一种检测棉花材料中转基因抗虫棉MON757转化体状态的定性PCR检测试剂盒及方法

    公开(公告)号:CN105755110A

    公开(公告)日:2016-07-13

    申请号:CN201510983295.3

    申请日:2015-12-24

    CPC classification number: C12Q1/6895

    Abstract: 本发明“一种检测棉花材料中转基因抗虫棉MON757转化体状态的定性PCR检测试剂盒及方法,属于生物技术领域,试剂盒包括粉剂或溶液状的以下三条引物757?GF:5‘?CTAACCTCAATGAGAGCTACC?3’,757?TF:5‘?TCATGTAGCAATGTCCTGCC?3’,757?GR:5‘?GTAATAACTTGATGATGATTTGAG?3’,检测方法包括如下步骤:(1)制备待测棉花材料的DNA作为模板,(2)采用上述三条引物组成的引物组对待测棉花材料进行PCR扩增,(3)对PCR扩增产物进行检测,扩增出一条184bp条带的样品为纯合的MON757转化体,同时扩增出291bp和184bp两条条带的样品为杂合MON757转化体,仅扩增出291bp条带的样品不是或不含有MON757转化体。可检测待测棉花个体材料中是否含有MON757转化体,并鉴别出该品种中特定个体的纯杂合状态,适合于纯合度检测和育种选种。

    转cry1C基因水稻品系T1c-19的转化体特异性PCR检测方法

    公开(公告)号:CN101974618B

    公开(公告)日:2013-05-22

    申请号:CN201010238746.8

    申请日:2010-07-26

    Inventor: 谢家建 彭于发

    Abstract: 本发明涉及“转crylC基因水稻品系T1c-19的转化体特异性PCR检测方法”属于生物技术领域。本发明提供了转crylC基因水稻品系T1c-19的转化体特异性序列SEQ ID NO1以及依赖其建立的转化体特异性PCR方法即正向引物依据SEQ ID NO1中1-840位序列设计,反向引物依据SEQ ID NO1的841-1276位序列设计。该PCR方法可作为一种鉴定转基因水稻品系T1c-19,以及以这个品种为亲本的转基因水稻品系的有效手段。本发明为特异性鉴定转crylC基因水稻品系T1c-19提供了便利,该方法的优点在于快速、灵敏度高、特异性好、所需实验条件不高,因此有非常高的实用价值。

    鉴别转基因抗虫棉南农6号的PCR检测方法及其应用

    公开(公告)号:CN101899513B

    公开(公告)日:2013-04-10

    申请号:CN201010233893.6

    申请日:2010-07-19

    Abstract: 本发明“转基因抗虫棉南农6号的PCR检测方法及其应用”,涉及生物技术领域。本发明转基因抗虫棉南农6号的PCR检测方法,其特征在于PCR正向引物依据SEQ ID NO.1所示核苷酸序列的1-449位碱基序列设计,反向引物依据SEQ ID NO.1所示核苷酸序列的450-2247位碱基序列设计。能利用普通的PCR仪器、试剂快速准确鉴别出转基因抗虫棉南农6号,以及以转基因抗虫棉南农6号为亲本的棉花品系。

    鉴别转抗除草剂棉花LLCOTTON25转化体的PCR方法

    公开(公告)号:CN101792813B

    公开(公告)日:2012-11-14

    申请号:CN201010143913.0

    申请日:2010-04-07

    Abstract: 本发明“鉴别转抗除草剂棉花LLCOTTON25转化体的PCR方法”,属于转基因植物检测领域。本发明通过Genome walking方法获得转基因抗除草剂棉花LLCOTTON25的转化体特异性序列,一条为外源重组载体5’端插入区域的特异性旁侧序列,另一条外源重组载体的3’端插入区域的特异性旁侧序列,根据这两条旁侧序列任意一条设计引物对,能够专门用PCR检测转基因棉花品种LLCOTTON25及以其为亲本的棉花品种。

    鉴定转基因玉米中植酸酶基因表达框构建的PCR方法

    公开(公告)号:CN101792811B

    公开(公告)日:2012-09-05

    申请号:CN201010143835.4

    申请日:2010-04-07

    Abstract: 本发明“鉴定转基因玉米中植酸酶基因表达框构建的PCR方法”,属于转基因植物检测领域。包括如下步骤:(1)采用引物对Phy-1F/Phy-1R和Phy-2F/Phy-2R分别对待测品种的基因组进行PCR扩增;(2)凝胶电泳检测两对引物的PCR扩增产物,都出现目标长度的检测带的品种为转有Seq ID No.1所示核苷酸序列的构建载体的转基因品种;所述正向引物Phy-1F根据Seq ID No.1所示核苷酸序列1-649bp位置设计,反向引物Phy-1R根据Seq ID No.1所示核苷酸序列650-2134bp位置设计;所述正向引物Phy-2F根据Seq ID No.1所示核苷酸序列650-2134bp位置设计,反向引物Phy-2R根据Seq ID No.1所示核苷酸序列2135-2814bp位置设计。

    用于测定生物材料中目标序列甲基化率的方法及试剂盒

    公开(公告)号:CN109207618A

    公开(公告)日:2019-01-15

    申请号:CN201710522272.1

    申请日:2017-06-30

    Inventor: 谢家建 彭于发

    Abstract: 本发明“用于测定待测生物材料中目标序列甲基化率的方法”,属于生物技术领域。所述方法包括:(1)用内切酶酶切处理所述待测生物材料的基因组DNA;(2)用目标序列的特异性引物对步骤(1)所得到的酶切产物进行荧光定量PCR扩增,获得酶切后的待测生物材料目标序列的Ct值:Ctm;(3)用所述目标序列的特异性引物对未经所述内切酶酶切的待测转基因植物的基因组DNA进行荧光定量PCR扩增,获得对照处理的所述待测生物材料目标序列的Ct值:Ctk;(4)计算待测生物材料的目标序列甲基化率:M;M=2-ΔCtm;其中,ΔCtm=Ctm-Ctk本发明为测定转基因棉花中CaMV35S启动子的甲基化率提供了便利,具有快速简便、灵敏度高、所需实验条件不高,有非常高的实用价值。

    用于棉花MON15985转化体纯杂合鉴定的引物组、试剂盒及方法

    公开(公告)号:CN108060258A

    公开(公告)日:2018-05-22

    申请号:CN201810050133.8

    申请日:2018-01-18

    Inventor: 谢家建 彭于发

    Abstract: 本发明提供一种用于检测棉花MON15985转化体纯杂合的引物组,属于生物技术领域。所述引物组包括以下三条引物:15985‑GF:5’‑GCCCAACTCACTCATTTAGA‑3’,15985‑TR:5’‑TTCCTGACGGCAATCGACAC‑3’,15985‑GR:5’‑GGGCAAAGTTTTAACGTGGC‑3’。本发明还提供基于上述引物组的试剂盒、检测方法。本发明所提供的引物组可检测待测棉花个体材料中是否含有MON15985转化体,并鉴别出该品种中特定个体的纯杂合状态,适合于纯合度检测和育种选种。

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