一种水稻长链非编码RNA-lncRNA_XLOC047657基因位点及其应用

    公开(公告)号:CN116949038A

    公开(公告)日:2023-10-27

    申请号:CN202210392847.3

    申请日:2022-04-15

    Abstract: 本发明提供了一种水稻长链非编码RNA‑lncRNA_XLOC047657基因位点及其在提高水稻对稻瘟病抗性中的应用,属于植物基因工程技术领域。本发明筛选得到长链非编码RNA‑lncRNA_XLOC047657基因位点,其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。本发明构建了含有该序列的敲减表达载体和重组菌;利用敲减载体转化苗接种稻瘟病菌株,病害调查结果说明感病品种可通过抑制该基因位点的表达量显著提高水稻对多个稻瘟病菌株的抗性,证明该长链非编码RNA的高表达会诱导水稻对稻瘟病菌的感病性;同时,利用过表达载体转化苗接种稻瘟病菌株并进行病害调查,结果表明该基因位点在水稻过表达株系对稻瘟病菌的防卫响应中发挥着负调控作用。本发明为培育水稻抗稻瘟病新品种提供了新的策略和遗传位点,具有十分重要的理论意义和应用价值。

    诱导稻瘟病菌产生致病性蛋白的方法

    公开(公告)号:CN100365116C

    公开(公告)日:2008-01-30

    申请号:CN200510048728.2

    申请日:2005-12-22

    Abstract: 本发明涉及一种诱导稻瘟病菌产生致病性蛋白的方法,属于植物保护领域。本发明的技术方案是将斜面上保存的稻瘟病菌株接种在普通固体培养基,28℃下扩繁。形成较大的菌落后,转接到50mL的普通液体培养基中,28℃ 150rpm振荡培养3天后,培养液用无菌水冲洗,至菌丝块无色。将冲洗好的菌丝块转接到50mL致病蛋白诱导培养基中,28℃ 150rpm振荡培养48小时。菌液抽滤、冻干后得到稻瘟菌分泌蛋白的提取物,-20℃保存。此方法可以诱导稻瘟病菌大量产生致病性相关蛋白,填补了国内外稻瘟病菌致病机理研究中不能获得致病蛋白的空白,意义重大。

    一种直接从感病小麦叶片上高效快速提取小麦条锈菌DNA的方法

    公开(公告)号:CN102634509B

    公开(公告)日:2014-04-16

    申请号:CN201210126926.6

    申请日:2012-04-27

    Abstract: 本发明公开了一种直接从感病小麦叶片上高效快速提取小麦条锈菌DNA的方法,其特征在于,吸取20μl配好的20%的chelex-100混悬液于100μl PCR管中,吸取5μl的Chelex-100上清液于长有小麦条锈菌夏孢子小麦叶片上,并在滴有Chelex-100上清液的病斑处反复涂抹叶片多次,将锈孢子洗下后,吸回叶片上含有锈孢子的Chelex-100上清液并加入到装有20μl 20%chelex-100混悬液的PCR管中,用移液器反复吸取混匀,放入沸水浴中水浴2min,再放到旋涡混合器上振荡混匀10s,水浴5min后保存于-20℃备用,上清液均可作为PCR的模板。建立一套高效、快速、可直接从感小麦条锈病菌的植株上提取小麦条锈病菌DNA作为PCR扩增模板的方法。

    一种直接从感病小麦叶片上高效快速提取小麦条锈菌DNA的方法

    公开(公告)号:CN102634509A

    公开(公告)日:2012-08-15

    申请号:CN201210126926.6

    申请日:2012-04-27

    Abstract: 本发明公开了一种直接从感病小麦叶片上高效快速提取小麦条锈菌DNA的方法,其特征在于,吸取20μl配好的20%的chelex-100混悬液于100μl PCR管中,吸取5μl的Chelex-100上清液于长有小麦条锈菌夏孢子小麦叶片上,并在滴有Chelex-100上清液的病斑处反复涂抹叶片多次,将锈孢子洗下后,吸回叶片上含有锈孢子的Chelex-100上清液并加入到装有20μl 20%chelex-100混悬液的PCR管中,用移液器反复吸取混匀,放入沸水浴中水浴2min,再放到旋涡混合器上振荡混匀10s,水浴5min后保存于-20℃备用,上清液均可作为PCR的模板。建立一套高效、快速、可直接从感小麦条锈病菌的植株上提取小麦条锈病菌DNA作为PCR扩增模板的方法。

    一种检测稻瘟病菌致病相关基因在侵染的水稻叶片组织中表达量的方法

    公开(公告)号:CN101418346A

    公开(公告)日:2009-04-29

    申请号:CN200810233642.0

    申请日:2008-11-25

    Abstract: 本发明涉及一种检测稻瘟病菌致病相关基因在侵染的水稻叶片组织中表达量的方法。本发明提供了一种检测稻瘟病菌侵染水稻后不同时间点致病相关基因表达量的方法,该方法的技术方案是:将稻瘟病菌孢子喷雾接种到水稻叶片上,取样并提取总RNA,应用SYBR Green I嵌合荧光法对稻瘟病菌致病相关基因片段进行实时荧光定量PCR检测,记录待测样品的C(t)值,根据公式计算其致病相关基因片段的表达量。采用本方法可快速准确地检测水稻接种稻瘟病菌早期不同时间段稻瘟病菌致病相关基因的表达量;分析不同致病相关基因在不同水稻品种中的表达量及其在接种后不同时间段的变化情况;分析稻瘟病菌致病相关基因的时空表达模式等。其检测结果准确、重复性好,有助于说明这些基因的功能。

    诱导稻瘟病菌产生致病性蛋白的方法

    公开(公告)号:CN1807586A

    公开(公告)日:2006-07-26

    申请号:CN200510048728.2

    申请日:2005-12-22

    Abstract: 本发明涉及一种诱导稻瘟病菌产生致病性蛋白的方法,属于植物保护领域。本发明的技术方案是将斜面上保存的稻瘟病菌株接种在普通固体培养基,28℃下扩繁。形成较大的菌落后,转接到50mL的普通液体培养基中,28℃ 150rpm振荡培养3天后,培养液用无菌水冲洗,至菌丝块无色。将冲洗好的菌丝块转接到50mL致病蛋白诱导培养基中,28℃ 150rpm振荡培养48小时。菌液抽滤、冻干后得到稻瘟菌分泌蛋白的提取物,-20℃保存。此方法可以诱导稻瘟病菌大量产生致病性相关蛋白,填补了国内外稻瘟病菌致病机理研究中不能获得致病蛋白的空白,意义重大。

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