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公开(公告)号：CN102653742B
公开(公告)日：2014-03-26
申请号：CN201210145502.4
申请日：2010-08-13
Applicant: 江南大学
Abstract: 一种耐高温的华根霉脂肪酶突变体，属于酶的基因工程技术领域。本发明公开了由华根霉（Rhizopuschinensis）CCTCC M201021脂肪酶作为亲本，经分子生物学技术而获得的热稳定性提高的脂肪酶突变体。在各突变体的氨基酸序列中，涉及到的氨基酸突变为Met101Thr、Glu107Gly、Ala129Ser、Ser151Asn、Cys160Leu、Lys161Arg、Pro168Leu、Pro168His、Leu180His、Asp182Tyr、Thr183Ala、Thr218Ser、Lys219Asp、Ala230Phe、Ser234Phe、Val261Gly、His317Pro、Val329Ala、Glu363Arg、Asn366Asp、Ser373Cys中的一种或几种。以在65℃下半衰期t50来表示，这些突变体的热稳定性较亲本华根霉脂肪酶得到了提高。本发明也公开了编码脂肪酶突变体的DNA序列、表达载体、宿主细胞。
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公开(公告)号：CN103602605A
公开(公告)日：2014-02-26
申请号：CN201310568071.7
申请日：2013-11-14
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种高效表达米曲霉脯氨酰内肽酶的基因工程菌及其应用，是将基因S2导入毕氏酵母（Pichia pastoris）进行高效表达；所述基因S2编码一种新的脯氨酸特异性内切蛋白酶，核苷酸序列如以下1）或2）所示：1）其核苷酸序列为SEQ ID NO.1，SEQ ID NO.2所示核苷酸序列；2）在1）限定的核苷酸序列基础上经碱基的缺失、取代、插入或突变而成且具有编码有活性的脯氨酸特异性内切蛋白酶的核苷酸序列。所得重组酶具有脯氨酸特异性内切蛋白酶活性以及耐酸性环境等优点，对提高啤酒，葡萄酒，果汁饮品等非生物稳定性具有明显效果，具有重大应用潜力。
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公开(公告)号：CN102839164B
公开(公告)日：2013-10-16
申请号：CN201210327367.5
申请日：2012-09-06
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种基于二硫键强化折叠的热稳定性脂肪酶突变体及其构建方法和应用，属于酶工程技术领域，以华根霉（Rhizopus chinensis）CCTCC M201021脂肪酶作为模板，在脂肪酶的盖子铰链区域引入二硫键而获得的热稳定性提高的脂肪酶突变体，相对于亲本脂肪酶，其Tm提高了7℃，具有广阔的应用前景。
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公开(公告)号：CN102604908B
公开(公告)日：2013-01-23
申请号：CN201210083902.7
申请日：2009-11-11
Applicant: 江南大学
Abstract: 高催化活力脂肪酶突变体，是由华根霉（Rhizopuschinensis）CCTCCM201021脂肪酶基因，其Genbank登录号EF405962，运用易错PCR方法，通过多轮重组和定点突变，经定向进化而获得的脂肪酶突变体，在突变体的氨基酸序列中，包含氨基酸突变Ser373Asn；以转换数Kcat表示，脂肪酶突变体的酶活较出发菌株得到了提高。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN102604912A
公开(公告)日：2012-07-25
申请号：CN201210083915.4
申请日：2009-11-11
Applicant: 江南大学
Abstract: 高活力华根霉脂肪酶突变体，其由华根霉（Rhizopuschinensis）CCTCC No.M201021脂肪酶基因，其Genbank登录号EF405962，运用易错PCR方法，通过多轮重组和定点突变，经定向进化而获得的脂肪酶突变体，在突变体的氨基酸序列中，包含氨基酸突变Thr195Tyr；以转换数Kcat表示，脂肪酶突变体的酶活较出发菌株得到了提高。
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公开(公告)号：CN102080092B
公开(公告)日：2012-02-08
申请号：CN201010578626.2
申请日：2010-12-08
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种高表达量的脂肪酶基因及其分泌表达载体，属于遗传工程领域。所述脂肪酶基因DNA序列为SEQ IDNO.1或在严格条件下与SEQ IDNO.1限定的DNA序列杂交且编码具有脂肪酶活性的蛋白质的DNA分子。本发明还公开了一种应用所述脂肪酶基因生产脂肪酶的方法，构建的工程菌克服了该酶表达量及酶活一直不高的缺陷，摇瓶发酵酶活最高可达123.4U/mL，比出发重组菌提高了约11倍，7L罐发酵甲醇诱导84h酶活约为7062.5U/mL，比摇瓶发酵提高了约56.2倍，具有广阔的应用前景。
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公开(公告)号：CN101545002A
公开(公告)日：2009-09-30
申请号：CN200910026722.3
申请日：2009-04-28
Applicant: 江南大学
Abstract: 一种生物拆分L－薄荷醇反应中提高底物浓度的方法，属于生物法拆分外消旋化合物技术领域。本发明为在不对称拆分DL－乙酸薄荷酯反应体系中，控制体系pH值在5.0～8.0，转化菌株在华根霉(Rhizopus chinensis)CCTCC M201021，米根霉(Rhizopus oryzae)AS 3.41，近平滑假丝酵母CICC 1676，洋葱布克氏菌(Burkholderia cepacia)ATCC 25416，荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)AS1.823、或荧光假单胞菌(Pseudomonas.fluorescens)AS 1.55中获得，添加树脂HZ－801、HZ－816、D－315、D－202、HD－81、NKA－II、D－406、DA－201之一种，提高单批次转化底物DL－乙酸薄荷酯的浓度达6倍。
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公开(公告)号：CN101544966A
公开(公告)日：2009-09-30
申请号：CN200910026718.7
申请日：2009-04-28
Applicant: 江南大学
Abstract: 一种重组酵母脂肪酶的发酵制备方法，属于酶的基因工程技术领域。本发明将含有华根霉(Rhizopus chinensis)CCTCC M201021脂肪酶编码基因SEQ IDNO：1的重组酵母菌株GS115/pPIC9K－proRCL种子培养，然后按5％～10％接种量接种于含40g/L甘油和4mL/L微量元素PTM1溶液的基础盐培养基BSM中；通气搅拌培养，流加补料生长培养液，流加诱导培养液，收集发酵液，加入终浓度均为3％～6％的氯化钙和磷酸氢二钠作为酵母菌体絮凝剂，板框过滤，超滤浓缩，最终制备得到浓缩5～10倍的液体脂肪酶制品；重组酵母发酵培养过程中脂肪酶的表达量可达到2000U/mL发酵液，蛋白表达量为2.5g/L，发酵液比活800U/mg。
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公开(公告)号：CN119081953B
公开(公告)日：2025-05-02
申请号：CN202411308322.2
申请日：2024-09-19
Applicant: 江南大学
IPC: C12N1/20 , C12P7/6409 , C12G3/02 , C12R1/01
Abstract: 本发明公开了一种多元短、中链脂肪酸发酵与菌剂制备方法，属于酿造微生物技术领域。本发明利用解乳酸己小杆菌与嗜硫石单胞菌共发酵制备功能菌液，在提升己酸产量的同时，亦可提升所述两种微生物生物量，同时还可以产戊酸。采用本发明所述的产己酸功能精简菌群筛选方法筛选得到的“精简菌群”进行功能菌液制备时，其己酸产量较高，丁酸产量较低，同时可通过半连续补料操作实现规模化的连续生产运行，生产效能显著优于分批次的发酵方式。本发明技术生产的复合短、中链脂肪酸经酶法酯化后，可通过常规蒸馏提取获得含有多种酯类的复合酯类，可应用于食品和饮料酒增香。此外，在短、中链脂肪酸发酵过程中获得的菌剂可以应用于窖泥制作和窖池养护。
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