公开(公告)号：CN110499292A

公开(公告)日：2019-11-26

申请号：CN201910415900.5

申请日：2019-05-19

Applicant: 中国食品药品检定研究院

Inventor： 王军志 ,  饶春明 ,  秦玺 ,  李山虎 ,  姚文荣 ,  史新昌 ,  刘兰 ,  贾春翠 ,  黄芳 ,  周勇 ,  段茂芹

IPC: C12N5/10 ,  C12N15/867 ,  G01N33/68 ,  G01N33/569

Abstract: 一种用于检测重组人表皮生长因子生物学活性的高反应性细胞株，利用原有的rhEGF测活细胞NIH3T3，在随机敲除细胞内的某些基因后，挑取单克隆，得到对rhEGF反应性更好的细胞株NIH3T3-CRSPRV2(6),NIH3T3-CRISPRV2(6)细胞株经二代测序和转录组热图实验鉴定，敲除的某些基因为Pcdhgb4和H1fx，gRNA分别为ATAGTCTGTGTTTCACTACC、GCGCCCTCGCTAGGGCCCGA。具体检测步骤为：NIH3T3-CRSPRV2(6)以6,000个/孔铺96孔板，用PBS饥饿30min，加入含系列浓度rhEGF的分析培养基，作用48h，MTT法检测细胞活性。该发明检测方法操作时间缩短，反应灵敏，信噪比较高，降低血清干扰，对于rhEGF的质量控制和临床应用具有重要意义。

公开(公告)号：CN110093451A

公开(公告)日：2019-08-06

申请号：CN201910282012.0

申请日：2019-04-09

Applicant: 中国食品药品检定研究院

Inventor： 饶春明 ,  王军志 ,  姚文荣 ,  范文红 ,  于雷 ,  秦玺 ,  史新昌 ,  刘兰

IPC: C12Q1/6897 ,  C12Q1/02 ,  C12N15/85

Abstract: 本发明涉及荧光素酶报告基因法测定重组人生长激素Fc融合蛋白的生物学活性。所述方法利用STAT5反应元件(SGG1)和GHR质粒，转染HEK293细胞后获得稳定表达SGG1荧光素酶报告基因和GHR的细胞株，加入生长激素Fc融合蛋白刺激后，激活SGG1反应元件下游荧光素酶报告基因表达，根据荧光信号值拟合四参数曲线确定生长激素Fc融合蛋白的生物学活性。本发明针对生长激素Fc融合蛋白的生物学活性测定建立了易于操作、灵敏度高、变异系数小和准确性高的检测方法，对于生长激素Fc融合蛋白的研发和生产中的质量控制具有重要的指导作用。

公开(公告)号：CN105628773B

公开(公告)日：2019-07-16

申请号：CN201410617618.2

申请日：2014-11-05

Applicant: 中国食品药品检定研究院

Inventor： 王军志 ,  徐颖华 ,  张金龙 ,  辛晓芳

IPC: G01N27/447

Abstract: 本发明涉及一种用于钩端螺旋体疫苗菌种的质量控制的方法，所述方法包括：a.对所述钩端螺旋体疫苗菌种进行动物传代，所述动物传代是将所述钩端螺旋体疫苗菌种接种动物，然后通过采取动物心脏血液，培养钩端螺旋体，用于钩端螺旋体菌种传代；b.对进行所述动物传代前和进行所述动物传代后不同代次的钩端螺旋体疫苗菌种进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析；c.比较所得到的DNA图谱；其中，如果所得到的DNA图谱一致，则说明进行所述动物传代前和进行所述动物传代后不同代次的钩端螺旋体疫苗菌种是稳定的。本发明的方法是通过对钩体菌种整个染色体进行分析，具有重复性好、区分能力强、结果稳定且对结果的解释更清楚的优点。

公开(公告)号：CN107760760A

公开(公告)日：2018-03-06

申请号：CN201710897630.7

申请日：2017-09-28

Applicant: 中国食品药品检定研究院

Inventor： 王军志 ,  于传飞 ,  高凯 ,  王兰 ,  曹俊霞 ,  杨雅岚

IPC: C12Q1/66 ,  C12Q1/02

CPC classification number: C12Q1/66 ,  G01N33/502

Abstract: 本发明涉及一种快速测定IL-6及IL-6受体抗体药物生物学活性的方法。所述方法包括构建得到稳定表达SIE报告基因的效应细胞，用IL-6刺激激活报告基因表达，并用IL-6/IL-6R抗体药物阻断IL-6信号通路，根据测定的报告基因信号值拟合四参数曲线确定抗体生物学活性。本发明针对IL-6/IL-6R抗体药物生物学活性测定建立了更加快速、准确的定量检测方法，实验周期短，操作简便，并且避免了长时间孵育所带来的细胞污染可能性等客观因素的问题。

公开(公告)号：CN103293315B

公开(公告)日：2016-05-25

申请号：CN201210195635.2

申请日：2012-06-14

Applicant: 中国食品药品检定研究院

Inventor： 王军志 ,  饶春明 ,  于雷 ,  王兰 ,  高凯

IPC: G01N33/68 ,  C12N5/10

Abstract: 一种新的促胰岛素分泌肽融合蛋白(Exendin-4-HSA，Byetalog)生物活性测定方法。它的基本原理是：将GLP-1R和cAMP反应元件(cAMP response element，CRE)报告基因载体共转染CHO-K1细胞，加压筛选和单克隆分离培养得到稳定单克隆细胞株CHOglplr/crec14。GLP-1R与配体结合后，经过一系列信号转导，激活CRE报告基因萤光素酶的表达，通过检测Byetalog刺激后萤光素酶表达的变化来对Byetalog活性进行定量。具体检测步骤为：CHOglplr/crec14细胞6000个/孔铺96孔板，培养16-18小时，加入不同浓度Byetalog刺激6小时，检测萤光素酶活性。该方法操作简单，反应灵敏，变异性小，对于Byetalog的质量控制和临床应用具有重要意义。

公开(公告)号：CN103993066A

公开(公告)日：2014-08-20

申请号：CN201310547894.1

申请日：2013-11-08

Applicant: 中国食品药品检定研究院

Inventor： 王军志 ,  饶春明 ,  杨玉帅 ,  周勇 ,  于雷 ,  史新昌 ,  李响 ,  秦玺

IPC: C12Q1/66

Abstract: 一种新的重组人促红细胞生成素(Recombinant Human Erythropoietin，rhEPO)生物活性测定方法。它的基本原理是：利用STAT5的反应元件(sis inducible element，SIE；the gamma response region，GRR；the interferon γ-activated sequence，GAS)构建报告基因载体，转染UT-7细胞，加压筛选和单克隆分离培养得到稳定单克隆细胞株UT-7／G7。rhEPO与配体结合后，经过一系列信号转导，激活报告基因萤光素酶的表达，通过检测rhEPO刺激后萤光素酶表达的变化来对rhEPO活性进行定量。具体检测步骤为：UT-7／G7细胞用DPBS洗3次后，分析培养基培养17-20小时，以60,000个／孔铺96孔板，加入系列浓度的rhEPO，作用4h，检测萤光素酶活性。该方法操作简单，反应灵敏，变异性小，对于rhEPO的质量控制和临床应用具有重要意义。