葡萄病原菌诱导型启动子的分离方法及在抗病育种中的应用

    公开(公告)号:CN102121004A

    公开(公告)日:2011-07-13

    申请号:CN201010582556.8

    申请日:2010-12-03

    Abstract: 本发明公开了一种启动子快速克隆法,以克隆获得两个葡萄病原菌诱导型启动子构建启动子::报告基因融合载体,两个启动子启动报告基因在葡萄叶片中的表达受白粉菌诱导,为葡萄抗病基因工程提供病原菌诱导型启动子的克隆方法并成功应用于葡萄抗病育种中。克隆的两个诱导型启动子均能在病原菌侵染时以精准方式调控转入外源基因,使转入基因仅在受病原菌诱导的条件下被启动表达,在葡萄抗病育种中,仅需把重组载体中启动子所启动的报告基因换成任何抗病基因,即可转化葡萄获得病原菌诱导表达外源抗病基因的转化植株,减少抗病基因工程育种中组成型启动子对转基因葡萄造成的负面影响,最大限度发挥转基因优势。

    一种提高无核葡萄育种效率的方法

    公开(公告)号:CN101238791A

    公开(公告)日:2008-08-13

    申请号:CN200710306512.0

    申请日:2007-12-29

    Abstract: 本发明公开了一种提高无核葡萄育种效率的方法,它是将一种植物生长抑制剂类物质矮壮素,或细胞分裂素类物质6-BA溶解配制成的药剂,在花前10~20天喷施到花穗上,在花后40~50天摘取葡萄果粒,取出胚珠进行胚挽救,使用本发明的胚发育率无核白由0~4.4%提高至8.3~11.9%;森田尼无核由0.5~2.5%提高到1.8~21.9%;火焰无核由7.1~17.1%提高到14.1~25.4%。本发明通过提高这些无核葡萄胚发育率,增加了杂交后代成苗的基数,从而能得到更多的杂交后代,提高育种效率,扩大了可用于无核葡萄杂交育种的亲本选择范围,加速无核品种的选育进程。

    提高抗病无核葡萄胚挽救育种效率的双相培养基及制备方法

    公开(公告)号:CN1896227A

    公开(公告)日:2007-01-17

    申请号:CN200610043024.0

    申请日:2006-06-26

    Inventor: 王跃进 田莉莉

    Abstract: 本发明公开了一种提高抗病无核葡萄胚挽救育种效率的双相培养基及制备方法,它是按一定组分及浓度配比制成液相培养基和固相培养基,取液相培养基高压灭菌,倒入固相培养基上层,制成固-液双相培养基。它适用于对抗病无核葡萄授粉后的胚珠进行胚挽救离体培养,以获得大量成苗的杂种后代,使用本发明可使无核葡萄胚发育率达85%,成苗率可达65%,且胚发育充分,成苗整齐健壮,成活率高,极大地提高了抗病无核葡萄胚挽救育种效率,加速了无核葡萄育种的进程,使其达到世界领先地位,本发明将为培育优质、抗病无核葡萄新品种开创极为广阔的前景。

    中国葡萄属野生种山葡萄抗黑痘病候选基因序列及应用

    公开(公告)号:CN1683533A

    公开(公告)日:2005-10-19

    申请号:CN200510041753.8

    申请日:2005-03-07

    Inventor: 王跃进 王西平

    Abstract: 本发明公开了中国葡萄属野生种山葡萄抗黑痘病候选基因序列,包括中国葡萄属野生种山葡萄的泰山-11抗黑痘病候选3个基因序列和黑龙江实生的1个抗黑痘病候选基因序列。本发明采用抗病基因同源序列法(Resistantgene analogus,RGAs)获得中国葡萄属野生种山葡萄(V.amurensis Rupr.)泰山-11、黑龙江实生2个株系抗黑痘病候选基因DNA片段4个,对这些片段克隆测序后,其大小介于468bp~513bp之间。以这些序列为依据,进行抗黑痘病标记辅助育种,用作葡萄育种中检测葡萄抗黑痘病基因的探针;根据这些片段在山葡萄与欧洲葡萄杂种后代中的分离情况,进行抗黑痘病基因定位与作图;或根据这些片段设计特异引物,采用cDNA末端快速扩增技术(Rapid amplification of cDNA ends,RACE) (Frohman et al,Proc.Natl.Acad.Sci,1988)克隆山葡萄抗黑痘病基因,为通过基因工程改良葡萄品种的抗病性奠定基础。

    一种抗病无核葡萄聚合育种方法

    公开(公告)号:CN1176575C

    公开(公告)日:2004-11-24

    申请号:CN02139331.1

    申请日:2002-08-05

    Abstract: 本发明公开了抗病无核葡萄高效聚合育种方法。葡萄是世界消费量最大的水果之一,而无核葡萄又占其总量的60%以上,但无核葡萄品种的培育按常规方法却需用7~9年时间,极大地阻碍了无核葡萄产量及品质的提高,本发明的目的就是要克服利用常规传统杂交育种技术培育抗病无核葡萄育种周期长、效率低的缺点,公开了一种融常规杂交技术、胚挽救技术、分子标记辅助育种技术于一体的高效聚合育种方法体系,使育种时间从7~9年缩短到3~4个月,通过该方法培育的无核葡萄抗病性强,无核比率大,畸果率低,果质品位高,开创了葡萄育种新领域。

    一种果树树干注射用复混液体肥料及其制法

    公开(公告)号:CN1332135A

    公开(公告)日:2002-01-23

    申请号:CN01130752.8

    申请日:2001-08-23

    Inventor: 王跃进 张朝红

    Abstract: 本发明属于一种果树树干注射用复混液体肥料及其制法。本发明的肥料含多种营养元素,是由尿素、硝酸钾、硫酸亚铁、硫酸锌、硫酸镁、硫酸锰、硼酸、磷酸二氢钾、硝酸钙、硫酸铜、柠檬酸、水混配而制成。本发明的肥料不仅减少施肥对土壤和地下水的污染,还能调节树体内各营养元素的平衡,增强树势,而且制法简单,降低了成本,提高了生产效率。

    葡萄抗白粉病转录因子基因VpRFP1启动子序列及其应用

    公开(公告)号:CN102121005A

    公开(公告)日:2011-07-13

    申请号:CN201010582564.2

    申请日:2010-12-03

    Abstract: 本发明涉及葡萄抗白粉病转录因子基因VpRFP1启动子序列及其应用,采用染色体步移并结合巢式PCR技术克隆了中国野生华东葡萄白粉病转录因子基因VpRFP1全长1249bp启动子序列,包含103个TATA-box和27个CAAT-box,具有8个与植物防御反应相关的元件,14个光反应元件,5个植物激素反应元件,其他合未知的元件14个。采用农杆菌介导的瞬时转化烟草叶片分析方法,对中国野生华东葡萄抗白粉病转录因子基因VpRFP1启动子功能表明,该启动子具有较强的启动活性,并且能够积极响应病原菌的侵染及抗病信号物质,通过转基因方法提高小麦、水稻、番茄、玉米、大豆、油菜等植物的抗病能力以及抗高温能力。

    一种葡萄平衡营养叶面肥及其制备方法

    公开(公告)号:CN101717287A

    公开(公告)日:2010-06-02

    申请号:CN200910219175.0

    申请日:2009-11-26

    Abstract: 本发明公开了葡萄平衡营养叶面肥,所述平衡营养液配方包括:麦饭石提取液10~30%,蔗糖1~3%,赤霉素0.005%~0.02%,柠檬酸0.015%~0.03%,氨基酸0.10%~0.30%,余量为水;所述的水是蒸馏水或无离子水。该叶面肥在葡萄果实发育关键时期(葡萄始果期、果实膨大期及果实始熟期)叶面喷施,能够全面提供葡萄果实与营养生长必需的营养元素,能够满足葡萄生长发育关键时期的营养需求。既具有提供葡萄全面营养的作用,同时具有安全、环保、节约肥水等优点,可以在南疆及与南疆气候、土壤环境相似的地区葡萄栽培中推广应用。

    一种用于葡萄抗黑痘病育种的基因分子标记方法

    公开(公告)号:CN101054595A

    公开(公告)日:2007-10-17

    申请号:CN200710017357.0

    申请日:2007-02-05

    Inventor: 王跃进 张剑侠

    Abstract: 本发明涉及一种用于葡萄抗黑痘病育种的基因分子标记方法,是以种间杂交组合白河-35-1×佳利酿的双亲及F1代、F2代为试材,用随机引物OPS03进行扩增,获得约1300对碱基的脱氧核糖核酸片段,对该片段用pGEM-T载体连接,然后转化大肠杆菌DH5α,克隆该片段。经测序,该片段为1365对碱基。按照该序列,人工合成的一个寡聚核苷酸能检测亲本、杂种、欧洲葡萄及野生葡萄抗黑痘病基因的存在与抗黑痘病性状的表达,用作检测葡萄抗黑痘病基因的探针。本发明的分子标记可用作葡萄抗黑痘病育种的早期筛选鉴定;其碱基序列为研究葡萄抗黑痘病基因提供了依据;人工合成的寡聚核苷酸序列具检测葡萄抗黑痘病基因存在与表达的功能。

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