一种基于SHERLOCK检测单增李斯特菌的现场可视化试剂盒及应用

    公开(公告)号:CN114075607A

    公开(公告)日:2022-02-22

    申请号:CN202010846569.5

    申请日:2020-08-21

    Applicant: 吉林大学

    Abstract: 本发明公开了一种基于SHERLOCK检测单增李斯特菌的现场可视化试剂盒及应用,所述试剂盒包含用于扩增单增李斯特菌侵袭性相关分泌型内肽酶(invasion associated secreted endopeptidase,iap)基因片段的T7‑RPA引物对,所述的引物对由上游引物和下游引物组成,其中,上游引物、下游引物的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示;Cas13a蛋白和crRNA或二者形成的复合体;以及RNA荧光报告分子。此外,本发明还公开了一种使用所述的现场可视化试剂盒检测单增李斯特菌的方法。利用本发明的试剂盒及检测方法进行单增李斯特菌的检测,可以实现37~42℃条件下恒温检测,结果实现可视化。本发明的方法具有操作简单、检测快速、结果可视化等优点。从而为提高食品行业检测单增李斯特菌水平,降低消费者感染风险提供技术手段。

    一种腹泻性贝毒大田软海绵酸荧光检测试纸及其检测方法

    公开(公告)号:CN110018145B

    公开(公告)日:2022-01-25

    申请号:CN201910330343.7

    申请日:2019-04-23

    Applicant: 吉林大学

    Abstract: 本发明属于食品安全免疫学检测技术领域,具体涉及一种腹泻性贝毒大田软海绵酸荧光检测试纸及其检测方法。所述试纸包括底板,所述底板上从左到右依次固接有加样垫、硝酸纤维素膜和吸水垫,所述硝酸纤维素膜上从左到右依次设置有检测带和参照带;所述检测带由大田软海绵酸‑蛋白质偶联复合物喷射在所述硝酸纤维素膜上干燥后形成;所述参照带由抗小鼠二抗喷射在所述硝酸纤维素膜上,干燥后形成。本发明提供的试纸及检测方法能快速、灵敏地检测出海产样品中的大田软海绵酸的含量水平,适用于大量样本毒素的安全筛查,从而为海产品食用安全提供快速检测试剂。

    鉴定致病性小肠结肠炎耶尔森氏菌的特异性引物对、检测试剂盒及其应用

    公开(公告)号:CN113755612A

    公开(公告)日:2021-12-07

    申请号:CN202110397506.0

    申请日:2021-04-14

    Applicant: 吉林大学

    Abstract: 本发明公开了鉴定致病性小肠结肠炎耶尔森氏菌的特异性引物对、检测试剂盒及其应用。所述特异性引物对为Fe和Re,Fe的序列如SEQ ID NO.1所示,Re的序列如SEQ ID NO.2所示。所述检测试剂盒包括特异性引物对、RPA核酸扩增试剂、量子点荧光微球与地高辛抗体的偶联物QDNBs‑McAb、核酸检测试纸条、上样缓冲液。特异性引物对的5’端分别修饰有地高辛和生物素,经过RPA核酸扩增后,阳性产物带有地高辛和生物素标记。本发明成功设计筛选了适用于RPA的特异性引物对,建立了能够鉴定致病性小肠结肠炎耶尔森氏菌的快速检测方法,其最低检测限为9.6×103CFU/mL。所建立的方法无需使用大型仪器,适合于现场检测,并且该方法从基因组提取到肉眼观察结果的过程仅需要10min左右。

    一种纤维单胞菌及其制备微生物絮凝剂的方法和应用

    公开(公告)号:CN111394279B

    公开(公告)日:2021-11-19

    申请号:CN202010221639.8

    申请日:2020-03-26

    Abstract: 本发明公开了一种纤维单胞菌及利用纤维单胞菌制备微生物絮凝剂的方法和应用,本发明解决现有微生物絮凝剂生产成本高,絮凝后易产生二次污染等问题,新发现菌株40‑2的分类命名为家畜纤维单胞菌(Cellulomonaslivestock sp.)40‑2,家畜纤维单胞菌40‑2已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号为CGMCC No.1.17732。本发明优点如下:1、发现一个纤维单胞菌的新种—家畜纤维单胞菌2、利用家畜纤维单胞菌制备的微生物絮凝剂絮凝性能良好;3、所产微生物絮凝剂高效、安全、无毒且不产生二次污染;4、所产微生物絮凝剂发酵时间短,投加量低,节约成本。此外,本发明涉及微生物絮凝剂在处理家畜养殖场废水方面具有较大的应用潜力和良好的应用前景。

    一种纤维单胞菌及其制备微生物絮凝剂的方法和应用

    公开(公告)号:CN111394279A

    公开(公告)日:2020-07-10

    申请号:CN202010221639.8

    申请日:2020-03-26

    Abstract: 本发明公开了一种纤维单胞菌及利用纤维单胞菌制备微生物絮凝剂的方法和应用,本发明解决现有微生物絮凝剂生产成本高,絮凝后易产生二次污染等问题,新发现菌株40-2的分类命名为家畜纤维单胞菌(Cellulomonaslivestock sp.)40-2,家畜纤维单胞菌40-2已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号为CGMCC No.1.17732。本发明优点如下:1、发现一个纤维单胞菌的新种—家畜纤维单胞菌2、利用家畜纤维单胞菌制备的微生物絮凝剂絮凝性能良好;3、所产微生物絮凝剂高效、安全、无毒且不产生二次污染;4、所产微生物絮凝剂发酵时间短,投加量低,节约成本。此外,本发明涉及微生物絮凝剂在处理家畜养殖场废水方面具有较大的应用潜力和良好的应用前景。

    一种基于适配子检测N-羟乙酰神经氨酸含量的方法

    公开(公告)号:CN108709989A

    公开(公告)日:2018-10-26

    申请号:CN201810531160.7

    申请日:2018-05-29

    Applicant: 吉林大学

    CPC classification number: G01N33/5308 G01N2333/435

    Abstract: 本发明属于分子生物检测技术领域,特别涉及一种基于适配子检测N‑羟乙酰神经氨酸含量的方法,采用N‑羟乙酰神经氨酸‑载体蛋白的偶联物为检测抗原,生物素化修饰的适配子为检测探针,利用包被抗原与检测样品中游离的N‑羟乙酰神经氨酸竞争结合特异性检测探针作为反应模式,经HRP标记的链酶亲和素催化底物显色,测得吸光度值,实现检测样品中N‑羟乙酰神经氨酸的定量测定。本发明检测方法成本低廉,可快速、简便、灵敏地测定尿液、血清及动物源性食品牛奶中的N‑羟乙酰神经氨酸的含量,对肿瘤的诊断、预防、风险评估以及动物源性食品污染领域提供研究素材。

    一种结肠靶向重组毒素及制备方法和应用

    公开(公告)号:CN106084065A

    公开(公告)日:2016-11-09

    申请号:CN201610394140.0

    申请日:2016-06-06

    Applicant: 吉林大学

    Abstract: 本发明涉及一种结肠靶向重组毒素及制备方法和应用,属于利用基因工程制备结肠靶向重组毒素。一种结肠靶向重组毒素,其氨基酸序列为SEQ ID No.2所示,以pET28a为表达载体,BL21(DE3)为表达宿主,构建了BL21(DE3)(pET28a‑rCCK96‑104PE38KDEL)重组工程菌株,带6聚组氨酸标签,便于纯化。利用Ni‑NTA金属螯合亲和层析柱,结合rTEV酶的特异性切割的方法,仅通过两步纯化,就获得了高活性、高纯度、无冗余序列的rCCK96‑104PE38KDEL重组蛋白,纯度在95%以上;在体外细胞实验中,纯化后的rCCK96‑104PE38KDEL重组免疫毒素能够特异性杀死高表达CCK2R的结肠癌细胞,抑制了癌细胞的增殖和扩散,对正常细胞和其它非CCK2R高表达肿瘤细胞没有杀伤作用,因此,rCCK96‑104PE38KDEL符合作为肿瘤靶向药物的条件,为治疗结肠癌提供了新的方向。

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