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公开(公告)号：CN108060269A
公开(公告)日：2018-05-22
申请号：CN201810054827.9
申请日：2018-01-19
Applicant: 东北农业大学
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6851 , C12N15/11
Abstract: 本发明公开了一种用于猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒以及猪轮状病毒检测的DPO引物组及其应用。本发明针对TGEV‑N基因、PEDV‑N基因和PRoV‑VP7基因分别设计了一对DPO引物，建立了猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒和猪轮状病毒的多重DPO real‑time RT‑PCR检测方法。结果显示，该方法的检测限为5.3×100copies/μL，在40℃‑65℃退火温度范围内均可高效扩增靶基因片段，表明该方法退火温度范围宽，同时DPO引物特异性强，PCR反应过程中未产生非特异性扩增。本发明多重DPO real‑time RT‑PCR检测方法设计简单、特异性强、灵敏度高，为TGEV、PEDV和PRoV三种致猪病毒性腹泻病病原的快速准确检测提供了新的技术手段。
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公开(公告)号：CN107988130A
公开(公告)日：2018-05-04
申请号：CN201711395821.X
申请日：2017-12-21
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 本发明公开了一种稳定表达猪轮状病毒VP4蛋白的乳酸菌基因工程亚单位疫苗株及其制备方法。所述疫苗株是在尿嘧啶磷酸核糖转移酶(uracil phosphoribosyl transferase,UPP)基因缺失的干酪乳杆菌的基础上，通过同源重组将猪轮状病毒VP4基因插入干酪乳杆菌的丙酮酸水合酶基因的终止密码子和终止子之间后得到，所述疫苗株不带有抗生素选择标记。实验证明，本发明构建的稳定表达猪轮状病毒VP4蛋白的乳酸菌基因工程亚单位疫苗株，经口服途径免疫动物既能诱导局部黏膜免疫应答，产生黏膜抗体IgA，又能够诱导机体产生体液免疫应答，产生血清抗体IgG，显示了良好的免疫原性，且本发明所构建的非抗生素抗性标记的基因工程乳酸菌疫苗株符合兽用疫苗绿色、环保的发展理念。
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公开(公告)号：CN107082802A
公开(公告)日：2017-08-22
申请号：CN201710116956.1
申请日：2017-03-01
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 本发明公开了一种4型蓝舌病病毒VP2蛋白中和性B细胞抗原表位多肽及其应用。本发明采用噬菌体展示技术对BTV VP2蛋白抗原表位氨基酸进行筛选。经过3轮淘选后进行测序，测序结果经分析比对后获得共同的短肽序列为160NH161。实验证明，160NH161与4A‑1G7上清、腹水均发生特异性反应并且160NH161与1‑24型BTV阳性标准血清反应特异性良好。本发明的提出，对于4型BTV的临床诊断提供了新的技术手段，也为后续建立BTV的型特异性鉴别诊断方法以及4型BTV相关表位疫苗的制备奠定了物质基础。
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公开(公告)号：CN106749557A
公开(公告)日：2017-05-31
申请号：CN201611112486.3
申请日：2016-12-06
Applicant: 东北农业大学
IPC: C07K14/14 , C12N15/46 , G01N33/569
Abstract: 本发明公开了一种蓝舌病病毒VP7蛋白群特异性抗原表位多肽及其应用。本发明使用前期制备的蓝舌病病毒VP7蛋白单克隆抗体3H7细胞株，利用噬菌体展示肽技术对3H7细胞株识别的抗原表位进行筛选。经过3轮淘选后进行测序，结果表明3H7细胞株识别的抗原表位为QYHAM。进一步合成短肽利用间接ELISA对3H7细胞株进行鉴定，实验结果表明3H7细胞株识别的抗原表位为QYHAM；氨基酸序列比对显示该表位在不同来源的25型蓝舌病病毒毒株间保守。本发明鉴定了蓝舌病病毒VP7蛋白群特异性抗原表位多肽，为建立针对蓝舌病病毒的竞争ELISA方法奠定了基础，鉴定出的抗原表位也可应用于今后疫苗设计中，对于我国蓝舌病的防治具有重要的意义。
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公开(公告)号：CN106615622A
公开(公告)日：2017-05-10
申请号：CN201611140867.2
申请日：2016-12-12
Applicant: 东北农业大学
CPC classification number: C12N15/746 , A23Y2220/49 , C12N2800/101
Abstract: 本发明公开了一种促进雏鸡生长及增强雏鸡抵抗鸡白痢沙门氏菌感染能力的饲料添加剂及其应用。本发明的饲料添加剂含有表达牛乳铁蛋白肽的重组乳酸乳球菌，所述的表达牛乳铁蛋白肽的重组乳酸乳球菌是通过将含有SEQ ID NO.1所示的牛乳铁蛋白肽基因的载体导入乳酸乳球菌MG1363中得到的。实验证明，本发明的饲料添加剂可提高雏鸡日增重，降低料重比，具有促进雏鸡生长及增强雏鸡抵抗鸡白痢沙门氏菌感染能力的作用。而且相较于传统抗生素，安全、绿色、无污染、无残留，且能提高肠内有益菌的数量菌，调节肠道内菌群平衡。因此，本发明的提出为以乳酸菌为载体的抗菌肽在饲料添加剂中的应用、开发和工业化生产等方面提供了新的技术手段和理论支持。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN103689247B
公开(公告)日：2015-09-30
申请号：CN201310594969.1
申请日：2013-11-22
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 本发明涉及一种作为断乳仔猪饲料添加剂的表达乳铁蛋白重组乳酸菌组合物，其特征在于，所述组合物将戊糖乳杆菌（Lactobacillus pentosus KLDS1.0413）和植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum KLDS1.0344）作为口服活载体，其中，戊糖乳杆菌和植物乳杆菌中均含有连接有PLF基因的穿梭表达载体pPG612.1。本发明可以替代抗生素，乳铁蛋白还能刺激肠道细胞的生长，增加肠道中有益菌群，如双歧杆菌和乳酸杆菌等的数量，减少大肠杆菌等有害菌群的繁殖，从而保障仔猪肠道健康发育，增强仔猪肠道对营养物质的消化、吸收能力，降低腹泻率，提高其生长性能，促进仔猪生长。
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公开(公告)号：CN104911152A
公开(公告)日：2015-09-16
申请号：CN201510309061.0
申请日：2015-06-08
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 本发明涉及一株重组传染性造血器官坏死病毒rIHNV HLJ-09株及其构建方法和应用，属于生物技术领域。所述病毒rIHNV HLJ-09株的微生物保藏号为CGMCC No.8606，通过感染重组病毒的细胞传代实验证明此病毒能够稳定传代。重组病毒rIHNV HLJ-09腹腔接种虹鳟幼鱼，结果导致幼鱼发病死亡，致死率可达90％，表明此病毒具有与亲代HLJ-09株病毒相似的致病特性。进一步，本发明中利用rIHNV HLJ-09反向遗传系统，将rIHNV HLJ-09的NV ORF用报告基因EGFP(绿色荧光蛋白)编码基因替换，成功拯救病毒，拯救病毒命名为rIHNV-EGFP。激光共聚焦显微镜观察rIHNV-EGFP病毒侵染的细胞可观察到明显的绿色荧光，说明该rIHNV HLJ-09病毒株可应用于表达外源蛋白。
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公开(公告)号：CN103454419B
公开(公告)日：2015-03-25
申请号：CN201310317343.6
申请日：2013-07-25
Applicant: 东北农业大学
IPC: G01N33/577 , G01N33/569 , G01N33/558 , C12N5/20 , C07K16/10 , C12R1/91
Abstract: 本发明公开了一种用于检测猪流行性腹泻病毒的免疫胶体金试纸条及其制备方法和应用。本发明的试纸条按照连接顺序依次包括样品垫，胶体金垫，硝酸纤维素膜，吸水纸及位于下方的作为组装平台使用的PVC底板，所述胶体金垫是由吸附有胶体金标记的抗PEDV单克隆抗体的玻璃纤维素膜组成，所述硝酸纤维素膜上具有山羊抗鼠IgG多克隆抗体包被的质控线以及兔抗PEDV S蛋白多克隆抗体包被的检测线，其中，所述的抗PEDV单克隆抗体由保藏编号为CCTCC C201392的杂交瘤细胞分泌产生。实验证明，本发明的试纸条，具有特异性强，稳定性好等优点，并且操作简单，无需对技术人员特殊培训，无需特殊设备，检测成本低，检测快速，只需5～10分钟即可读取结果，适合现场检测。
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公开(公告)号：CN103454419A
公开(公告)日：2013-12-18
申请号：CN201310317343.6
申请日：2013-07-25
Applicant: 东北农业大学
IPC: G01N33/577 , G01N33/569 , G01N33/558 , C12N5/20 , C07K16/10 , C12R1/91
Abstract: 本发明公开了一种用于检测猪流行性腹泻病毒的免疫胶体金试纸条及其制备方法和应用。本发明的试纸条按照连接顺序依次包括样品垫，胶体金垫，硝酸纤维素膜，吸水纸及位于下方的作为组装平台使用的PVC底板，所述胶体金垫是由吸附有胶体金标记的抗PEDV单克隆抗体的玻璃纤维素膜组成，所述硝酸纤维素膜上具有山羊抗鼠IgG多克隆抗体包被的质控线以及兔抗PEDV S蛋白多克隆抗体包被的检测线，其中，所述的抗PEDV单克隆抗体由保藏编号为CCTCC C201392的杂交瘤细胞分泌产生。实验证明，本发明的试纸条，具有特异性强，稳定性好等优点，并且操作简单，无需对技术人员特殊培训，无需特殊设备，检测成本低，检测快速，只需5～10分钟即可读取结果，适合现场检测。
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公开(公告)号：CN100567477C
公开(公告)日：2009-12-09
申请号：CN200710089251.1
申请日：2007-03-16
Applicant: 东北农业大学
Abstract: 本发明提供的是一种表达猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteristisvirus，TGEV)纤突S蛋白的重组乳酸乳球菌的方法。根据猪传染性胃肠炎病毒S蛋白的全基因序列及表达载体质粒的基因融合特点，设计一对引物，进行PCR，获得含有TGEV S基因4个主要抗原位点的2007bp目的片段，将其与分泌表达的载体质粒pNZ8112进行连接，通过电转化进入宿主菌乳酸乳球菌NZ9000细胞内，在乳链菌肽的诱导下进行表达。本发明中构建了冠状病毒TGEV S蛋白乳酸乳球菌表达载体系统，表达了含有TGEV S蛋白A、B、C、D四个主要抗原位点的约66KDa的目的蛋白，免疫印迹实验和间接免疫荧光试验均表明，所表达的外源蛋白能够与TGEV免疫血清发生反应，表明重组S蛋白与TGEV天然抗原一样具有相同的抗原性。
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