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公开(公告)号：CN106480036A
公开(公告)日：2017-03-08
申请号：CN201611083079.4
申请日：2016-11-30
Applicant: 华南理工大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/63 , C12N1/15 , C12R1/685
CPC classification number: C07K14/38 , C12N15/63 , C12N2800/80
Abstract: 本发明公开了一种具有启动子功能的DNA片段及其应用。该DNA片段为为如下任一序列：(a)如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列或者其互补序列；(b)对如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列进行一个或多个核苷酸取代、缺失或添加所获得的，具有与如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列相同的作为启动子功能的核苷酸序列或者其互补序列。该DNA片段具有启动子的功能，有很强的特异表达活性，在不需要添加诱导物的条件下即能实现CRISPR-Cas9系统中gRNA的表达，使得黑曲霉来源的U6启动子可以在黑曲霉自身的CRISPR-Cas9系统中运用。
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公开(公告)号：CN103361339A
公开(公告)日：2013-10-23
申请号：CN201310326924.6
申请日：2013-07-30
Applicant: 华南理工大学
Abstract: 本发明公开了一种提取丝状真菌基因组DNA的方法及试剂盒和遗传转化子的快速筛选方法，该试剂盒包括电动研磨器、溶液A(裂解液)、溶液B（DNA结合液）、溶液C（DNA洗涤液）、溶液D（DNA洗脱液）和DNA吸附柱。该发明的丝状真菌基因组DNA提取方法，耗时短（30min以内），提取的基因组质量高，不会用到有毒的试剂苯酚、氯仿，能很好的满足后续的实验。本发明快速筛选丝状真菌遗传转化子的方法克服了传统转化子筛选方法耗时、耗力、筛选效率低等缺点，特别适合大规模筛选遗传转化子。
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公开(公告)号：CN102952815A
公开(公告)日：2013-03-06
申请号：CN201210029597.3
申请日：2012-02-10
Applicant: 华南理工大学
Abstract: 本发明公开了利用转谷氨酰胺酶酶原生产微生物转谷氨酰胺酶的方法，包括如下步骤：（1）茂原链霉菌转谷氨酰胺酶酶原基因扩增，在酶原与成熟肽之间引入牛肠激酶的识别序列DDDDK；（2）基因克隆构建表达载体，转化大肠杆菌E.coliBL21（DE3）为工程菌E.coliBL21/proMTG，菌株保藏号为CCTCCM208240；（3）可溶性诱导表达转谷氨酰胺酶酶原；（4）亲和层析纯化蛋白，获得转谷氨酰胺酶酶原；（5）采用牛肠激酶激活酶原为成熟的转谷氨酰胺酶。本发明获得的转谷氨酰胺酶生物活性高；简化了发酵生产工艺，可以特异性完整切除转谷氨酰胺酶酶原序列，不会因非特异性切割或长时间切割导致酶的降解。
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公开(公告)号：CN102586167A
公开(公告)日：2012-07-18
申请号：CN201210052578.2
申请日：2012-03-01
Applicant: 华南理工大学 , 广州市澳键丰泽生物科技有限公司
Abstract: 本发明公开了一株重组的枯草芽孢杆菌及由其生产转谷氨酰胺酶的方法，该重组菌株由以下步骤构建得到：(1)通过融合PCR将P43启动子+信号肽基因与subtilisin-like protease基因连接，再将融合PCR扩增产物转化入枯草芽孢杆菌WB800，得到枯草芽孢杆菌B.subtilis WB800S；(2)PCR扩增茂原链霉菌转谷氨酰胺酶酶原基因，然后将扩增产物转化入枯草芽孢杆菌B.subtilis WB800S中得到枯草芽孢杆菌B.subtilis WB800S/proMTG。将枯草芽孢杆菌B.subtilisWB800S/proMTG发酵、纯化，得到可溶性的转谷氨酰胺酶。本发明方法可以在发酵液上清中直接获得具有生物活性的转谷氨酰胺酶，省去了繁琐的细胞破碎、纯化后激活酶原等过程，简化了发酵生产工艺。
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公开(公告)号：CN101691560A
公开(公告)日：2010-04-07
申请号：CN200810220160.1
申请日：2008-12-19
Applicant: 华南理工大学
Abstract: 本发明公开了大肠杆菌及其可溶性表达转谷氨酰胺酶酶原的方法，该方法包括如下几个步骤：(1)根据茂原链霉菌转谷氨酰胺酶酶原基因的核苷酸序列，设计PCR引物进行PCR扩增，克隆到原核表达载体pET22b(+)中，构建表达载体pET22b-proMTG，转化为大肠杆菌E.coli BL21/proMTG，该菌株保藏号为CCTCC M 208240；(2)可溶性表达转谷氨酰胺酶酶原；(3)转谷氨酰胺酶酶原的激活；(4)高密度发酵；(5)蛋白纯化工艺。本发明方法的转谷氨酰胺酶产量及比活力达到直接在大肠杆菌中表达形成包涵体并经变性及复性生产该酶的水平，而且发酵生产工艺更简单。
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公开(公告)号：CN115851804A
公开(公告)日：2023-03-28
申请号：CN202211277177.7
申请日：2022-10-19
Applicant: 华南理工大学
Abstract: 本发明提供了一种黑曲霉碱基编辑体系及其构建方法与应用。本发明采用碱基编辑系统中的胞嘧啶脱氨酶(AID)在黑曲霉中的编辑效率明显高于BEC系统中的使用大鼠胞苷脱氨酶(rAPOBEC1)，在以相同的靶标基因(黑曲霉中AnpyrG基因An12g03570中相同20bp的protospacer序列)编辑时，AID系统编辑效率为93.8％，BEC系统为43.8％，编辑效率提高了一倍以上，进一步提高了在黑曲霉中碱基编辑系统的效率Target‑AID系统在黑曲霉的分子育种、宿主改造等方面具有高效的应用，为黑曲霉基因工程改造提供了更加高效的编辑技术。
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公开(公告)号：CN113186141B
公开(公告)日：2023-01-06
申请号：CN202110376139.6
申请日：2021-04-08
Applicant: 华南理工大学
Abstract: 本发明公开一种一锅法高效合成莱鲍迪苷M的方法，属于生物工程技术领域。本发明在不添加UDPG的条件下，利用廉价底物ST在体外先经UGT76G1催化为RA，再经EUGT11催化产生RD，最终被UGT76G1转化为RM，旨在用较简单的生产方法，更廉价的底物，得到高品质的甜味剂RM。当三重启动子启动转录时，限速酶EUGT11酶活是单启动子控制转录时的2.13倍，且在酶活力配比为SUS1：UGT76G1：EUGT11/3copies of T7＝1：2：6.39的条件下，该体系将10mM ST转化为3.79±0.31mM莱鲍迪苷M，较之前提升了2.35倍，为低成本高效酶法合成RM提供技术支持。
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公开(公告)号：CN112662717A
公开(公告)日：2021-04-16
申请号：CN202110116282.1
申请日：2021-01-28
Applicant: 华南理工大学
Abstract: 本发明公开一种鼠李糖乳杆菌胞外多糖及其制备方法与应用，属于微生物技术领域。本发明采用分离自香满楼牌酸牛奶的鼠李糖乳酸菌菌株为出发菌株，生产胞外多糖，该胞外多糖为均一组分，其分子量为88650Da；且包含甘露糖、葡萄糖醛酸、葡萄糖、木糖、半乳糖和阿拉伯糖。该胞外多糖具有良好的体外降糖作用，检测到其具有良好的体外抑制α‑葡萄糖苷酶的能力，且工艺简单，市场前景广阔，热力学性能稳定，适合规模化生产。因此，该多糖是一种有潜力的用于预防和治疗糖尿病的活性成分。此外，作为益生菌的发酵产物，与降血糖领域内常见的化学类药物相比，其具有活性成分简单易得、价格低廉、无副作用等优势，具有很大的应用价值。
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公开(公告)号：CN107119051B
公开(公告)日：2020-09-22
申请号：CN201710235664.X
申请日：2017-04-12
Applicant: 华南理工大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/75 , C12N1/21 , C12R1/11 , C12R1/125
Abstract: 本发明公开了一种巨大芽孢杆菌具有启动子功能的DNA片段及其应用。该DNA片段为如下任一序列：(a)如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列或者其互补序列；(b)对SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列进行一个或多个核苷酸取代、缺失或添加所获得的，具有与SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列相同的作为启动子功能的核苷酸序列或者其互补序列；(c)对SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列添加一个或多个核糖体结合位点的序列。本发明的DNA片段具有启动子的功能，同时具有很强的表达活性，在不需要添加诱导物的条件下即能实现外源基因的高表达，可将其运用于耐热β‑半乳糖苷酶和转谷氨酰胺酶的表达，特别是为枯草芽孢杆菌表达分泌系统提供了有效的元件。
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