一种工程菌及其在生产对羟基肉桂酸的应用

    公开(公告)号:CN108949840B

    公开(公告)日:2021-10-19

    申请号:CN201810352692.4

    申请日:2018-04-19

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明公开了一种工程菌及其在生产对羟基肉桂酸的应用,属于生物工程技术领域。本发明提供能低成本生产对羟基肉桂酸的重组菌;所述重组菌同时表达4种酶,分别为酪氨酸酚裂解酶、酪氨酸氨裂解酶、L‑乳酸脱氢酶、NADH氧化酶;进一步地,本发明的重组菌还敲除了酚类物质分解基因,强化表达了乳酸转运基因、苯酚转运基因、辅酶合成相关基因中的任意一种或多种。本发明实现了对羟基肉桂酸的高效生产,且方法过程简单、杂质少,具有重要的工业应用价值。

    一种以廉价底物生产亚精胺的方法及工程菌

    公开(公告)号:CN112442518A

    公开(公告)日:2021-03-05

    申请号:CN201910833797.6

    申请日:2019-09-04

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明公开了一种以廉价底物生产亚精胺的方法及工程菌,属于生物工程技术领域。本发明构建了表达γ‑谷氨酸激酶、谷氨酸‑5‑半醛脱氢酶、天冬氨酸激酶、天冬氨酸‑β‑半醛脱氢酶、胺脱氢酶、L‑2,4双胺丁酸脱羧酶、羧基亚精胺脱氢酶、羧基亚精胺脱羧酶、葡萄糖脱氢酶、多聚磷酸盐激酶2‑I的重组细胞或者重组细胞的组合,并利用重组细胞或者重组细胞的组合催化天冬氨酸和精氨酸合成亚精胺。本发明选用的氧化还原酶类均能高效使用NAD(NADH)为辅酶、反应过程无产物反馈抑制,具有良好的工业化应用前景。

    一种能够催化西他沙星五元环中间体的ω-转氨酶突变体

    公开(公告)号:CN109468297B

    公开(公告)日:2020-11-03

    申请号:CN201811449434.4

    申请日:2018-11-30

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明公开了一种能够催化西他沙星五元环中间体的,属于基因工程和酶工程技术领域。本发明通过对ω‑转氨酶晶体结构中B因子较高的氨基酸进行定点突变,即将ω‑转氨酶212位置处的L突变成M,215位置处的I突变成M,得到了一种可以催化西他沙星五元环关键中间体的ω‑转氨酶突变体。本发明突变体L212M/I215M催化效率Kcat/Km为0.64min‑1·mM‑1,催化(S)‑5‑benzyl‑5‑azaspiro[2.4]heptan‑7‑amine生成5‑benzyl‑5‑azaspiro[2.4]heptan‑7‑one时,突变体的5‑benzyl‑5‑azaspiro[2.4]heptan‑7‑one最大转化率为77.37%。本发明得到的突变体适用于在工业上手性合成西他沙星五元环关键中间体的应用。

    一种可催化西他沙星五元环中间体的ω-转氨酶突变体

    公开(公告)号:CN109486783B

    公开(公告)日:2020-06-09

    申请号:CN201811449183.X

    申请日:2018-11-30

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明公开了一种可催化西他沙星五元环中间体的ω‑转氨酶突变体,属于基因工程和酶工程技术领域。本发明通过对ω‑转氨酶晶体结构中B因子较高的氨基酸进行定点突变,即将ω‑转氨酶32位置处的Y突变成W,159位置处的Y突变成F,215位置处的I突变成M,252位置处的T突变成A,得到了一种可以催化西他沙星五元环关键中间体的ω‑转氨酶突变体。本发明突变体Y32W/Y159F/I215M/T252A催化效率Kcat/Km为0.49min‑1·mM‑1,催化(S)‑5‑benzyl‑5‑azaspiro[2.4]heptan‑7‑amine生成5‑benzyl‑5‑azaspiro[2.4]heptan‑7‑one时,突变体的5‑benzyl‑5‑azaspiro[2.4]heptan‑7‑one最大转化率为77.14%。本发明得到的突变体适用于在工业上手性合成西他沙星五元环关键中间体的应用。

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