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公开(公告)号：CN104878059A
公开(公告)日：2015-09-02
申请号：CN201510149807.6
申请日：2015-03-31
Applicant: 浙江大学宁波理工学院
IPC: C12P19/40
Abstract: 本发明公开了一种制备S-腺苷蛋氨酸的方法，包括：以D/L-蛋氨酸为原料，发酵获得S-腺苷蛋氨酸，往发酵液中添加柠檬酸和磷酸盐。本发明将柠檬酸和磷酸盐添加入发酵液中，使菌株利用柠檬酸和磷酸盐合成ATP，在保证不显著提高原料成本的情况下，解决了现有技术中S-腺苷蛋氨酸产量因胞内ATP浓度低造成的产物产量低的问题，显著提高了S-腺苷蛋氨酸产量和L-蛋氨酸的转化率。
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公开(公告)号：CN104694524A
公开(公告)日：2015-06-10
申请号：CN201510097873.3
申请日：2015-03-05
Applicant: 浙江大学宁波理工学院
CPC classification number: C12N9/88 , C12P13/00 , C12Y401/01015
Abstract: 本发明公开了一种利用拉氏图信息制备谷氨酸脱羧酶突变体的方法及其突变体，该方法包括：构建谷氨酸脱羧酶的三维结构模型，进行二面角合理性评价，生成拉氏图，从拉氏图中确定处于构象不合理区的氨基酸残基位点；针对该位点设计定点突变引物，以谷氨酸脱羧酶基因为模板，进行定点PCR扩增，获得定点突变文库；从所述定点突变文库中筛选谷氨酸脱羧酶突变体。该方法通过拉氏图提供的结构信息对酶进行理性设计，并结合定点突变技术，有效提高突变概率，节省时间，提高实验效率，并筛选得到催化活力优于野生型酶的突变酶，该突变酶可提高催化L-谷氨酸或其钠盐生成γ-氨基丁酸的反应速率，有利于GABA的工业化生产。
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公开(公告)号：CN103773819A
公开(公告)日：2014-05-07
申请号：CN201410005905.8
申请日：2014-01-03
Applicant: 浙江大学宁波理工学院
Abstract: 本发明公开了一种生产乳酸同时耦合制备GABA的方法，包括：将米根霉接入发酵培养基中进行发酵，当发酵液的pH小于4.8时，向发酵液中加入谷氨酸脱羧酶、磷酸吡哆醛和L-谷氨酸钠，之后持续向发酵液中加入L-谷氨酸钠，利用谷氨酸脱羧酶催化谷氨酸生成GABA的活力，消耗环境中的H+，使发酵液的pH维持在4.8～6.0，达到解除酸抑制对乳酸发酵的抑制、实现乳酸与GABA的同时生产的目的。本发明为乳酸发酵提供了一种新的解除底物抑制的方法，并且在发酵过程中耦合产生功能化合物γ-氨基丁酸，不仅增加了乳酸的产量，而且提高了过程的经济性。
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公开(公告)号：CN102747053B
公开(公告)日：2014-04-23
申请号：CN201210257003.4
申请日：2012-07-24
Applicant: 浙江大学宁波理工学院
Abstract: 本发明公开了一种细胞色素P450BM-3变体酶及其编码基因和用途，该变体酶的氨基酸序列如SEQ？ID？NO.1所示，它在细胞色素P450BM-3(F87V/A74G/L188Q)变体酶的基础上增加了三个突变位点，即第168位的天冬氨酸(GAT)突变为亮氨酸(CTT)，第435位的谷氨酸(GAA)突变为苏氨酸(ACG)，第445位的缬氨酸(GTG)突变为丙氨酸(GCG)。与父本酶和原始酶相比，本发明变体酶具有与底物更高的亲和力，催化吲哚生成靛蓝的效率更高。
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公开(公告)号：CN102747052B
公开(公告)日：2013-10-30
申请号：CN201210256898.X
申请日：2012-07-24
Applicant: 浙江大学宁波理工学院
Abstract: 本发明公开了一种细胞色素P450BM-3(L148S/Q229R)变体酶及其编码基因和用途，该变体酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，它在细胞色素P450BM-3(F87V/A74G/L188Q)变体酶的基础上增加了两个突变位点，即第148位的亮氨酸(L)突变为丝氨酸(S)，第229位的谷氨酰胺(Q)突变为精氨酸(R)。与父本相比较，本发明变体酶具有与底物更高的亲和力和热稳定性。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN103031323A
公开(公告)日：2013-04-10
申请号：CN201110297904.1
申请日：2011-09-30
Applicant: 浙江大学宁波理工学院
Abstract: 本发明涉及一种谷氨酸脱羧酶热稳定变体G56P基因，其核苷酸序列在第56位有定点突变。研究发现，此位点突变后得到的变体基因编码的谷氨酸脱羧酶的热稳定性有所增强。本发明通过在编码野生GAD酶基因基础上进行定点突变，提高了其对应变体酶在在60℃和70℃下的热稳定性。随着酶热稳定性的提高，在工业生产过程中可以采用更高的操作温度，以提高反应速率、增加底物溶解度，有利于利用该酶通过生物转化生产GABA。
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公开(公告)号：CN103031322A
公开(公告)日：2013-04-10
申请号：CN201110297156.7
申请日：2011-09-30
Applicant: 浙江大学宁波理工学院
Abstract: 本发明涉及一种谷氨酸脱羧酶热稳定变体G311P基因，其核苷酸序列在第311位有定点突变。研究发现，此位点突变后得到的变体基因编码的谷氨酸脱羧酶的热稳定性有所增强。本发明通过在编码野生GAD酶基因基础上进行定点突变，提高了其对应变体酶在在60℃和70℃下的热稳定性。随着酶热稳定性的提高，在工业生产过程中可以采用更高的操作温度，以提高反应速率、增加底物溶解度，有利于利用该酶通过生物转化生产GABA。
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公开(公告)号：CN102911927A
公开(公告)日：2013-02-06
申请号：CN201210431917.8
申请日：2012-11-02
Applicant: 浙江大学宁波理工学院
IPC: C12N9/88 , C12N15/60 , C12N15/63 , C12N1/21 , C12P13/00 , C12N15/10 , C12N15/70 , C12R1/24 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了一种谷氨酸脱羧酶及其用途，该谷氨酸脱羧酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明还公开了一种编码该谷氨酸脱羧酶的基因及含有该基因的表达单元、重组载体和转化子。本发明又公开该谷氨酸脱羧酶在生产γ-氨基丁酸中的应用。本发明谷氨酸脱羧酶的催化速率是野生型谷氨酸脱羧酶的2.5倍，能高效合成GABA，为利用谷氨酸脱羧酶进行γ-氨基丁酸的生物制备创造了更有利的条件。
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公开(公告)号：CN102080090A
公开(公告)日：2011-06-01
申请号：CN201010567447.9
申请日：2010-11-17
Applicant: 浙江大学宁波理工学院
Abstract: 本发明公开一种短乳杆菌谷氨酸脱羧酶基因的克隆、表达及应用。该基因来自短乳杆菌Lactobacillus brevis CGMCC NO.1306，全长1407bp，通过PCR从短乳杆菌基因组DNA中扩增获得。在该基因两端分别加上BamH I和EcoRI限制酶识别序列，与经相同限制酶消化的pET-28a(+)连接并转化大肠杆菌表达宿主菌BL21(DE3)，实现了在大肠杆菌中的重组表达，表达产物谷氨酸脱羧酶分子量为53538.6Da。该重组谷氨酸脱羧酶或表达该重组酶的工程菌可将L-谷氨酸或其盐脱羧转化为γ-氨基丁酸，具有转化效率高、产物纯度高，生产效率高的优点。
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公开(公告)号：CN107312787A
公开(公告)日：2017-11-03
申请号：CN201710586367.X
申请日：2017-07-18
Applicant: 浙江大学宁波理工学院
Abstract: 本发明公开了一种融合蛋白基因、工程菌及其在制备9α-羟基-雄烯二酮中的应用，其中，所述融合蛋白基因包括编码3-甾酮-9α-羟基化酶的基因和编码细胞色素P450 BM-3酶中黄素域的基因。本发明将3-甾酮-9α-羟基化酶在大肠杆菌中异源表达，并通过基因重组技术，将3-甾酮-9α-羟基化酶与细胞色素P450 BM-3酶的黄素域进行融合表达，得到融合蛋白KshA-P450，并使用含有该融合蛋白的重组工程菌催化底物雄烯二酮制备9α-羟基-雄烯二酮，不仅提高了比活力，同时也提高了转化率。
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