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公开(公告)号：CN103421824A8
公开(公告)日：2014-03-26
申请号：CN201310320412.9
申请日：2013-08-28
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 发明名称：降解除草剂草甘膦的抗性基因及其编码蛋白本发明属于基因工程领域，涉及一种高效降解除草剂草甘膦的抗性基因的分离、体外定向进化及功能鉴定，本发明还涉及草甘膦的抗性基因在植物除草剂草甘膦，B3S1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，其编码的蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。通过扩增来自海洋细菌蜡状芽孢杆菌（Bacillus cereus）的甘氨酸氧化酶编码基因（thiO），对其进行连续两轮随机突变和一轮DNA改组试验，并结合基于T7噬菌体裂解-辣根过氧物酶/邻联茴香胺酶偶联活性筛选技术，获得最终草甘膦氧化酶突变体B3S1。本发明证实了该基因的功能及在降解除草剂草甘膦抗性中应用途径。
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公开(公告)号：CN102559717B
公开(公告)日：2013-03-06
申请号：CN201210001518.8
申请日：2012-01-05
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明公开了一种抗寒的草铵膦抗性基因及应用，将深海混合菌液按1%的接种量转接到含有草铵膦的HLB的蛋白胨，酵母培养物和氯化钠液体培养基上培养。再将生长好的菌液在含有草铵膦的HLB固体培养基上划线培养。划线分离得到单菌落以后，再按照上述方法复筛一次，得到的抗性细菌。抽提该原始单菌落的基因组DNA，并以其为PCR模板，选用16S扩增通用引物1492R（5-GGTTACCTTGTTACGACTT-3）和27F（5-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3）以细菌染色体DNA为模板进行PCR扩增，鉴定结果为Rhodococcusequi，原始细菌的16S序列为SEQIDNO:1所示的核苷酸序列，一种分离的草铵膦抗性的编码基因，其序列为SEQIDNO：2所示的核苷酸序列。经过生物学实验验证，证明该酶具有高活性，耐低温，可广泛用于不同抗除草剂转基因作物。
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公开(公告)号：CN101392232B
公开(公告)日：2012-06-27
申请号：CN200810197553.5
申请日：2008-11-07
Applicant: 华中农业大学
IPC: C12N1/21 , C07K14/195 , A61K39/02 , A61P31/04 , C12R1/19
Abstract: 本发明涉及动物细菌学与人畜共患传染病学技术领域。具体涉及一种显性抑制突变体F427D作为炭疽芽孢杆菌毒素抑制剂及疫苗的应用。本发明通过炭疽芽孢杆菌致死毒素基因的克隆，蛋白表达与纯化，基因定点饱和突变等方法，得到炭疽芽孢杆菌保护性抗原蛋白(即显性抑制突变体F427D)，该突变体已成功地克隆到原核表达载体pGEX-KG中，构建了重组质粒pGEX-KG-PA(F427D)。包含该重组质粒的大肠杆菌被命名为Escherichia coli DH5α/pGEX-KG-PA(F427D)，保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC-M208158。本发明还公开了制备该抗原蛋白的方法，利用该抗原蛋白制备炭疽毒素抑制剂和亚单位疫苗及其应用。
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公开(公告)号：CN101434960B
公开(公告)日：2011-09-28
申请号：CN200810236961.7
申请日：2008-12-23
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明属于微生物基因工程技术领域。具体涉及一种炭疽芽孢杆菌保护性抗原的突变体及其编码蛋白。所述突变基因的序列及其编码的突变蛋白的氨基酸序列如序列表SEQ IDNO：1所示。经过生物学验证，该突变体蛋白完全丧细胞毒性，且能够抑制野生型致死毒素的细胞毒性。
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公开(公告)号：CN1952151A
公开(公告)日：2007-04-25
申请号：CN200510019596.0
申请日：2005-10-17
Applicant: 华中农业大学
IPC: C12N15/32 , C07K14/325 , A01N63/02
CPC classification number: A01N63/00 , C07K14/325
Abstract: 本发明公开了一种来自于苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白基因的分离、克隆及其应用。本发明从苏云金芽胞杆菌华中亚种YBt－978菌株中分离得到一个新的杀虫晶体蛋白基因cry7Ba1，该基因的编码产物为一种新的杀虫晶体蛋白Cry7Ba1，对鳞翅目昆虫具有杀虫活性。Cry7Ba1蛋白由1154个氨基酸残基组成，它与现有公开发表的蛋白质同源性不超过80％，并且在该蛋白靠近N－末端一半的氨基酸序列与现有公开发表蛋白质同源性不超过50％。本发明还公开了这种新的杀虫晶体蛋白基因序列，通过合适的表达载体转化微生物表达了该基因的编码产物Cry7Ba1蛋白，使之表现出对鳞翅目害虫的杀虫活性。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN1167790C
公开(公告)日：2004-09-22
申请号：CN01128475.7
申请日：2001-09-19
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明属于微生物农药技术领域，涉及苏云金芽胞杆菌基因工程菌的构建、生产工艺及产品。特征是，将含有cry1Aa10-P20基因的重组质粒pBMB1808转入对棉铃虫高毒力菌株YBT-1520中，获得一株适合生产微生物杀虫剂的高毒力基因工程菌WG001(一种苏云金芽胞杆菌，Bacillus thuringiensis，保藏在CCTCC，保藏日：2001年9月13日，保藏号：M201033)。该菌株带有cry1Aa、cry1Ab和cry1Ac杀虫晶体蛋白基因。与天然菌株相比，WG001的杀虫晶体蛋白产量提高一倍以上，伴胞晶体增大2.1倍，对小菜蛾和棉铃虫均具有良好的防效。
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公开(公告)号：CN1345928A
公开(公告)日：2002-04-24
申请号：CN00116062.1
申请日：2000-09-30
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明属于微生物杀虫农药技术领域,具体涉及一种杀植物线虫和动物寄生虫的苏云金芽胞杆菌高毒力菌株的选育。本发明的特征是,分离到一株对植物线虫和动物寄生虫有毒的苏云金芽胞杆菌菌株YBT－1532,其鞭毛抗原血清型为H10,产生菱形伴胞晶体,组成伴胞晶体的杀虫晶体蛋白分子量为130kDa,该蛋白对植物线虫和动物寄生虫有毒杀作用。与已有技术相比,本发明的菌株及其杀虫晶体蛋白具有毒力高,特异性强等突出优点。
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公开(公告)号：CN111041011B
公开(公告)日：2021-04-27
申请号：CN201910851757.4
申请日：2019-09-10
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明属于基因工程及分子生物学技术领域，具体涉及一种经定向进化技术人工改造的可显著提高草甘膦降解性能的草甘膦氧化酶突变体，并进一步公开了该突变体及其编码基因在新型耐草甘膦作物的培育以及草甘膦污染生物降解领域中的应用。本发明所述方案通过DNA改组技术(DNA shuffling)，基于已知的草甘膦氧化酶突变体，构建得到草甘膦氧化酶突变体库，并从大量的突变体中筛选得到了两个对草甘膦催化效率提高的突变体B5R18和B5R26。本发明所述突变体B5R18和B5R26具有很高的的草甘膦降解活性，有效解决了现有草甘膦氧化酶活性低的缺陷，在草甘膦抗性作物培育及草甘膦污染的降解处理等方面具有很大的潜在应用价值。
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公开(公告)号：CN110272880B
公开(公告)日：2021-01-01
申请号：CN201910428622.7
申请日：2019-05-22
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及一种通过定点突变技术获得的对草甘膦催化活性和底物特异性提高的草甘膦降解酶突变体。本发明所述的草甘膦降解酶突变体B4S7‑F63X，在现有草甘膦降解酶B4S7的基础上，改造后的草甘膦降解酶在其第63位的苯丙氨酸进行突变为丙氨酸或组氨酸。对比现有的文献报道和专利数据，B4S7‑F63A对草甘膦具有最高的催化效率，B4S7‑F63H对草甘膦具有最高的底物特异性，所述草甘膦降解酶编码基因导入植物后，有望赋予植物抗草甘膦的同时，实现草甘膦的高效分解，解决草甘膦在植物中的残留问题，在培育新型耐草甘膦作物及培育能够降解草甘膦的新型抗除草剂植物领域具有极大的应用潜力。
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公开(公告)号：CN107129993B
公开(公告)日：2020-10-13
申请号：CN201610317483.7
申请日：2016-05-14
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明属于植物基因工程技术领域，具体涉及一种修饰的抗草甘膦基因及抗草甘膦水稻的培育方法。本发明包括草甘膦基因的修饰、抗草甘膦基因的植物表达载体的构建和抗草甘膦转基因水稻的培育方法。人工合成了修饰的抗草甘膦基因为目标基因，其序列如SEQ ID NO：1所述，采用农杆菌介导的遗传转化法，将目标基因导入水稻受体，获得高抗草甘膦的转基因水稻GT28。通过有性杂交和体细胞杂交技术将GT28的抗草甘膦基因重组到新的水稻种质中，育成水稻抗草甘膦新品种(系)。
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