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公开(公告)号：CN105907855A
公开(公告)日：2016-08-31
申请号：CN201610282177.4
申请日：2016-04-29
Applicant: 中国农业科学院植物保护研究所
Abstract: 本发明提供一种用于检测转基因棉花中非功能性插入片段的PCR引物、试剂盒及方法，属于生物技术领域。所述PCR引物的上下游核苷酸序列分别如Seq ID No.1和Seq ID No.2所示；所述PCR引物扩增的转基因棉花非功能性插入片段特征条带大小为229bp，序列如Seq ID No.4所示。本发明还提供一种用于检测转基因棉花中非功能性插入片段的试剂盒，其包括上述PCR引物。采用本发明所述的PCR引物和试剂盒对转基因棉花非功能性插入片段进行检测，具有快速、灵敏度高、特异性好、所需实验条件不高等优点，因此有非常高的实用价值。
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公开(公告)号：CN105755111A
公开(公告)日：2016-07-13
申请号：CN201510983301.5
申请日：2015-12-24
Applicant: 中国农业科学院植物保护研究所
CPC classification number: C12Q1/6851 , C12Q1/6895 , C12Q2600/13 , C12Q2600/158 , C12Q2545/101 , C12Q2545/113 , C12Q2563/107
Abstract: 本发明“一种定量检测棉花材料群体中MON757转化体含量的方法”，属于生物技术领域,包括如下步骤：(1)获取MON757转化体特异性片段序列的曲线方程，(2)获取棉花内标准基因ACP1基因的标准曲线方程，(3)随机选取待测棉花材料群体中的多个材料，研磨后混合提取待测DNA，(4)以待测DNA为模板进行MON757转化体荧光定量PCR反应测得待测DNA中MON757转化体的拷贝数；进行所述ACP1基因荧光定量PCR反应测得待测DNA中ACP1基因的拷贝数；(5)MON757转化体含量＝(MON757转化体拷贝数/ACP1基因拷贝数)×2，本发明为特异性鉴定群体中转基因抗虫棉MON757转化体的有无和含量提供了便利，具有高效快速、灵敏度高、特异性好、所需实验条件不高，有非常高的实用价值。
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公开(公告)号：CN105755111B
公开(公告)日：2019-03-22
申请号：CN201510983301.5
申请日：2015-12-24
Applicant: 中国农业科学院植物保护研究所
IPC: C12Q1/6851 , C12Q1/6895 , C12N15/11
Abstract: 本发明“一种定量检测棉花材料群体中MON757转化体含量的方法”，属于生物技术领域,包括如下步骤：(1)获取MON757转化体特异性片段序列的曲线方程，(2)获取棉花内标准基因ACP1基因的标准曲线方程，(3)随机选取待测棉花材料群体中的多个材料，研磨后混合提取待测DNA，(4)以待测DNA为模板进行MON757转化体荧光定量PCR反应测得待测DNA中MON757转化体的拷贝数；进行所述ACP1基因荧光定量PCR反应测得待测DNA中ACP1基因的拷贝数；(5)MON757转化体含量＝(MON757转化体拷贝数/ACP1基因拷贝数)×2，本发明为特异性鉴定群体中转基因抗虫棉MON757转化体的有无和含量提供了便利，具有高效快速、灵敏度高、特异性好、所需实验条件不高，有非常高的实用价值。
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公开(公告)号：CN105755110B
公开(公告)日：2019-03-22
申请号：CN201510983295.3
申请日：2015-12-24
Applicant: 中国农业科学院植物保护研究所
IPC: C12Q1/6895
Abstract: 本发明“一种检测棉花材料中转基因抗虫棉MON757转化体状态的定性PCR检测试剂盒及方法，属于生物技术领域,试剂盒包括粉剂或溶液状的以下三条引物757‑GF：5‘‑CTAACCTCAATGAGAGCTACC‑3’，757‑TF：5‘‑TCATGTAGCAATGTCCTGCC‑3’，757‑GR：5‘‑GTAATAACTTGATGATGATTTGAG‑3’，检测方法包括如下步骤：(1)制备待测棉花材料的DNA作为模板，(2)采用上述三条引物组成的引物组对待测棉花材料进行PCR扩增，(3)对PCR扩增产物进行检测，扩增出一条184bp条带的样品为纯合的MON757转化体，同时扩增出291bp和184bp两条条带的样品为杂合MON757转化体，仅扩增出291bp条带的样品不是或不含有MON757转化体。可检测待测棉花个体材料中是否含有MON757转化体，并鉴别出该品种中特定个体的纯杂合状态，适合于纯合度检测和育种选种。
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公开(公告)号：CN105755110A
公开(公告)日：2016-07-13
申请号：CN201510983295.3
申请日：2015-12-24
Applicant: 中国农业科学院植物保护研究所
IPC: C12Q1/68
CPC classification number: C12Q1/6895
Abstract: 本发明“一种检测棉花材料中转基因抗虫棉MON757转化体状态的定性PCR检测试剂盒及方法，属于生物技术领域,试剂盒包括粉剂或溶液状的以下三条引物757?GF：5‘?CTAACCTCAATGAGAGCTACC?3’，757?TF：5‘?TCATGTAGCAATGTCCTGCC?3’，757?GR：5‘?GTAATAACTTGATGATGATTTGAG?3’，检测方法包括如下步骤：(1)制备待测棉花材料的DNA作为模板，(2)采用上述三条引物组成的引物组对待测棉花材料进行PCR扩增，(3)对PCR扩增产物进行检测，扩增出一条184bp条带的样品为纯合的MON757转化体，同时扩增出291bp和184bp两条条带的样品为杂合MON757转化体，仅扩增出291bp条带的样品不是或不含有MON757转化体。可检测待测棉花个体材料中是否含有MON757转化体，并鉴别出该品种中特定个体的纯杂合状态，适合于纯合度检测和育种选种。
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