将阳性菌接种到LB培养基中，向菌液中加入IPTG，离心取沉淀，超声后离心，吸取上清，纯化，即获得重组蛋白。本发明获得的重组蛋白以上清形式表达，生物活性好。用于绵羊肺腺瘤病毒检测。