公开(公告)号：CN117169506A

公开(公告)日：2023-12-05

申请号：CN202210583817.0

申请日：2022-05-26

Applicant: 南京大学

Inventor： 鞠熀先 ,  吴洁 ,  敖航

IPC: G01N33/68 ,  G01N33/543 ,  G01N33/535 ,  G01N21/76

Abstract: 本发明涉及一种基于DNA放大的蛋白质化学发光成像检测方法和试剂盒。所述试剂盒包括4种试剂，试剂1含一对靶标亲和探针、双链DNA探针、DNA循环探针、脱氧核糖核苷三磷酸和phi29聚合酶；试剂2为血红素溶液；试剂3为鲁米诺溶液；试剂4为过氧化氢溶液。所述方法的检测过程为：将待测样品加入试剂1，靶标蛋白与靶标亲和探针结合，引发DNA邻位组装及多重滚环扩增反应，生成大量富G序列；将试剂2加入该混合液，形成G‑四链体/血红素DNA酶；在反应混合液中加入试剂3和4，用成像技术检测化学发光信号，对靶标蛋白进行定量分析。本发明检测方法和试剂盒操作简单、灵敏度高、普适性好，具有一定的临床应用价值。

公开(公告)号：CN117018213A

公开(公告)日：2023-11-10

申请号：CN202311154079.9

申请日：2023-09-07

Applicant: 南京大学

Inventor： 鞠熀先 ,  陈云龙 ,  杨媛娇

IPC: A61K47/54 ,  A61K9/50 ,  A61K47/36 ,  A61K38/16 ,  A61K47/62 ,  A61P35/00

Abstract: 本发明设计一种具有三重增强的肿瘤免疫治疗药物。该药物利用琥珀酰亚胺酯修饰的链球菌溶血素蛋白，与叠氮修饰的半乳糖或神经氨酸酶发生点击化学反应，分别得到半乳糖和神经氨酸酶功能化的链球菌溶血素蛋白。再将这两种功能蛋白共同封装于透明质酸壳中，得到三重增强的免疫治疗药物。治疗方案通过将该药物尾静脉注射到荷瘤小鼠体内，在肿瘤区域的透明质酸酶诱导透明质酸壳降解后，释放出两种功能化的链球菌溶血素蛋白在肿瘤细胞膜上聚集穿孔，并在肿瘤细胞表面引入半乳糖和神经氨酸酶切割唾液酸，实现增强免疫细胞激活、弱化免疫逃逸、促进穿孔杀伤的三重增强，提高肿瘤免疫治疗的疗效。

公开(公告)号：CN116949046A

公开(公告)日：2023-10-27

申请号：CN202310943556.3

申请日：2023-07-31

Applicant: 南京大学

Inventor： 刘颖 ,  鞠熀先 ,  方燕云

IPC: C12N15/115 ,  C12P21/00 ,  A61K31/7088 ,  A61P35/00 ,  A61P15/14

Abstract: 本发明公开了一种基于细胞膜蛋白顺序激活的DNA逻辑探针及其应用，探针包括组合使用的P‑DNA‑Set、A1‑EpCAM、A2‑MUC1，其中，A2‑MUC1识别细胞的MUC1，A1‑EpCAM识别细胞的EpCAM，EpCAM较MUC1的表达量差异大；P‑DNA‑Set包括L1‑IGFIIR识别端、L1’‑IGFIIR封闭端、A1’‑EpCAM识别端。本发明的智能响应开关型DNA逻辑探针可基于肿瘤细胞膜上蛋白以特定顺序被激活，实现对特定靶细胞的精准治疗；其开关型设计可有效缓解系统注射时探针的潜在副作用；本发明限定探针结合蛋白顺序的逻辑设计，可提高探针的使用效率，为疾病的治疗提供高效的治疗手段。

公开(公告)号：CN116625997A

公开(公告)日：2023-08-22

申请号：CN202310545548.3

申请日：2023-05-11

Applicant: 南京大学

Inventor： 陈云龙 ,  鞠熀先 ,  赵诗雅

IPC: G01N21/64 ,  G01N21/01

Abstract: 本发明涉及一种评估活体内唾液酸化水平的高分子探针。它以支链末端为炔基的树枝状高分子为载体，表面同时修饰有半乳糖、花氰5荧光染料以及叶酸。检测方案通过将制得的高分子探针皮下注射到荷瘤小鼠的肿瘤区域。利用叶酸介导的靶向内吞使高分子探针进入肿瘤细胞内部。活体内的唾液酸转移酶会在高分子探针末端的半乳糖上连接唾液酸。用高碘酸钠将小鼠肿瘤组织切片中的唾液酸末端氧化出醛基基团，并进一步偶联上酰肼荧光素分子。通过荧光显微镜成像同时收集花氰5和荧光素的荧光信号，并利用软件获取二种荧光叠加区域的荧光素荧光强度，即可用于评估该肿瘤组织的唾液酸化水平。

公开(公告)号：CN115704823A

公开(公告)日：2023-02-17

申请号：CN202110928483.1

申请日：2021-08-13

Applicant: 南京大学

Inventor： 鞠熀先 ,  陈云龙 ,  刘惠普

IPC: G01N33/68 ,  G01N33/53 ,  C12Q1/6834 ,  G01N21/64

Abstract: 本发明涉及一种用于分析细胞表面膜蛋白与细胞膜之间的相互作用的分子测力计。它是一种磷脂双分子层修饰的空心二氧化硅微球，表面嵌有两端分别修饰烷烃链和叠氮的DNA1。检测方案首先用二苯并环辛炔、二嗪和荧光染料FAM标记的DNA2识别细胞表面待检测的膜蛋白，紫外光照使二嗪与相应膜蛋白共价连接。然后利用浮力使细胞和分子测力计先接触后分离，烷烃链‑磷脂双分子层相互作用与膜蛋白‑细胞膜相互作用间的竞争会将膜蛋白拔出细胞膜。最后，对不同烷烃链长度制得的分子测力计处理过的细胞进行荧光成像，确定细胞表面荧光强度下降前后所使用的分子测力计上的烷烃链长度，代入光镊获得的相互作用力标尺，实现膜蛋白与细胞膜相互作用的定量。

公开(公告)号：CN107119031B

公开(公告)日：2022-12-27

申请号：CN201710491309.9

申请日：2017-06-21

Applicant: 南京大学

Inventor： 周俊 ,  鞠熀先 ,  郭悦华 ,  陈杰林

IPC: C12N9/22

Abstract: 本发明涉及一种腺嘌呤邻位增强催化活性且在高温下具有高催化活性的新型嗜热四元G四链体DNA酶。首先在富含G碱基的DNA序列的两端修饰腺嘌呤，在含150mM铵离子的缓冲液中，95℃退火5min，形成四元G四链体结构。然后将该结构和血红素混合，形成DNA酶。通过程序控制反应体系的温度，监测其催化活性，证明该酶在高温下的催化性能：75℃下10小时，能够保持50％以上的活性，18小时后该酶显示接近室温的活性；95℃下5分钟，活性没有变化，1.5小时后能够保持50％以上的活性，4小时后该酶显示接近室温的活性。该嗜热四元G四链体DNA酶制备简单，价格低廉，热稳定性好，具有一定的应用前景。

公开(公告)号：CN109030429B

公开(公告)日：2022-06-21

申请号：CN201710445317.X

申请日：2017-06-09

Applicant: 南京大学

Inventor： 丁霖 ,  鞠熀先 ,  霍敏

IPC: C12Q1/6876

Abstract: 本发明涉及一种对活细胞内microRNA(miRNA)原位成像的纳米放大自参比探针及其制备方法。该探针是将核酸发卡修饰的上转换纳米粒子(UNP‑H1)和荧光分子修饰的发卡分子(H2‑F)通过脂质体包裹而成。当探针进入细胞后，UNP‑H1和H2‑F被释放，只有当H1与miRNA杂交后，H2可以取代miRNA而与UNP‑H1杂交，释放出的miRNA启动下一个循环以放大信号。在近红外光激发下，UNP的发射带1(EEB1)与F之间发生发光共振能量转移(LRET)。以UNP的发射带2(EEB2)通道为自参比，LRET与EEB2通道的发光强度比值(ILRET/IEEB2)可用于细胞内miRNA的相对定量。

公开(公告)号：CN114469188A

公开(公告)日：2022-05-13

申请号：CN202210096857.2

申请日：2022-01-26

Applicant: 南京大学

Inventor： 鞠熀先 ,  吴洁 ,  于倩

IPC: A61B10/00 ,  A61B5/1477 ,  A61B5/145

Abstract: 本发明为一种柔性体表汗液集取装置，包括从下而上依次层叠设置的基底层、集取层和保护层。基底层上有收集孔，用于从皮肤表面收集汗液；集取层由收集点、导流通道和汗液集中区构成，其中收集点置于基底层对应的收集孔上方；保护层上有输出口，设置时输出口置于汗液集中区上方。本发明汗液集取装置使用时将其贴于皮肤表面，汗液经由收集孔、收集点、导流通道、汗液集中区和输出口实现采集、输送、富集和流出。该装置能对皮肤汗液进行高效、快速且持续的集取，结构简单、成本低廉、易集成，在可穿戴生物传感器件领域具有很好的应用前景。

公开(公告)号：CN113970592A

公开(公告)日：2022-01-25

申请号：CN202010742136.5

申请日：2020-07-23

Applicant: 南京大学

Inventor： 鞠熀先 ,  马秋琳 ,  陈云龙

IPC: G01N27/64

Abstract: 本发明涉及一种用于酸性磷酸酶(ACP)定量检测的质谱传感芯片及其制备方法，用于复杂样品中ACP的定量检测。该质谱传感芯片以ITO导电玻片为载体，提出了一种通过链霉亲和素与生物素之间的多价非共价相互作用，将生物素化的聚乙二醇(PEG)、链霉亲和素、生物素化的磷酸肽层层组装在ITO玻片上制备质谱传感芯片的新方法。酸性条件下，ACP使磷酸肽底物脱磷酸化，通过MALDI软电离，获得生物素化肽的分子离子峰，从而实现酸性磷酸酶活性的定量分析。首次提出复杂真实样本中ACP的质谱定量检测，为临床诊断蛋白酶的定量提供了一种高通量方法。

公开(公告)号：CN104328192B

公开(公告)日：2021-03-30

申请号：CN201410623931.7

申请日：2014-11-05

Applicant: 南京大学 ,  江苏省肿瘤医院

Inventor： 鞠熀先 ,  严枫 ,  任克维 ,  吴洁

IPC: C12Q1/6804 ,  C12Q1/44

Abstract: 本发明涉及一种核酶放大的高灵敏电化学免疫分析方法。通过Au‑S键合作用，在金电极表面自组装亚甲基蓝标记的发夹DNA，构成电化学免疫传感界面。以Mg2+、DNA1‑抗体1、DNA2‑抗体2、DNA3‑抗体3的混合溶液为检测液，在目标蛋白质存在时，抗体1、抗体2、抗体3同时识别目标蛋白质形成免疫复合物，使得DNA1、DNA2与DNA3相互靠近进行邻位杂交，形成Mg2+依赖性核酶，进而催化裂解传感界面上的发夹DNA，导致亚甲基蓝脱离电极表面，氧化电流减小。通过检测亚甲基蓝电流的变化，实现对目标蛋白质浓度的测定。该免疫分析方法利用三个DNA‑抗体偶合物邻位形成核酶放大检测信号，提高了检测灵敏度和选择性，同时可对目标蛋白质进行快速、一步化检测，具有很好的临床应用价值。