公开(公告)号：CN115595358A

公开(公告)日：2023-01-13

申请号：CN202110771113.1

申请日：2021-07-08

Applicant: 南京大学(CN)

Inventor： 鞠熀先 ,  吴洁 ,  敖航

IPC: C12Q1/6844

Abstract: 本发明涉及一种滚环扩增诱导酶开关激活的方法。该方法以被二价铜离子(Cu2+)抑制了催化活性的辣根过氧化物酶(HRP)为酶开关(HRP‑Cu2+)，以核酸滚环扩增中产生的焦磷酸根离子(PPi)为激活剂。当引物DNA和模板DNA、脱氧核糖核苷三磷酸(dNTPs)、核酸连接酶SplintR及聚合酶phi29共存时，引发核酸滚环扩增反应，由于每个dNTP生成碱基的反应会产生一个PPi，所以伴随滚环扩增过程会有大量的PPi生成。基于PPi对Cu2+强的络合作用，HRP‑Cu2+中的Cu2+被PPi络合离去，从而恢复HRP的活性，完成酶开关的激活。该滚环扩增诱导酶开关激活的方法可联合HRP催化反应，能对可诱发滚环扩增反应的靶标分子进行比色、化学发光等检测，对高灵敏生物诊断方法的发展具有重要意义。

公开(公告)号：CN115598111A

公开(公告)日：2023-01-13

申请号：CN202110771111.2

申请日：2021-07-08

Applicant: 南京大学(CN)

Inventor： 鞠熀先 ,  吴洁 ,  敖航

IPC: G01N21/76 ,  G01N33/537 ,  G01N33/554

Abstract: 本发明涉及一种基于邻位诱导免疫分析的特异性杂交瘤细胞化学发光筛选方法。该化学发光筛选方法的检测溶液包括一对抗原‑DNA偶联物、双链DNA探针、模板DNA、脱氧核糖核苷三磷酸、核酸连接酶及聚合酶。分配在96孔板中的杂交瘤单细胞培育1天后，取其上清液与检测溶液反应，如为特异性杂交瘤细胞，上清液中会有其分泌的特异性抗体，通过免疫识别，可同时结合检测液中的抗原‑DNA偶联物对，继而基于邻位效应，引发核酸组装及滚环扩增反应，产生大量焦磷酸根离子(PPi)。PPi能络合辣根过氧化物酶‑Cu2+复合物(HRP‑Cu2+)中的Cu2+恢复HRP的活性。通过HRP催化产生的化学发光信号对分泌的特异性抗体进行定量分析并完成对特异性杂交瘤细胞的筛选。

公开(公告)号：CN115598111B

公开(公告)日：2025-03-25

申请号：CN202110771111.2

申请日：2021-07-08

Applicant: 南京大学

Inventor： 鞠熀先 ,  吴洁 ,  敖航

IPC: G01N21/76 ,  G01N33/537 ,  G01N33/554

Abstract: 本发明涉及一种基于邻位诱导免疫分析的特异性杂交瘤细胞化学发光筛选方法。该化学发光筛选方法的检测溶液包括一对抗原‑DNA偶联物、双链DNA探针、模板DNA、脱氧核糖核苷三磷酸、核酸连接酶及聚合酶。分配在96孔板中的杂交瘤单细胞培育1天后，取其上清液与检测溶液反应，如为特异性杂交瘤细胞，上清液中会有其分泌的特异性抗体，通过免疫识别，可同时结合检测液中的抗原‑DNA偶联物对，继而基于邻位效应，引发核酸组装及滚环扩增反应，产生大量焦磷酸根离子(PPi)。PPi能络合辣根过氧化物酶‑Cu2+复合物(HRP‑Cu2+)中的Cu2+恢复HRP的活性。通过HRP催化产生的化学发光信号对分泌的特异性抗体进行定量分析并完成对特异性杂交瘤细胞的筛选。

公开(公告)号：CN117169506A

公开(公告)日：2023-12-05

申请号：CN202210583817.0

申请日：2022-05-26

Applicant: 南京大学

Inventor： 鞠熀先 ,  吴洁 ,  敖航

IPC: G01N33/68 ,  G01N33/543 ,  G01N33/535 ,  G01N21/76

Abstract: 本发明涉及一种基于DNA放大的蛋白质化学发光成像检测方法和试剂盒。所述试剂盒包括4种试剂，试剂1含一对靶标亲和探针、双链DNA探针、DNA循环探针、脱氧核糖核苷三磷酸和phi29聚合酶；试剂2为血红素溶液；试剂3为鲁米诺溶液；试剂4为过氧化氢溶液。所述方法的检测过程为：将待测样品加入试剂1，靶标蛋白与靶标亲和探针结合，引发DNA邻位组装及多重滚环扩增反应，生成大量富G序列；将试剂2加入该混合液，形成G‑四链体/血红素DNA酶；在反应混合液中加入试剂3和4，用成像技术检测化学发光信号，对靶标蛋白进行定量分析。本发明检测方法和试剂盒操作简单、灵敏度高、普适性好，具有一定的临床应用价值。