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公开(公告)号：CN114891832A
公开(公告)日：2022-08-12
申请号：CN202210587879.9
申请日：2022-05-27
Applicant: 华中农业大学
IPC: C12N15/867 , C12N15/12 , C12N7/01 , C12N15/66
Abstract: 本发明公开了过表达牛TUSC5a和TUSC5b基因重组慢病毒的构建方法及其应用，过表达重组慢病毒作为具有侵染性的工具或作为人工制剂可调控脂肪沉积，TUSC5a的表达显著促进脂肪合成与积累，TUSC5b的表达显著抑制脂肪合成与积累。其构建方法包括(1)TUSC5a、TUSC5b序列克隆的步骤；(2)使用内切酶将携带HIS标签的TUSC5a和TUSC5b序列分别与慢病毒载体双酶切，胶回收后产物经连接酶连接，得到过表达重组慢病毒的步骤；(3)过表达重组慢病毒验证的步骤；(4)过表达重组慢病毒包装的步骤。本发明对正确认识TUSC5对脂肪沉积的调控网络深入到剪接异构体水平，包装好的两种TUSC5剪接异构体慢病毒可作为人工调控肉牛脂肪沉积能力的工具，实现对脂肪沉积能力的剂量调控。
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公开(公告)号：CN114874991A
公开(公告)日：2022-08-09
申请号：CN202210438460.7
申请日：2022-04-25
Applicant: 华中农业大学
IPC: C12N5/10 , C12N15/867 , C12N15/113 , C12N15/12 , C12N7/00
Abstract: 本发明公开了一种I型干扰素受体(type I interferon alpha receptor，IFNAR1)基因敲除牛肾细胞系，是利用CRISPR/Cas9基因编辑技术对牛肾细胞进行基因编辑，并经过单克隆挑选而得到。经表型验证表明IFNAR1敲除的牛肾细胞系不表达IFNAR1且感染牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)和3型牛副流感病毒(BPIV‑3)后，病毒滴度均可显著提高，从而可用于牛源病毒临床株的分离鉴定并提高病毒的增殖效率。
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公开(公告)号：CN112481184B
公开(公告)日：2022-06-28
申请号：CN202011434431.0
申请日：2020-12-10
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明公开了一株基因缺失重组卡介苗，该菌株缺失的基因是核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示的BCG_0349基因，属于人兽共患病防治技术领域。本发明通过温敏型噬菌体转导介导的同源重组方式将包含BCG_0349基因上下游同源臂的同源交换底物转导进卡介苗基因组中进行BCG_0349基因敲除，成功构建该菌株并首次确认了缺失株能促进机体炎性细胞因子的表达和分泌，同时毒力致弱，具体体现在索状结构形成能力降低和小菌落表型，胞内存活能力降低更易于被机体所清除，本发明具有在人及动物结核病诊断、疫苗和药物开发等相关领域良好的应用潜能。
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公开(公告)号：CN111850002B
公开(公告)日：2022-04-19
申请号：CN202010571850.2
申请日：2020-06-22
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明公开了牛支原体分泌蛋白MbovP570在制备牛支原体诊断试剂、药物或疫苗中的应用，属于动物传染病防治技术领域。所述牛支原体分泌蛋白MbovP570具有如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列，试验证明，所述牛支原体分泌蛋白MbovP570具有抗原性，可以与牛支原体阳性血清反应而不与牛支原体阴性血清反应，而且该蛋白可以诱导牛巨噬细胞高表达IL‑8、IL‑12，而IL‑8可以激活中性粒细胞，IL‑12可以激活NK细胞和T细胞。因此认为MbovP570可以激活宿主免疫系统，在研发新药和疫苗方面具有重要潜力。
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公开(公告)号：CN113185588A
公开(公告)日：2021-07-30
申请号：CN202110466319.3
申请日：2021-04-28
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明涉及动物传染病防治技术领域，尤其涉及一种牛支原体MbovP701蛋白及其制备方法与应用。本发明的MbovP701蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO：1所示，编码该蛋白的核苷酸如SEQIDNO：2所示。本发明的MbovP701蛋白在Mg2+存在条件下具有降解外源双链DNA的核酸外切酶功能，且为非经典的分泌蛋白，可以分泌至胞体外发挥核酸外切酶的作用，为牛支原体生长提供必需的营养物质。因此该蛋白可作为分子靶标，应用于制备牛支原体防治药物。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN111856006B
公开(公告)日：2021-07-30
申请号：CN202010572083.7
申请日：2020-06-22
Applicant: 华中农业大学
IPC: C07K14/30 , C12N15/31 , G01N33/569 , A61K39/02 , A61P31/04
Abstract: 本发明公开了牛支原体分泌蛋白MbovP274在制备牛支原体诊断试剂、药物或疫苗中的应用，属于动物传染病防治技术领域。所述牛支原体分泌蛋白MbovP274具有如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列，基因注释信息显示其为功能未知蛋白，通过实验发现MbovP274蛋白具有抗原性，可以与牛支原体阳性血清反应而不与牛支原体阴性血清反应；并且通过western blot鉴定出其为分泌蛋白，进一步验证出该蛋白可以诱导牛巨噬细胞高表达IL‑8、IFN‑γ，而IL‑8是重要的中性粒细胞激活因子，IFN‑γ是广泛的免疫调节因子。综合上述研究，认为MbovP274是牛支原体的重要致病因子且可以激活宿主免疫，在研发新药和疫苗方面具有重要潜力。
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公开(公告)号：CN111856006A
公开(公告)日：2020-10-30
申请号：CN202010572083.7
申请日：2020-06-22
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明公开了牛支原体分泌蛋白MbovP274在制备牛支原体诊断试剂、药物或疫苗中的应用，属于动物传染病防治技术领域。所述牛支原体分泌蛋白MbovP274具有如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列，基因注释信息显示其为功能未知蛋白，通过实验发现MbovP274蛋白具有抗原性，可以与牛支原体阳性血清反应而不与牛支原体阴性血清反应；并且通过western blot鉴定出其为分泌蛋白，进一步验证出该蛋白可以诱导牛巨噬细胞高表达IL-8、IFN-γ，而IL-8是重要的中性粒细胞激活因子，IFN-γ是广泛的免疫调节因子。综合上述研究，认为MbovP274是牛支原体的重要致病因子且可以激活宿主免疫，在研发新药和疫苗方面具有重要潜力。
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公开(公告)号：CN111635880A
公开(公告)日：2020-09-08
申请号：CN202010372788.4
申请日：2020-05-06
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明公开了一种牛支原体VspX基因突变株，命名为牛支原体(Mycoplasma bovis)T8.101，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M 20191038，所述VspX基因具有如SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列。本发明还公开了该突变株的构建方法及其在牛支原体致病机制和免疫防控领域中的应用。该突变株不表达突变基因编码的蛋白，生长曲线、菌落形态和大小与野生菌株无明显差异。但对牛肺上皮细胞系和纤连蛋白的结合能力却显著下降，有作为毒力致弱菌株在牛支原体致病机制研究和防制药物研发领域应用的潜力。
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公开(公告)号：CN111518821A
公开(公告)日：2020-08-11
申请号：CN202010251982.7
申请日：2019-02-21
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明属于动物传染病防制技术领域，具体涉及一种细胞共培养下牛支原体生长必需蛋白CDNPase。克隆得到牛支原体基因Mbov_0328，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示；该基因编码的蛋白质为环二核苷酸磷酸二酯酶(CDNPase)，其蛋白质序列如SEQ ID NO:2‑6所示。从牛支原体基因突变体库中筛选得到该基因的突变菌株，添加外源核苷或核苷酸后生长缺陷回复。突变株在PPLO固体培养基上呈现小菌落表型；蛋白组学检测发现突变株与野生株有38个差异表达蛋白，其中30个蛋白呈上调表达，8个蛋白呈下调表达。由于细胞共培养下的存活能力与毒力相关，该基因和蛋白可望在制备牛支原体药物、疫苗和检测试剂中应用。
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公开(公告)号：CN111393513A
公开(公告)日：2020-07-10
申请号：CN202010225626.8
申请日：2020-03-26
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明属于动物传染病防治技术领域，具体涉及一种牛支原体分泌性黏附蛋白MbovP58。该蛋白基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，其编码的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。根据大肠杆菌密码子偏爱性，将Mbov_0581基因进行突变，突变后的序列如SEQ ID NO:3所示。用免疫转印法证实该蛋白为分泌蛋白，能与感染牛血清反应。用免疫荧光试验和流式细胞术检测大肠杆菌表达的重组蛋白rMbovP581对牛肺上皮细胞(EBL)的黏附，发现MbovP581对EBL细胞具有良好的黏附能力。综合该蛋白的分泌特征、免疫原性和黏附性，该蛋白可望在制备牛支原体诊断试剂、药物和疫苗中应用。
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