Beclin1的相互作用蛋白及其基因的应用

    公开(公告)号:CN104288782B

    公开(公告)日:2017-12-19

    申请号:CN201410286518.6

    申请日:2014-06-24

    Abstract: 本发明涉及Beclin1的相互作用蛋白及其基因的应用,具体为用于制备或筛选调控脂肪细胞分化和自噬的药物。其中BAD基因和YWHAQ基因可用于制备或筛选调控饥饿引起的皮下脂肪自噬的药物;AMBRA1、BAD、BCL2L1、BIRC5、GOPC、TICAM2、TNFAIP3或YWHAQ基因用于制备或筛选调控高脂饮食引起的皮下脂肪自噬的药物;BAD、BIRC5或TICAM2基因用于调控高脂饮食引起的内脏脂肪自噬。TNFAIP3基因用于制备或筛选调控脂肪细胞分化的药物。本发明筛选了Beclin1的相互作用蛋白中与脂肪自噬和分化有关的基因,为筛选治疗肥胖症的药物提供了新的方向。

    一种C3H10T1/2中胚层多潜能胚胎干细胞株的诱导分化方法

    公开(公告)号:CN103361307B

    公开(公告)日:2015-07-29

    申请号:CN201310254446.2

    申请日:2013-06-24

    Inventor: 宁光 张晓燕 杨颖

    Abstract: 本发明涉及细胞的诱导分化方法,特别涉及一种C3H10T1/2中胚层多潜能胚胎干细胞株的诱导分化方法,其步骤包括:将C3H10T1/2细胞培养于培养液中培养,细胞达80%-90%融合后加入0.25%胰酶5mL消化,细胞收缩呈圆形时终止胰酶消化反应,离心3-5分钟、沉淀、弃去上清,再加入培养液后吹打;按1:4比例传代培养到6孔板或12孔板培养,每2-4天更换培养液1次;待培养板上的细胞长满后置于诱导液A中,2天后撤去诱导液A换成诱导液B,2天后撤去诱导液B换成培养液,每2-4天更换培养液1次即可。本发明诱导分化成的脂肪细胞,可很好地运用到后续的实验中。

    Beclin1的相互作用蛋白及其基因的应用

    公开(公告)号:CN104288782A

    公开(公告)日:2015-01-21

    申请号:CN201410286518.6

    申请日:2014-06-24

    Abstract: 本发明涉及Beclin1的相互作用蛋白及其基因的应用,具体为用于制备或筛选调控脂肪细胞分化和自噬的药物。其中BAD基因和YWHAQ基因可用于制备或筛选调控饥饿引起的皮下脂肪自噬的药物;AMBRA1、BAD、BCL2L1、BIRC5、GOPC、TICAM2、TNFAIP3或YWHAQ基因用于制备或筛选调控高脂饮食引起的皮下脂肪自噬的药物;BAD、BIRC5或TICAM2基因用于调控高脂饮食引起的内脏脂肪自噬。TNFAIP3基因用于制备或筛选调控脂肪细胞分化的药物。本发明筛选了Beclin1的相互作用蛋白中与脂肪自噬和分化有关的基因,为筛选治疗肥胖症的药物提供了新的方向。

    小檗碱在治疗非酒精性脂肪肝病药物中的应用

    公开(公告)号:CN103393680A

    公开(公告)日:2013-11-20

    申请号:CN201310303806.3

    申请日:2013-07-18

    Abstract: 本发明属于医药制备领域,特别涉及小檗碱在治疗非酒精性脂肪肝病药物中的应用。本发明应用了糖尿病肥胖兼NAFLD的db/db小鼠以模拟肥胖的NAFLD患者;同时应用蛋氨酸-胆碱缺乏(methionine-choline deficient,MCD)饮食造成的非肥胖脂肪肝小鼠作为模型,以模拟非肥胖的NAFLD患者,来观察BBR的功效。通过各项测试结果显示,BBR不仅能减轻肥胖小鼠的体重、改善其糖代谢与脂代谢,而且能治疗肥胖小鼠在所并发的脂肪肝,BBR在治疗非肥胖小鼠的脂肪肝方面也有显著功效,这些结果在体外模拟的细胞模型中亦得到验证,说明BBR确实在治疗肥胖与非肥胖NAFLD方面存在显著功效,可用在制备治疗NAFLD的药物中。

    Beclin1蛋白乙酰化和突变的应用

    公开(公告)号:CN104120108B

    公开(公告)日:2017-02-08

    申请号:CN201410286505.9

    申请日:2014-06-24

    Abstract: 本发明涉及生理学和分子生物学领域,公开了Beclin1乙酰化的应用。用去乙酰化酶抑制剂可以使Beclin1发生乙酰化,从而增加Beclin1的表达量,提高自噬水平。采用点突变技术对Beclin1K416位点进行了负义突变,构建K416R突变型质粒。将该突变型质粒转染293T细胞后,其乙酰化水平有部分降低,但依然存在较明显的乙酰化条带。即使如此,Beclin1的表达及LC3的表达显著降低,从而抑制了自噬的发生。

    诱导体外肝脏细胞脂肪堆积的方法

    公开(公告)号:CN103382454A

    公开(公告)日:2013-11-06

    申请号:CN201310306918.4

    申请日:2013-07-18

    Abstract: 本发明属于细胞技术领域,特别涉及诱导体外肝脏细胞脂肪堆积的方法,其特征在于,肝脏原代细胞、HepG2细胞系和FAO细胞系均使用含10%胎牛血清的DMEM高糖培养液培养,细胞融合至70-80%时,改用含0.02%BSA的DMEM脱血清24小时,再分别加入浓度为0.5和1mM含有5%BSA螯合的油酸/棕榈酸(oleate acid/palmitate acid,OA/PA)混合物;AML12细胞系培养:用含10%胎牛血清的1:1混合DMEM和F12培养液,并加入40ng/mL的地塞米松刺激生长,当细胞密度达到70-80%时脱血清24小时,再用MCD培养液培养24小时。本发明用一系列体外肝脏细胞模型模拟了肝脏发生脂质沉积的情形,并用BBR干预,观察其治疗效果。结果证明BBR在模拟肥胖与非肥胖NAFLD的体外实验中具有缓解脂肪肝的显著功效。

    围脂滴蛋白在药物制备中的应用

    公开(公告)号:CN103394073A

    公开(公告)日:2013-11-20

    申请号:CN201310300308.3

    申请日:2013-07-17

    Inventor: 宁光 张晓燕 杨颖

    Abstract: 本发明属于医药制备领域,特别涉及围脂滴蛋白在制备抑制脂肪细胞自噬和治疗脂质代谢紊乱药物中的应用,本研究采用对脂肪细胞自噬具有抑制作用的小檗碱和Perilipin进行检测,结果表明自噬促进Perilipin的降解;采用自噬激动剂ABT737来观察Perilipin的降解,经ABT737激活自噬后,Perilipin的表达明显减少;经过小檗碱处理后,与单独的ABT737组比,小檗碱与ABT737共同处理组的Perilipin表达增多。所以,Perilipin对脂肪细胞自噬有抑制作用,Perilipin含量的减少促进脂肪分解,导致整个机体能量代谢的紊乱,这为脂质代谢紊乱治疗提供了新的研究方向。

    小檗碱在制备抑制脂肪细胞自噬药物中的应用

    公开(公告)号:CN103393679A

    公开(公告)日:2013-11-20

    申请号:CN201310254448.1

    申请日:2013-06-24

    Inventor: 宁光 张晓燕 杨颖

    Abstract: 本发明属于医药制备领域,特别涉及小檗碱在制备抑制皮下脂肪和内脏脂肪细胞自噬药物中的应用。本发明以高脂喂养的小鼠为实验对象,测试小檗碱是否抑制小鼠的皮下脂肪和内脏脂肪细胞的自噬。具体为,高脂喂养C57BL/6小鼠12周后,分为高脂组和小檗碱组,继续高脂饮食并用小檗碱灌胃,一天一次,持续4周。Western Blot检测自噬相关蛋白变化,Real-time PCR检测其相应mRNA水平变化。结果表明:高脂喂养下,小鼠的皮下及内脏脂肪组织自噬增加,而小檗碱能有效抑制高脂喂养小鼠的皮下脂肪和内脏脂肪的自噬,为临床上更合理的将小檗碱用于肥胖症的治疗提供了实验数据和理论依据。

    Beclin1蛋白乙酰化和突变的应用

    公开(公告)号:CN104120108A

    公开(公告)日:2014-10-29

    申请号:CN201410286505.9

    申请日:2014-06-24

    Abstract: 本发明涉及生理学和分子生物学领域,公开了Beclin1乙酰化的应用。用去乙酰化酶抑制剂可以使Beclin1发生乙酰化,从而增加Beclin1的表达量,提高自噬水平。采用点突变技术对Beclin1K416位点进行了负义突变,构建K416R突变型质粒。将该突变型质粒转染293T细胞后,其乙酰化水平有部分降低,但依然存在较明显的乙酰化条带。即使如此,Beclin1的表达及LC3的表达显著降低,从而抑制了自噬的发生。

    小鼠肝脏原代细胞分离方法

    公开(公告)号:CN103396983A

    公开(公告)日:2013-11-20

    申请号:CN201310303792.5

    申请日:2013-07-18

    Abstract: 本发明属于细胞技术领域,特别涉及一种小鼠肝脏原代细胞分离方法,以进一步培养,用于模拟肥胖和非肥胖状态下的NAFLD,来检测BBR的治疗效果。本发明提供了一种简单、经济、快速的小鼠原代肝脏细胞分离方法,适用于一般实验室的小鼠原代肝脏细胞分离以及进一步培养,为后续实验提供基础。以本发明所获得的小鼠原代肝脏细胞进行进一步培养,建立体外细胞模型,进行验证BBR在治疗非肥胖小鼠的脂肪肝方面的功效,获得了良好的效果,为验证BBR在治疗肥胖与非肥胖NAFLD方面的功效起到了积极作用,为治疗NAFLD的药物的研制提供了基础条件。

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