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公开(公告)号：CN110029146A
公开(公告)日：2019-07-19
申请号：CN201910284058.6
申请日：2019-04-09
Applicant: 中国食品药品检定研究院
IPC: C12Q1/66
Abstract: 本发明涉及报告基因法测定重组人角质细胞生长因子的生物学活性。所述方法利用包含SRE反应元件的质粒和包含KGFR2Ⅲb基因的过表达慢病毒，分别转染和感染HEK293和HaCat细胞后获得稳定表达SRE和KGFR2Ⅲb的细胞株，加入重组KGF-1/KGF-2刺激后，激活含SRE启动子下游的荧光素酶报告基因表达，根据报告基因信号值拟合四参数曲线确定重组KGF-1/KGF-2的生物学活性。本发明针对KGF的生物学活性测定建立了快速、敏感、准确的定量检测方法，试验周期短，操作简便，对于重组KGF-1的研发和生产中的质量控制具有重要的指导作用。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN110133241B
公开(公告)日：2022-05-27
申请号：CN201910420569.6
申请日：2019-05-21
Applicant: 中国食品药品检定研究院
Abstract: 本发明涉及一种测定重组人可溶性gp130‑Fc融合蛋白生物学活性的新方法。所述方法利用SIE萤光素酶报告基因质粒，转染CHO‑K1细胞后加压筛选获得稳定表达SIE萤光素酶的单克隆细胞株。利用IL‑6/sIL‑6Rα复合物刺激激活SIE反应元件下游萤光素酶报告基因表达，可溶性gp130‑Fc融合蛋白竞争性结合IL‑6/sIL‑6Rα复合物，剂量依赖性抑制萤光素酶表达，加入萤光素酶底物后，根据测定的化学发光值拟合四参数曲线确定重组人可溶性gp130‑Fc融合蛋白的生物学活性。本发明针对重组人可溶性gp130‑Fc融合蛋白的生物学活性建立了快速准确的检测方法，避免了细胞培养的不确定性所带来的不稳定因素和长时间孵育所带来的细胞污染等可能出现的问题。
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公开(公告)号：CN110499292A
公开(公告)日：2019-11-26
申请号：CN201910415900.5
申请日：2019-05-19
Applicant: 中国食品药品检定研究院
IPC: C12N5/10 , C12N15/867 , G01N33/68 , G01N33/569
Abstract: 一种用于检测重组人表皮生长因子生物学活性的高反应性细胞株，利用原有的rhEGF测活细胞NIH3T3，在随机敲除细胞内的某些基因后，挑取单克隆，得到对rhEGF反应性更好的细胞株NIH3T3-CRSPRV2(6),NIH3T3-CRISPRV2(6)细胞株经二代测序和转录组热图实验鉴定，敲除的某些基因为Pcdhgb4和H1fx，gRNA分别为ATAGTCTGTGTTTCACTACC、GCGCCCTCGCTAGGGCCCGA。具体检测步骤为：NIH3T3-CRSPRV2(6)以6,000个/孔铺96孔板，用PBS饥饿30min，加入含系列浓度rhEGF的分析培养基，作用48h，MTT法检测细胞活性。该发明检测方法操作时间缩短，反应灵敏，信噪比较高，降低血清干扰，对于rhEGF的质量控制和临床应用具有重要意义。
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公开(公告)号：CN110093451A
公开(公告)日：2019-08-06
申请号：CN201910282012.0
申请日：2019-04-09
Applicant: 中国食品药品检定研究院
IPC: C12Q1/6897 , C12Q1/02 , C12N15/85
Abstract: 本发明涉及荧光素酶报告基因法测定重组人生长激素Fc融合蛋白的生物学活性。所述方法利用STAT5反应元件(SGG1)和GHR质粒，转染HEK293细胞后获得稳定表达SGG1荧光素酶报告基因和GHR的细胞株，加入生长激素Fc融合蛋白刺激后，激活SGG1反应元件下游荧光素酶报告基因表达，根据荧光信号值拟合四参数曲线确定生长激素Fc融合蛋白的生物学活性。本发明针对生长激素Fc融合蛋白的生物学活性测定建立了易于操作、灵敏度高、变异系数小和准确性高的检测方法，对于生长激素Fc融合蛋白的研发和生产中的质量控制具有重要的指导作用。
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公开(公告)号：CN110499292B
公开(公告)日：2022-09-06
申请号：CN201910415900.5
申请日：2019-05-19
Applicant: 中国食品药品检定研究院
IPC: C12N5/10 , C12N15/867 , G01N33/68 , G01N33/569
Abstract: 一种用于检测重组人表皮生长因子生物学活性的高反应性细胞株，利用原有的rhEGF测活细胞NIH3T3，在随机敲除细胞内的某些基因后，挑取单克隆，得到对rhEGF反应性更好的细胞株NIH3T3‑CRSPRV2(6),NIH3T3‑CRISPRV2(6)细胞株经二代测序和转录组热图实验鉴定，敲除的某些基因为Pcdhgb4和H1fx，gRNA分别为ATAGTCTGTGTTTCACTACC、GCGCCCTCGCTAGGGCCCGA。具体检测步骤为：NIH3T3‑CRSPRV2(6)以6,000个/孔铺96孔板，用PBS饥饿30min，加入含系列浓度rhEGF的分析培养基，作用48h，MTT法检测细胞活性。该发明检测方法操作时间缩短，反应灵敏，信噪比较高，降低血清干扰，对于rhEGF的质量控制和临床应用具有重要意义。
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公开(公告)号：CN110133241A
公开(公告)日：2019-08-16
申请号：CN201910420569.6
申请日：2019-05-21
Applicant: 中国食品药品检定研究院
IPC: G01N33/50
Abstract: 本发明涉及一种测定重组人可溶性gp130-Fc融合蛋白生物学活性的新方法。所述方法利用SIE萤光素酶报告基因质粒，转染CHO-K1细胞后加压筛选获得稳定表达SIE萤光素酶的单克隆细胞株。利用IL-6/sIL-6Rα复合物刺激激活SIE反应元件下游萤光素酶报告基因表达，可溶性gp130-Fc融合蛋白竞争性结合IL-6/sIL-6Rα复合物，剂量依赖性抑制萤光素酶表达，加入萤光素酶底物后，根据测定的化学发光值拟合四参数曲线确定重组人可溶性gp130-Fc融合蛋白的生物学活性。本发明针对重组人可溶性gp130-Fc融合蛋白的生物学活性建立了快速准确的检测方法，避免了细胞培养的不确定性所带来的不稳定因素和长时间孵育所带来的细胞污染等可能出现的问题。
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