公开(公告)号：CN106480036A

公开(公告)日：2017-03-08

申请号：CN201611083079.4

申请日：2016-11-30

Applicant: 华南理工大学

Inventor： 潘力 ,  董宏智

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/63 ,  C12N1/15 ,  C12R1/685

CPC classification number: C07K14/38 ,  C12N15/63 ,  C12N2800/80

Abstract: 本发明公开了一种具有启动子功能的DNA片段及其应用。该DNA片段为为如下任一序列：(a)如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列或者其互补序列；(b)对如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列进行一个或多个核苷酸取代、缺失或添加所获得的，具有与如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列相同的作为启动子功能的核苷酸序列或者其互补序列。该DNA片段具有启动子的功能，有很强的特异表达活性，在不需要添加诱导物的条件下即能实现CRISPR-Cas9系统中gRNA的表达，使得黑曲霉来源的U6启动子可以在黑曲霉自身的CRISPR-Cas9系统中运用。

公开(公告)号：CN106480036B

公开(公告)日：2019-04-09

申请号：CN201611083079.4

申请日：2016-11-30

Applicant: 华南理工大学

Inventor： 潘力 ,  董宏智

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/63 ,  C12N1/15 ,  C12R1/685

Abstract: 本发明公开了一种具有启动子功能的DNA片段及其应用。该DNA片段为为如下任一序列：(a)如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列或者其互补序列；(b)对如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列进行一个或多个核苷酸取代、缺失或添加所获得的，具有与如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列相同的作为启动子功能的核苷酸序列或者其互补序列。该DNA片段具有启动子的功能，有很强的特异表达活性，在不需要添加诱导物的条件下即能实现CRISPR‑Cas9系统中gRNA的表达，使得黑曲霉来源的U6启动子可以在黑曲霉自身的CRISPR‑Cas9系统中运用。

公开(公告)号：CN109957576A

公开(公告)日：2019-07-02

申请号：CN201910225983.1

申请日：2019-03-25

Applicant: 华南理工大学

Inventor： 潘力 ,  黄良刚 ,  董宏智 ,  郑俊威 ,  王斌

IPC: C12N15/80 ,  C12N1/15 ,  C12R1/685

Abstract: 本发明公开了一种能实现碱基精确点突变的pFC330‑BEC质粒及其应用。所述pFC330‑BEC质粒的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示，其包含能够在黑曲霉中表达的rAPOBEC1‑XTEN‑nCas9‑UGI融合基因片段、大肠杆菌抗性基因片段AmpR、pyrG筛选标记、丝状真菌自主复制序列AMA1、启动子Ptef以及质粒复制原点ori。所述质粒能够高效并且快速地将丝状真菌基因组上的任意位点的胞嘧啶突变成胸腺嘧啶，能够实现氨基酸的突变或基因的失活。所述质粒在丝状真菌的分子育种、生理特性、代谢产物、宿主改造、工业生产等方面具有广阔的应用前景，能为丝状真菌基因工程改造提供了新的技术平台。