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公开(公告)号：CN103160518A
公开(公告)日：2013-06-19
申请号：CN201210567931.0
申请日：2012-12-16
Applicant: 云南农业大学
Abstract: 本发明公开了一种稻瘟病菌的病原基因，保持现有病原菌病原相关分子模式鉴定方法不变，包括胼胝质沉积、活性氧爆发、防御相关基因表达谱分析等方法均与常规相同，其特征是通过一系列的实验证明了该基因具有病原相关分子模式的特性，即该基因是稻瘟病菌病原相关分子模式(PAMPs)。通过一系列方法鉴定到了一个稻瘟病菌病原相关分子模式。该病原相关分子模式可为今后开发生物制剂进行有效生物防治稻瘟病提供有力参考。
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公开(公告)号：CN103048302A
公开(公告)日：2013-04-17
申请号：CN201210554697.8
申请日：2012-12-05
Applicant: 云南农业大学
IPC: G01N21/64
Abstract: 本发明公开了一种检测植物产生免疫反应的方法，保持现有原核表达产物表达纯化及胼胝质和活性氧观察方法不变，采用稻瘟病菌蛋白基因的原核表达产物，按照5.0mg/ml浓度处理水稻持有不同抗性基因的24个水稻单基因系品种及根组织和叶鞘；24小时后进行DAB染色和苯胺蓝染色，荧光显微镜直接观察胼胝质和活性氧的形成情况，通过胼胝质和活性氧的形成情况判断植物是否产生免疫反应，该方法利用纯化的效应蛋白基因的原核表达产物处理水稻根组织，通过荧光显微镜观察根组织胼胝质和活性氧产生，能直接获得水稻产生免疫反应情况，同时获得能引起多个持有不同抗性基因的水稻单基因系品种和感病品种产生免疫反应的稻瘟病菌蛋白。
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公开(公告)号：CN102634509A
公开(公告)日：2012-08-15
申请号：CN201210126926.6
申请日：2012-04-27
Applicant: 云南农业大学
IPC: C12N15/10
Abstract: 本发明公开了一种直接从感病小麦叶片上高效快速提取小麦条锈菌DNA的方法，其特征在于，吸取20μl配好的20％的chelex-100混悬液于100μl PCR管中，吸取5μl的Chelex-100上清液于长有小麦条锈菌夏孢子小麦叶片上，并在滴有Chelex-100上清液的病斑处反复涂抹叶片多次，将锈孢子洗下后，吸回叶片上含有锈孢子的Chelex-100上清液并加入到装有20μl 20％chelex-100混悬液的PCR管中，用移液器反复吸取混匀，放入沸水浴中水浴2min，再放到旋涡混合器上振荡混匀10s，水浴5min后保存于-20℃备用，上清液均可作为PCR的模板。建立一套高效、快速、可直接从感小麦条锈病菌的植株上提取小麦条锈病菌DNA作为PCR扩增模板的方法。
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公开(公告)号：CN102559575A
公开(公告)日：2012-07-11
申请号：CN201110458326.5
申请日：2011-12-31
Applicant: 云南农业大学
Abstract: 本发明涉及一种用稻瘟病菌效应蛋白基因的原核表达产物处理水稻根组织诱导其产生胼胝质的方法，属于植物保护和生物技术领域。本发明是在现有技术上的改进，包括与常规方法相同的原核表达技术、蛋白纯化技术、所用荧光显微镜的激发光和发射光波长范围、苯胺蓝染色方法，其特征是用稻瘟病菌效应蛋白基因的原核表达产物，1.0mg/ml～10.0mg/ml浓度处理抗病水稻品种日本晴根组织12h后苯胺蓝染色，荧光显微镜直接观察胼胝质形成。本发明方法简便、准确、快速；能有效地避免较多自发荧光干扰，能直接定性地获得水稻基本防御反应产生的情况。
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公开(公告)号：CN101580872B
公开(公告)日：2012-02-22
申请号：CN200810233641.6
申请日：2008-11-25
Applicant: 云南农业大学
IPC: C12Q1/68
Abstract: 本发明涉及一种稻瘟病菌侵染后期高度表达的基因及其编码产物的体外功能检测的方法，属于植物保护和生物技术领域。本发明的技术方案是保持目前基因克隆与表达的方法，如引物设计、PCR扩增、real-time PCR、连接、转化、蛋白表达均与常规相同，不同的是该基因为稻瘟病菌侵染水稻后期高度表达的基因，与前人研究的稻瘟病菌基因多为稻瘟病菌侵染早期高度表达的基因有区别，其编码产物是小蛋白，由88个氨基酸组成，相对分子量为8.8kDa，其体外表达产物按照0.5mg/ml～2.5mg/ml的浓度直接接种到致伤的丽江新团黑谷水稻叶片后能引起水稻叶片产生病斑。本发明比传统稻瘟病菌致病性测定方法简便、快速。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN101720608A
公开(公告)日：2010-06-09
申请号：CN200810233506.1
申请日：2008-10-29
Applicant: 云南农业大学
IPC: A01G1/00
Abstract: 本发明涉及一种玉米晚播控制玉米大斑病的方法，属植物保护学领域。本发明的技术方案是保持目前常规种植玉米的施肥及田间管理方法不变，不同的是玉米晚播，7月播种11月收获；大小行种植，玉米种植规格为小行50～60cm，每三个小行为一种植带，种植带即大行行距为100～140cm。其中玉米的种植密度为每亩3300～3800株；玉米种植品种为生育期较短的品种；该方法可以适用于烟地、蔬菜地等中种植。本发明为玉米大斑病的生态控制提供了新方法，有着良好的社会经济和生态效益。
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公开(公告)号：CN101580872A
公开(公告)日：2009-11-18
申请号：CN200810233641.6
申请日：2008-11-25
Applicant: 云南农业大学
IPC: C12Q1/68
Abstract: 本发明涉及一种稻瘟病菌侵染后期高度表达的基因及其编码产物的体外功能检测的方法，属于植物保护和生物技术领域。本发明的技术方案是保持目前基因克隆与表达的方法，如引物设计、PCR扩增、real－time PCR、连接、转化、蛋白表达均与常规相同，不同的是该基因为稻瘟病菌侵染水稻后期高度表达的基因，与前人研究的稻瘟病菌基因多为稻瘟病菌侵染早期高度表达的基因有区别，其编码产物是小蛋白，由88个氨基酸组成，相对分子量为8.8kDa，其体外表达产物按照0.5mg/ml～2.5mg/ml的浓度直接接种到致伤的丽江新团黑谷水稻叶片后能引起水稻叶片产生病斑。本发明比传统稻瘟病菌致病性测定方法简便、快速。
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公开(公告)号：CN101418346A
公开(公告)日：2009-04-29
申请号：CN200810233642.0
申请日：2008-11-25
Applicant: 云南农业大学
IPC: C12Q1/68
Abstract: 本发明涉及一种检测稻瘟病菌致病相关基因在侵染的水稻叶片组织中表达量的方法。本发明提供了一种检测稻瘟病菌侵染水稻后不同时间点致病相关基因表达量的方法，该方法的技术方案是：将稻瘟病菌孢子喷雾接种到水稻叶片上，取样并提取总RNA，应用SYBR Green I嵌合荧光法对稻瘟病菌致病相关基因片段进行实时荧光定量PCR检测，记录待测样品的C(t)值，根据公式计算其致病相关基因片段的表达量。采用本方法可快速准确地检测水稻接种稻瘟病菌早期不同时间段稻瘟病菌致病相关基因的表达量；分析不同致病相关基因在不同水稻品种中的表达量及其在接种后不同时间段的变化情况；分析稻瘟病菌致病相关基因的时空表达模式等。其检测结果准确、重复性好，有助于说明这些基因的功能。
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公开(公告)号：CN101418332A
公开(公告)日：2009-04-29
申请号：CN200810233643.5
申请日：2008-11-25
Applicant: 云南农业大学
IPC: C12Q1/02
Abstract: 本发明提供一种检测稻瘟病菌致病蛋白的方法。水稻感病品种丽江新团黑谷生长至第4片叶完全展开时接种。选择在接种水稻叶片的中部最宽处，用致伤设备形成直径1mm的压伤斑1个，将稻瘟病菌氮饥饿培养后或致病基因重组表达后得到的蛋白在致伤处接种，蛋白的接种浓度为1μg/μl，接种体积为3μl。接种后72小时在水稻叶片上形成的病斑为椭圆形，测量向叶尖和叶基方向延伸的最长值作为病斑的长度值，该值是比较不同蛋白致病力大小的依据。其分类标准为：病斑长度为1.5mm至2mm之间为弱致病性；病斑长度在2.1mm至3mm之间为中等致病性；病斑长度大于3.1mm为强致病性。该方法对于研究稻瘟病菌致病相关基因和蛋白的功能具有重要意义。
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公开(公告)号：CN1807586A
公开(公告)日：2006-07-26
申请号：CN200510048728.2
申请日：2005-12-22
Applicant: 云南农业大学
Abstract: 本发明涉及一种诱导稻瘟病菌产生致病性蛋白的方法，属于植物保护领域。本发明的技术方案是将斜面上保存的稻瘟病菌株接种在普通固体培养基，28℃下扩繁。形成较大的菌落后，转接到50mL的普通液体培养基中，28℃ 150rpm振荡培养3天后，培养液用无菌水冲洗，至菌丝块无色。将冲洗好的菌丝块转接到50mL致病蛋白诱导培养基中，28℃ 150rpm振荡培养48小时。菌液抽滤、冻干后得到稻瘟菌分泌蛋白的提取物，－20℃保存。此方法可以诱导稻瘟病菌大量产生致病性相关蛋白，填补了国内外稻瘟病菌致病机理研究中不能获得致病蛋白的空白，意义重大。
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