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公开(公告)号：CN101418332B
公开(公告)日：2011-04-20
申请号：CN200810233643.5
申请日：2008-11-25
Applicant: 云南农业大学
IPC: C12Q1/02
Abstract: 本发明提供一种检测稻瘟病菌致病蛋白的方法。水稻感病品种丽江新团黑谷生长至第4片叶完全展开时接种。选择在接种水稻叶片的中部最宽处，用致伤设备形成直径1mm的压伤斑1个，将稻瘟病菌氮饥饿培养后或致病基因重组表达后得到的蛋白在致伤处接种，蛋白的接种浓度为1μg/μl，接种体积为3μl。接种后72小时在水稻叶片上形成的病斑为椭圆形，测量向叶尖和叶基方向延伸的最长值作为病斑的长度值，该值是比较不同蛋白致病力大小的依据。其分类标准为：病斑长度为1.5mm至2mm之间为弱致病性；病斑长度在2.1mm至3mm之间为中等致病性；病斑长度大于3.1mm为强致病性。该方法对于研究稻瘟病菌致病相关基因和蛋白的功能具有重要意义。
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公开(公告)号：CN100365116C
公开(公告)日：2008-01-30
申请号：CN200510048728.2
申请日：2005-12-22
Applicant: 云南农业大学
Abstract: 本发明涉及一种诱导稻瘟病菌产生致病性蛋白的方法，属于植物保护领域。本发明的技术方案是将斜面上保存的稻瘟病菌株接种在普通固体培养基，28℃下扩繁。形成较大的菌落后，转接到50mL的普通液体培养基中，28℃ 150rpm振荡培养3天后，培养液用无菌水冲洗，至菌丝块无色。将冲洗好的菌丝块转接到50mL致病蛋白诱导培养基中，28℃ 150rpm振荡培养48小时。菌液抽滤、冻干后得到稻瘟菌分泌蛋白的提取物，-20℃保存。此方法可以诱导稻瘟病菌大量产生致病性相关蛋白，填补了国内外稻瘟病菌致病机理研究中不能获得致病蛋白的空白，意义重大。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN101580872B
公开(公告)日：2012-02-22
申请号：CN200810233641.6
申请日：2008-11-25
Applicant: 云南农业大学
IPC: C12Q1/68
Abstract: 本发明涉及一种稻瘟病菌侵染后期高度表达的基因及其编码产物的体外功能检测的方法，属于植物保护和生物技术领域。本发明的技术方案是保持目前基因克隆与表达的方法，如引物设计、PCR扩增、real-time PCR、连接、转化、蛋白表达均与常规相同，不同的是该基因为稻瘟病菌侵染水稻后期高度表达的基因，与前人研究的稻瘟病菌基因多为稻瘟病菌侵染早期高度表达的基因有区别，其编码产物是小蛋白，由88个氨基酸组成，相对分子量为8.8kDa，其体外表达产物按照0.5mg/ml～2.5mg/ml的浓度直接接种到致伤的丽江新团黑谷水稻叶片后能引起水稻叶片产生病斑。本发明比传统稻瘟病菌致病性测定方法简便、快速。
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公开(公告)号：CN101580872A
公开(公告)日：2009-11-18
申请号：CN200810233641.6
申请日：2008-11-25
Applicant: 云南农业大学
IPC: C12Q1/68
Abstract: 本发明涉及一种稻瘟病菌侵染后期高度表达的基因及其编码产物的体外功能检测的方法，属于植物保护和生物技术领域。本发明的技术方案是保持目前基因克隆与表达的方法，如引物设计、PCR扩增、real－time PCR、连接、转化、蛋白表达均与常规相同，不同的是该基因为稻瘟病菌侵染水稻后期高度表达的基因，与前人研究的稻瘟病菌基因多为稻瘟病菌侵染早期高度表达的基因有区别，其编码产物是小蛋白，由88个氨基酸组成，相对分子量为8.8kDa，其体外表达产物按照0.5mg/ml～2.5mg/ml的浓度直接接种到致伤的丽江新团黑谷水稻叶片后能引起水稻叶片产生病斑。本发明比传统稻瘟病菌致病性测定方法简便、快速。
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公开(公告)号：CN101418346A
公开(公告)日：2009-04-29
申请号：CN200810233642.0
申请日：2008-11-25
Applicant: 云南农业大学
IPC: C12Q1/68
Abstract: 本发明涉及一种检测稻瘟病菌致病相关基因在侵染的水稻叶片组织中表达量的方法。本发明提供了一种检测稻瘟病菌侵染水稻后不同时间点致病相关基因表达量的方法，该方法的技术方案是：将稻瘟病菌孢子喷雾接种到水稻叶片上，取样并提取总RNA，应用SYBR Green I嵌合荧光法对稻瘟病菌致病相关基因片段进行实时荧光定量PCR检测，记录待测样品的C(t)值，根据公式计算其致病相关基因片段的表达量。采用本方法可快速准确地检测水稻接种稻瘟病菌早期不同时间段稻瘟病菌致病相关基因的表达量；分析不同致病相关基因在不同水稻品种中的表达量及其在接种后不同时间段的变化情况；分析稻瘟病菌致病相关基因的时空表达模式等。其检测结果准确、重复性好，有助于说明这些基因的功能。
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公开(公告)号：CN101418332A
公开(公告)日：2009-04-29
申请号：CN200810233643.5
申请日：2008-11-25
Applicant: 云南农业大学
IPC: C12Q1/02
Abstract: 本发明提供一种检测稻瘟病菌致病蛋白的方法。水稻感病品种丽江新团黑谷生长至第4片叶完全展开时接种。选择在接种水稻叶片的中部最宽处，用致伤设备形成直径1mm的压伤斑1个，将稻瘟病菌氮饥饿培养后或致病基因重组表达后得到的蛋白在致伤处接种，蛋白的接种浓度为1μg/μl，接种体积为3μl。接种后72小时在水稻叶片上形成的病斑为椭圆形，测量向叶尖和叶基方向延伸的最长值作为病斑的长度值，该值是比较不同蛋白致病力大小的依据。其分类标准为：病斑长度为1.5mm至2mm之间为弱致病性；病斑长度在2.1mm至3mm之间为中等致病性；病斑长度大于3.1mm为强致病性。该方法对于研究稻瘟病菌致病相关基因和蛋白的功能具有重要意义。
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公开(公告)号：CN1807586A
公开(公告)日：2006-07-26
申请号：CN200510048728.2
申请日：2005-12-22
Applicant: 云南农业大学
Abstract: 本发明涉及一种诱导稻瘟病菌产生致病性蛋白的方法，属于植物保护领域。本发明的技术方案是将斜面上保存的稻瘟病菌株接种在普通固体培养基，28℃下扩繁。形成较大的菌落后，转接到50mL的普通液体培养基中，28℃ 150rpm振荡培养3天后，培养液用无菌水冲洗，至菌丝块无色。将冲洗好的菌丝块转接到50mL致病蛋白诱导培养基中，28℃ 150rpm振荡培养48小时。菌液抽滤、冻干后得到稻瘟菌分泌蛋白的提取物，－20℃保存。此方法可以诱导稻瘟病菌大量产生致病性相关蛋白，填补了国内外稻瘟病菌致病机理研究中不能获得致病蛋白的空白，意义重大。
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