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公开(公告)号：CN113512559B
公开(公告)日：2022-11-11
申请号：CN202110467490.6
申请日：2021-04-28
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明涉及动物传染病防治技术领域。本发明提供了牛支原体Mbov_0701突变基因及其突变株和应用。所述基因突变株在Mbov_0701基因的701核苷酸位点后出现插入突变，在与牛胚胎肺细胞共培养时，表现出显著生长缺陷表型，在PPLO固体培养基上表现为小菌落形态。Mbov_0701基因编码蛋白是一种核酸外切酶MbovP701，本申请的基因突变株可应用于牛支原体代谢生理、致病和防治药物制备等领域。
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公开(公告)号：CN109750054B
公开(公告)日：2021-07-02
申请号：CN201910129071.4
申请日：2019-02-21
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明属于动物传染病防制技术领域，具体涉及牛支原体蛋白基因MbovGdpP及其应用。Mbov_0276根据牛支原体HB0801基因组序列人工合成获得。针对大肠杆菌对密码子的偏爱性，对Mbov_0276基因进行了修饰：将牛支原体色氨酸密码子UGA突变成大肠杆菌中编码色氨酸的密码子UGG，得到大肠杆菌重组蛋白rMbovGdpP。Mbov_0276基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，编码的蛋白质序列如SEQ ID NO:2所示。突变株T6.290出现生长缺陷表型，在PPLO培养基上呈小菌落形态，对EBL细胞黏附减少，对盐离子的敏感性升高。该突变株可望在牛支原体致病机理和制备免疫防制药物中应用。
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公开(公告)号：CN108660144A
公开(公告)日：2018-10-16
申请号：CN201710200623.7
申请日：2017-03-30
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明属于动物传染病防治技术领域，具体涉及一种牛支原体多功能蛋白基因CDNPase，蛋白基因Mbov_0328是从牛支原体HB0801基因组中克隆获得。根据大肠杆菌对密码子的偏爱性，申请人对Mbov_0328基因进行了修饰，将牛支原体色氨酸密码子UGA突变成大肠杆菌中编码色氨酸的密码子UGG，最终获得由大肠杆菌表达的重组蛋白rCDNPase。本发明克隆的蛋白的编码基因的核苷酸序列是SEQ ID NO:11中1-969位碱基所示的序列，其蛋白质的序列如SEQ ID NO:12所示。本发明的重组蛋白具有磷酸二酯酶和超小片段核酸酶的活性。
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公开(公告)号：CN109652357B
公开(公告)日：2020-12-01
申请号：CN201910128368.9
申请日：2019-02-21
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明属于动物传染病防制技术领域，具体涉及细胞共培养下生长缺陷的牛支原体突变株及应用,从牛支原体基因突变体库中筛选得到一株牛支原体Mbov_0328基因缺失突变菌株T9.386，该基因编码环二核苷酸磷酸二酯酶。突变菌株与牛胚胎肺细胞共培养时，表现出显著生长缺陷表型；在PPLO固体培养基上表现为小菌落形态。所述的突变株与野生菌株间的蛋白组学呈现显著的差异表达谱。突变菌株间具有38个差异表达蛋白，其中30个蛋白呈上调表达，8个蛋白呈下调表达。该突变株可在牛支原体代谢生理、致病和免疫防制领域应用。
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公开(公告)号：CN113185588A
公开(公告)日：2021-07-30
申请号：CN202110466319.3
申请日：2021-04-28
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明涉及动物传染病防治技术领域，尤其涉及一种牛支原体MbovP701蛋白及其制备方法与应用。本发明的MbovP701蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO：1所示，编码该蛋白的核苷酸如SEQIDNO：2所示。本发明的MbovP701蛋白在Mg2+存在条件下具有降解外源双链DNA的核酸外切酶功能，且为非经典的分泌蛋白，可以分泌至胞体外发挥核酸外切酶的作用，为牛支原体生长提供必需的营养物质。因此该蛋白可作为分子靶标，应用于制备牛支原体防治药物。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN111518821A
公开(公告)日：2020-08-11
申请号：CN202010251982.7
申请日：2019-02-21
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明属于动物传染病防制技术领域，具体涉及一种细胞共培养下牛支原体生长必需蛋白CDNPase。克隆得到牛支原体基因Mbov_0328，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示；该基因编码的蛋白质为环二核苷酸磷酸二酯酶(CDNPase)，其蛋白质序列如SEQ ID NO:2‑6所示。从牛支原体基因突变体库中筛选得到该基因的突变菌株，添加外源核苷或核苷酸后生长缺陷回复。突变株在PPLO固体培养基上呈现小菌落表型；蛋白组学检测发现突变株与野生株有38个差异表达蛋白，其中30个蛋白呈上调表达，8个蛋白呈下调表达。由于细胞共培养下的存活能力与毒力相关，该基因和蛋白可望在制备牛支原体药物、疫苗和检测试剂中应用。
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公开(公告)号：CN109837226A
公开(公告)日：2019-06-04
申请号：CN201910128376.3
申请日：2019-02-21
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明属于动物传染病防治技术领域，涉及黏附能力降低的牛支原体基因突变株及黏附蛋白。蛋白基因Mbov_0503从牛支原体HB0801基因组中克隆获得。根据大肠杆菌对密码子的偏爱性，对Mbov_0503基因进行了修饰，将牛支原体色氨酸密码子UGA突变成大肠杆菌中编码色氨酸的密码子UGG，获得重组蛋白Mbov0503。本发明的蛋白基因核苷酸序列如SEQ ID NO:13所示，编码的蛋白质序列如SEQ ID NO:14所示。本发明的突变株从突变体库筛选的黏附缺陷株。该突变株对宿主EBL细胞的黏附能力，对MDBK细胞的跨膜传播能力及对细胞间紧密连接的破坏能力较野生株显著下降。可在牛支原体致病和防控中应用。
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公开(公告)号：CN109750054A
公开(公告)日：2019-05-14
申请号：CN201910129071.4
申请日：2019-02-21
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明属于动物传染病防制技术领域，具体涉及牛支原体蛋白基因MbovGdpP及其应用。Mbov_0276根据牛支原体HB0801基因组序列人工合成获得。针对大肠杆菌对密码子的偏爱性，对Mbov_0276基因进行了修饰：将牛支原体色氨酸密码子UGA突变成大肠杆菌中编码色氨酸的密码子UGG，得到大肠杆菌重组蛋白rMbovGdpP。Mbov_0276基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，编码的蛋白质序列如SEQ ID NO:2所示。突变株T6.290出现生长缺陷表型，在PPLO培养基上呈小菌落形态，对EBL细胞黏附减少，对盐离子的敏感性升高。该突变株可望在牛支原体致病机理和制备免疫防制药物中应用。
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公开(公告)号：CN109652357A
公开(公告)日：2019-04-19
申请号：CN201910128368.9
申请日：2019-02-21
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明属于动物传染病防制技术领域，具体涉及细胞共培养下生长缺陷的牛支原体突变株及应用,从牛支原体基因突变体库中筛选得到一株牛支原体Mbov_0328基因缺失突变菌株T9.386，该基因编码环二核苷酸磷酸二酯酶。突变菌株与牛胚胎肺细胞共培养时，表现出显著生长缺陷表型；在PPLO固体培养基上表现为小菌落形态。所述的突变株与野生菌株间的蛋白组学呈现显著的差异表达谱。突变菌株间具有38个差异表达蛋白，其中30个蛋白呈上调表达，8个蛋白呈下调表达。该突变株可在牛支原体代谢生理、致病和免疫防制领域应用。
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公开(公告)号：CN104178475A
公开(公告)日：2014-12-03
申请号：CN201410229884.8
申请日：2014-05-28
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明涉及一种微生物细菌固定化方法，特别是一种利用壳聚糖为载体固定化菌体的方法，包括以下步骤：A、制备固定化载体；B、交联活化固定化载体；C、选取用于固定化的菌体；D、菌体固定化，最后获得经固定化的微生物细菌。本发明优点是：方法简便，制备条件要求低，设备简单，能耗小，制备过程无毒性污染物产生，对环境、工作人员安全，能实现规模化制备生产；最终制备成的固定化微生物细菌成本低，质量稳定性高。制备过程条件温和，可以使固定化菌体保持生物学活性，相比采用包埋对微生物进行固定的方法，本发明可以使底物与菌体直接接触，增加了传质，菌体生物学活性利用率更高。
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