公开(公告)号：CN109456952A

公开(公告)日：2019-03-12

申请号：CN201811449197.1

申请日：2018-11-30

Applicant: 江南大学

Inventor： 廖祥儒 ,  翟李欣 ,  赖英杰 ,  谢子豪 ,  蔡宇杰 ,  管政兵

IPC: C12N9/10 ,  C12N15/54 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P17/16

Abstract: 本发明公开了一种可催化西他沙星五元环关键中间体的ω-转氨酶突变体，属于基因工程和酶工程技术领域。本发明通过将ω-转氨酶32位置处的Y突变成L，159位置处的Y突变成F，252位置处的T突变成A，得到了一种可以催化西他沙星五元环关键中间体的ω-转氨酶突变体。本发明突变体Y32L/Y159F/T252A催化效率Kcat/Km为0.75min-1·mM-1，催化(S)-5-benzyl-5-azaspiro[2.4]heptan-7-amine生成5-benzyl-5-azaspiro[2.4]heptan-7-one时，突变体的5-benzyl-5-azaspiro[2.4]heptan-7-one最大转化率为78.95％。本发明得到的突变体适用于在工业上手性合成西他沙星五元环关键中间体的应用。

公开(公告)号：CN110526418B

公开(公告)日：2021-04-09

申请号：CN201910763497.5

申请日：2019-08-19

Applicant: 江南大学

Inventor： 廖祥儒 ,  田乔鹏 ,  赖邓婷 ,  孟迪 ,  翟李欣 ,  管政兵 ,  蔡宇杰

IPC: C02F3/34 ,  C02F9/14 ,  C12N1/14 ,  C02F101/34 ,  C02F101/38 ,  C02F103/20 ,  C12R1/645

Abstract: 本发明公开了一种利用固定化密孔菌降解养殖废水中抗生素的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、将密孔菌Pycnoporus sp.SYBC‑L10接种于菌包中，静置条件下培养30‑40天菌丝长满培养基；S2、首先将含有四环类抗生素或磺胺类抗生素的养殖废液pH调整至3.0‑6.0，后缓慢加入菌包中，静置孵育一段时间放出液体即可。本发明提供了一种利用固定化密孔菌降解养殖废水中抗生素的方法，既廉价又高效去除养殖废水中四环类和磺胺类抗生素的方法，与传统的物理化学法相比，绿色安全，环境友好，符合可持续发展需求，在未来治理环境中的抗生素应用中具有广阔的应用前景。

公开(公告)号：CN109370998B

公开(公告)日：2020-08-04

申请号：CN201811449478.7

申请日：2018-11-30

Applicant: 江南大学

Inventor： 廖祥儒 ,  翟李欣 ,  赖英杰 ,  杨邵岚 ,  蔡宇杰 ,  管政兵

IPC: C12N9/10 ,  C12N15/54 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P41/00 ,  C12P7/26

Abstract: 本发明公开了一种催化效率提高的ω‑转氨酶突变体I215F，属于基因工程和酶工程技术领域。本发明通过对ω‑转氨酶晶体结构中B因子较高的氨基酸进行定点突变，即将ω‑转氨酶215位置处的I突变成F，得到了一种催化效率得到提高的ω‑转氨酶突变体。本发明突变体I215F催化效率Kcat/Km提高了1.92倍，催化(R)‑phenethylamine生成acetophenone时，突变体的acetophenone最大转化率比天然酶提高了3.79倍。本发明得到的突变体比天然ω‑转氨酶更适用于在工业上的应用。

公开(公告)号：CN109486784B

公开(公告)日：2020-06-09

申请号：CN201811449438.2

申请日：2018-11-30

Applicant: 江南大学

Inventor： 廖祥儒 ,  翟李欣 ,  赖英杰 ,  殷方荣 ,  蔡宇杰 ,  管政兵

IPC: C12N9/10 ,  C12N15/54 ,  C12P13/00 ,  C12P13/04 ,  C12P17/10

Abstract: 本发明公开了一种能催化西他沙星五元环关键中间体的ω‑转氨酶突变体，属于基因工程和酶工程技术领域。本发明通过对ω‑转氨酶晶体结构中B因子较高的氨基酸进行定点突变，即将ω‑转氨酶32位置处的Y突变成L，190位置处的S突变成A，212位置处的L突变成M，215位置处的I突变成M，得到了一种可以催化西他沙星五元环关键中间体的ω‑转氨酶突变体。本发明突变体Y32L/S190A/L212M/I215M催化效率Kcat/Km为0.64min‑1·mM‑1，催化(S)‑5‑benzyl‑5‑azaspiro[2.4]heptan‑7‑amine生成5‑benzyl‑5‑azaspiro[2.4]heptan‑7‑one时，突变体的5‑benzyl‑5‑azaspiro[2.4]heptan‑7‑one最大转化率为79.02％。本发明得到的突变体适用于在工业上手性合成西他沙星五元环关键中间体的应用。

公开(公告)号：CN109468297B

公开(公告)日：2020-11-03

申请号：CN201811449434.4

申请日：2018-11-30

Applicant: 江南大学

Inventor： 廖祥儒 ,  翟李欣 ,  赖英杰 ,  殷方荣 ,  蔡宇杰 ,  管政兵

IPC: C12N9/10 ,  C12N15/54 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P17/16

Abstract: 本发明公开了一种能够催化西他沙星五元环中间体的，属于基因工程和酶工程技术领域。本发明通过对ω‑转氨酶晶体结构中B因子较高的氨基酸进行定点突变，即将ω‑转氨酶212位置处的L突变成M，215位置处的I突变成M，得到了一种可以催化西他沙星五元环关键中间体的ω‑转氨酶突变体。本发明突变体L212M/I215M催化效率Kcat/Km为0.64min‑1·mM‑1，催化(S)‑5‑benzyl‑5‑azaspiro[2.4]heptan‑7‑amine生成5‑benzyl‑5‑azaspiro[2.4]heptan‑7‑one时，突变体的5‑benzyl‑5‑azaspiro[2.4]heptan‑7‑one最大转化率为77.37％。本发明得到的突变体适用于在工业上手性合成西他沙星五元环关键中间体的应用。

公开(公告)号：CN109486783B

公开(公告)日：2020-06-09

申请号：CN201811449183.X

申请日：2018-11-30

Applicant: 江南大学

Inventor： 廖祥儒 ,  翟李欣 ,  赖英杰 ,  任润鲜 ,  蔡宇杰 ,  管政兵

IPC: C12N9/10 ,  C12N15/54 ,  C12P13/00 ,  C12P13/04 ,  C12P17/10

Abstract: 本发明公开了一种可催化西他沙星五元环中间体的ω‑转氨酶突变体，属于基因工程和酶工程技术领域。本发明通过对ω‑转氨酶晶体结构中B因子较高的氨基酸进行定点突变，即将ω‑转氨酶32位置处的Y突变成W，159位置处的Y突变成F，215位置处的I突变成M，252位置处的T突变成A，得到了一种可以催化西他沙星五元环关键中间体的ω‑转氨酶突变体。本发明突变体Y32W/Y159F/I215M/T252A催化效率Kcat/Km为0.49min‑1·mM‑1，催化(S)‑5‑benzyl‑5‑azaspiro[2.4]heptan‑7‑amine生成5‑benzyl‑5‑azaspiro[2.4]heptan‑7‑one时，突变体的5‑benzyl‑5‑azaspiro[2.4]heptan‑7‑one最大转化率为77.14％。本发明得到的突变体适用于在工业上手性合成西他沙星五元环关键中间体的应用。

公开(公告)号：CN110577936A

公开(公告)日：2019-12-17

申请号：CN201910763751.1

申请日：2019-08-19

Applicant: 江南大学

Inventor： 廖祥儒 ,  田乔鹏 ,  赖邓婷 ,  孟迪 ,  翟李欣 ,  管政兵 ,  蔡宇杰

IPC: C12N9/02 ,  C12N1/14 ,  A62D3/02 ,  C12R1/645 ,  A62D101/28 ,  A62D101/26

Abstract: 本发明公开了一种漆酶高效降解四环类和磺胺类抗生素的方法，包括以下步骤：S1、采用密孔菌Pycnoporus sp.SYBC-L10发酵产漆酶；S2、首先将含有四环类抗生素或磺胺类抗生素的废液pH调至3.0-6.0，然后加入S1中得到的漆酶，同时加入小分子介体ABTS或者丁香醛，静置孵育一段时间即可。本发提供了一个可以高效降解环境中四环类和磺胺类抗生素的漆酶及方法，比已报道的类似漆酶效果明显快(降解50mg L-1抗生素通常只需要5-10min)，与传统的物理化学法相比，绿色安全，环境友好，符合可持续发展需求，在未来治理环境中的抗生素应用中具有广阔的应用前景。

公开(公告)号：CN109486783A

公开(公告)日：2019-03-19

申请号：CN201811449183.X

申请日：2018-11-30

Applicant: 江南大学

Inventor： 廖祥儒 ,  翟李欣 ,  赖英杰 ,  任润鲜 ,  蔡宇杰 ,  管政兵

IPC: C12N9/10 ,  C12N15/54 ,  C12P13/00 ,  C12P13/04 ,  C12P17/10

Abstract: 本发明公开了一种可催化西他沙星五元环中间体的ω-转氨酶突变体，属于基因工程和酶工程技术领域。本发明通过对ω-转氨酶晶体结构中B因子较高的氨基酸进行定点突变，即将ω-转氨酶32位置处的Y突变成W，159位置处的Y突变成F，215位置处的I突变成M，252位置处的T突变成A，得到了一种可以催化西他沙星五元环关键中间体的ω-转氨酶突变体。本发明突变体Y32W/Y159F/I215M/T252A催化效率Kcat/Km为0.49min-1·mM-1，催化(S)-5-benzyl-5-azaspiro[2.4]heptan-7-amine生成5-benzyl-5-azaspiro[2.4]heptan-7-one时，突变体的5-benzyl-5-azaspiro[2.4]heptan-7-one最大转化率为77.14％。本发明得到的突变体适用于在工业上手性合成西他沙星五元环关键中间体的应用。

公开(公告)号：CN109468297A

公开(公告)日：2019-03-15

申请号：CN201811449434.4

申请日：2018-11-30

Applicant: 江南大学

Inventor： 廖祥儒 ,  翟李欣 ,  赖英杰 ,  殷方荣 ,  蔡宇杰 ,  管政兵

IPC: C12N9/10 ,  C12N15/54 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P17/16

CPC classification number: C12N9/1096 ,  C12N15/70 ,  C12P17/165 ,  C12Y206/01

Abstract: 本发明公开了一种能够催化西他沙星五元环中间体的，属于基因工程和酶工程技术领域。本发明通过对ω-转氨酶晶体结构中B因子较高的氨基酸进行定点突变，即将ω-转氨酶212位置处的L突变成M，215位置处的I突变成M，得到了一种可以催化西他沙星五元环关键中间体的ω-转氨酶突变体。本发明突变体L212M/I215M催化效率Kcat/Km为0.64min-1·mM-1，催化(S)-5-benzyl-5-azaspiro[2.4]heptan-7-amine生成5-benzyl-5-azaspiro[2.4]heptan-7-one时，突变体的5-benzyl-5-azaspiro[2.4]heptan-7-one最大转化率为77.37％。本发明得到的突变体适用于在工业上手性合成西他沙星五元环关键中间体的应用。

公开(公告)号：CN109402188B

公开(公告)日：2020-11-06

申请号：CN201811219769.7

申请日：2018-10-19

Applicant: 江南大学

Inventor： 廖祥儒 ,  翟李欣 ,  赖英杰 ,  杨邵岚 ,  蔡宇杰 ,  管政兵

IPC: C12P13/00 ,  C12P13/04 ,  C12N9/10 ,  C12N15/54 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种来自短小芽孢杆菌的ω‑转氨酶及在生物胺化中的应用，属于生物工程技术领域。本发明首次从Bacillus pumilus W3中分离、鉴定了ω‑转氨酶基因，并选用大肠杆菌重组表达系统生产密码子优化后的ω‑转氨酶能大幅提高其产量，使更易达到工业化应用要求。本发明发现该ω‑转氨酶以(R)‑α‑phenethylamine为底物时，最适作用pH为7.0，最适作用温度为45℃；同时，该R‑ω‑转氨酶pH稳定性及温度稳定性都非常好，对实验组(以(R)‑α‑phenethylamine为底物)的催化活性优于对照组(以(S)‑α‑phenethylamine为底物)，表明该重组ω‑转氨酶具有很好选择性合成R‑手性胺的功能，具有较大应用潜力。