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公开(公告)号：CN103074292B
公开(公告)日：2014-07-09
申请号：CN201310023160.3
申请日：2013-01-22
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种高产L-苯丙氨酸的重组谷氨酸棒杆菌及发酵生产L-苯丙氨酸(Phe)的方法，属于代谢工程领域。本发明在谷氨酸棒杆菌模式菌株ATCC13032中通过诱导表达3-脱氧-D-阿拉伯庚酮糖酸7-磷酸合成酶基因，抗反馈抑制的分支酸变位酶/预苯酸脱水酶基因，转酮醇酶基因及磷酸烯醇式丙酮酸合成酶基因四个基因，获得了一株高产L-Phe的谷氨酸棒状杆菌工程菌株C.glutamicum19AF/99TP。在C.glutamicum ATCC13032中过量表达L-Phe合成代谢途径的莽草酸代谢途径，分支酸代谢途径的关键酶基因使得L-Phe产量达到3.47g/L，结合表达中心代谢途径提高前体物质的两个酶基因L-Phe产量最高达到4.86g/L，而出发菌株ATCC13032作为对照菌株在整个发酵过程中检测不到L-Phe的积累。
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公开(公告)号：CN103695448A
公开(公告)日：2014-04-02
申请号：CN201410007408.1
申请日：2014-01-08
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了透明质酸酶基因，其核苷酸序列如（a）或（b）或（c）所示：（a）核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；（b）在（a）中的核苷酸序列经过取代、缺失或添加一个核苷酸或几个核苷酸且具有透明质酸酶活性的基因；（c）与（a）中氨基酸序列整体相似度在85%以上，具有透明质酸酶活性的基因。本发明通过采用毕赤酵母表达系统，成功实现了对所获得的水蛭透明质酸酶的高效异源表达及其纯化。本发明重组制备的水蛭透明质酸酶产物属于药理活性化合物，可以用于治疗脑、心血管疾病、眼科疾病、抗肿瘤和药物扩散剂等医疗领域。本发明为实现水蛭来源的透明质酸酶的工业化制备生产奠定了基础。
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公开(公告)号：CN103571815A
公开(公告)日：2014-02-12
申请号：CN201310524588.6
申请日：2013-10-29
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C12N9/80 , C12H1/14 , C12N15/746 , C12Y305/01005
Abstract: 本发明公开了一种高效制备食品级酸性脲酶及其应用的方法及其应用，属于生物工程技术领域。利用食品级乳酸乳球菌表达系统成功实现了酸性脲酶的高效表达制备方法及应用，酸性脲酶酶活达到10200U/L，纯化后酸性脲酶比酶活为325.6U/mg。纯化后的酶对氨基甲酸乙酯底物的比酶活达到243.4U/mg，在黄酒中加入本发明制备的酸性脲酶可高效降解尿素(2天降解率100%)和氨基甲酸乙酯（3天降解率72%）。本发明制备的重组酸性脲酶可以用于发酵食品中尿素和氨基甲酸乙酯的消除，可高效解决发酵食品中氨基甲酸乙酯的残留问题，本发明为实现食品级酸性脲酶的工业化生产奠定了基础。
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公开(公告)号：CN103088041A
公开(公告)日：2013-05-08
申请号：CN201310034739.X
申请日：2013-01-29
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开一种可用于高效生产角质酶的角质酶基因及其应用，特别是一种人工的角质酶基因编码基因及其应用。将编码角质酶基因进行合成优化得到tfu，并在N端人为添加α-factor信号肽及kozark序列。本发明成功实现了人工的角质酶基因在酿酒酵母中的表达。另外，本发明结合重组菌株表达体系中启动子的优化，构建出具有产酶和性能都较好的工程菌，为后续角质酶的工业化生产奠定了一定的理论基础。
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公开(公告)号：CN102399835A
公开(公告)日：2012-04-04
申请号：CN201110311467.4
申请日：2011-10-14
Applicant: 江南大学
Abstract: 一种微生物发酵生产L-苯丙氨酸(Phe)的方法，属于代谢工程领域。本发明采用载体pXMJ19，将来源于谷氨酸棒状杆菌(Corynebacterium glutamicum)中编码3-脱氧-D-阿拉伯庚酮糖酸7-磷酸合成酶DS的基因aroG在谷氨酸棒状杆菌模式菌株ATCC 13032中过量表达，获得了一株产L-Phe的谷氨酸棒状杆菌工程菌株C.glutamicum/aroG。过量表达aroG基因提高了L-Phe合成途径中的前提物质3-脱氧-D-阿拉伯庚酮糖酸7-磷酸(DAHP)的积累，从而大幅度提高了L-Phe产量，最终通过诱导表达aroG基因，L-Phe提高到了0.61g/L，而出发菌株ATCC 13032作为对照菌株在整个发酵过程中检测不到L-Phe的积累。
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公开(公告)号：CN119876104A
公开(公告)日：2025-04-25
申请号：CN202411091498.7
申请日：2024-08-09
Applicant: 江南大学
IPC: C12N9/88 , C12P19/26 , C12N15/60 , C12N11/02 , C12N15/70 , C12N1/21 , C12N15/62 , C07K19/00 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了一种基于自组装策略构建固定化肝素裂解酶及其制备低分子量肝素的方法，属于生物技术领域。本发明提供的肝素III突变体相较于野生型有着更高的催化效率，突变体K85A/Q95F/S471T的催化效率是野生型的1.75倍；本发明还利用聚集蛋白自组装肝素裂解酶Ⅲ，实现酶的固定化，进一步对Linker进行筛选和优化，提高了转化效率。本发明构建的酶固定系统可实现肝素裂解酶III的固定化，通过对重组细胞破壁后离心收集沉淀，减少了蛋白纯化脱盐等复杂步骤。固定化肝素裂解酶在循环10次以后仍有50％的催化活性，实现了低分子量肝素的高效制备，增加了酶的利用效率，降低了生产成本。
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公开(公告)号：CN119776311A
公开(公告)日：2025-04-08
申请号：CN202411833865.6
申请日：2024-12-13
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明提供了一种透明质酸合酶突变体及其应用，涉及生物技术领域。本发明通过对氨基酸序列如SEQ ID NO.1的透明质酸合酶进行N端、C端氨基酸的缺失以及对280和540位点进行点突变等改造，得到了透明质酸合酶突变体。将本发明的透明质酸合酶突变体导入宿主菌中并进行发酵培养，相较于未改造之间的透明质酸合酶，其透明质酸产量大幅度提高。除此以外，在强化UDP‑葡萄糖脱氢酶表达的前提下，将本发明的透明质酸合酶和透明质酸降解酶通过GS linker连接并进行异源表达，其在5L发酵罐的产量为15g/L左右，且生成的透明质酸为透明质酸四糖。
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公开(公告)号：CN119220470A
公开(公告)日：2024-12-31
申请号：CN202411381169.6
申请日：2024-09-30
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种酶法磺酸化合成缓解溃疡性结肠炎药物硫酸胆固醇的方法，属于生物技术领域。本发明用大肠杆菌BL21(DE3)作为宿主菌，对来自于B.thetaiotaomicron的羟基类固醇磺基转移酶2B1进行表达后纯化，再利用底物胆固醇在体外催化合成胆固醇硫酸盐，实现胆固醇硫酸盐的绿色、高效磺酸化修饰，从而用于缓解溃疡性结肠炎药物生产。
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公开(公告)号：CN117467632B
公开(公告)日：2024-09-24
申请号：CN202210889750.3
申请日：2022-07-27
Applicant: 江南大学 , 南京汉欣医药科技有限公司
Abstract: 本发明公开了一种肝素N‑磺基转移酶突变体构建方法，属于生物工程技术领域。本发明对人源的双功能酶(NCBI Reference Sequence:NP_001534.1)中的硫酸乙酰肝素N‑磺基转移酶1进行了改造，通过截短、单点突变、多点组合突变等生物技术手段，获得了能够使得稳定性和催化效率显著提升的肝素N‑磺基转移酶突变体。本发明提供的人源肝素N‑磺基转移酶突变体催化效率比人源肝素N‑磺基转移酶原始菌株提高了1.3倍，且在37℃下的稳定性也较野生型有显著提升，更有利于长时间催化获得高转化率的N‑磺酸化肝素前体。
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