公开(公告)号：CN109486784B

公开(公告)日：2020-06-09

申请号：CN201811449438.2

申请日：2018-11-30

Applicant: 江南大学

Inventor： 廖祥儒 ,  翟李欣 ,  赖英杰 ,  殷方荣 ,  蔡宇杰 ,  管政兵

IPC: C12N9/10 ,  C12N15/54 ,  C12P13/00 ,  C12P13/04 ,  C12P17/10

Abstract: 本发明公开了一种能催化西他沙星五元环关键中间体的ω‑转氨酶突变体，属于基因工程和酶工程技术领域。本发明通过对ω‑转氨酶晶体结构中B因子较高的氨基酸进行定点突变，即将ω‑转氨酶32位置处的Y突变成L，190位置处的S突变成A，212位置处的L突变成M，215位置处的I突变成M，得到了一种可以催化西他沙星五元环关键中间体的ω‑转氨酶突变体。本发明突变体Y32L/S190A/L212M/I215M催化效率Kcat/Km为0.64min‑1·mM‑1，催化(S)‑5‑benzyl‑5‑azaspiro[2.4]heptan‑7‑amine生成5‑benzyl‑5‑azaspiro[2.4]heptan‑7‑one时，突变体的5‑benzyl‑5‑azaspiro[2.4]heptan‑7‑one最大转化率为79.02％。本发明得到的突变体适用于在工业上手性合成西他沙星五元环关键中间体的应用。

公开(公告)号：CN109468297B

公开(公告)日：2020-11-03

申请号：CN201811449434.4

申请日：2018-11-30

Applicant: 江南大学

Inventor： 廖祥儒 ,  翟李欣 ,  赖英杰 ,  殷方荣 ,  蔡宇杰 ,  管政兵

IPC: C12N9/10 ,  C12N15/54 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P17/16

Abstract: 本发明公开了一种能够催化西他沙星五元环中间体的，属于基因工程和酶工程技术领域。本发明通过对ω‑转氨酶晶体结构中B因子较高的氨基酸进行定点突变，即将ω‑转氨酶212位置处的L突变成M，215位置处的I突变成M，得到了一种可以催化西他沙星五元环关键中间体的ω‑转氨酶突变体。本发明突变体L212M/I215M催化效率Kcat/Km为0.64min‑1·mM‑1，催化(S)‑5‑benzyl‑5‑azaspiro[2.4]heptan‑7‑amine生成5‑benzyl‑5‑azaspiro[2.4]heptan‑7‑one时，突变体的5‑benzyl‑5‑azaspiro[2.4]heptan‑7‑one最大转化率为77.37％。本发明得到的突变体适用于在工业上手性合成西他沙星五元环关键中间体的应用。

公开(公告)号：CN109468297A

公开(公告)日：2019-03-15

申请号：CN201811449434.4

申请日：2018-11-30

Applicant: 江南大学

Inventor： 廖祥儒 ,  翟李欣 ,  赖英杰 ,  殷方荣 ,  蔡宇杰 ,  管政兵

IPC: C12N9/10 ,  C12N15/54 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P17/16

CPC classification number: C12N9/1096 ,  C12N15/70 ,  C12P17/165 ,  C12Y206/01

Abstract: 本发明公开了一种能够催化西他沙星五元环中间体的，属于基因工程和酶工程技术领域。本发明通过对ω-转氨酶晶体结构中B因子较高的氨基酸进行定点突变，即将ω-转氨酶212位置处的L突变成M，215位置处的I突变成M，得到了一种可以催化西他沙星五元环关键中间体的ω-转氨酶突变体。本发明突变体L212M/I215M催化效率Kcat/Km为0.64min-1·mM-1，催化(S)-5-benzyl-5-azaspiro[2.4]heptan-7-amine生成5-benzyl-5-azaspiro[2.4]heptan-7-one时，突变体的5-benzyl-5-azaspiro[2.4]heptan-7-one最大转化率为77.37％。本发明得到的突变体适用于在工业上手性合成西他沙星五元环关键中间体的应用。

公开(公告)号：CN109486784A

公开(公告)日：2019-03-19

申请号：CN201811449438.2

申请日：2018-11-30

Applicant: 江南大学

Inventor： 廖祥儒 ,  翟李欣 ,  赖英杰 ,  殷方荣 ,  蔡宇杰 ,  管政兵

IPC: C12N9/10 ,  C12N15/54 ,  C12P13/00 ,  C12P13/04 ,  C12P17/10

Abstract: 本发明公开了一种能催化西他沙星五元环关键中间体的ω-转氨酶突变体，属于基因工程和酶工程技术领域。本发明通过对ω-转氨酶晶体结构中B因子较高的氨基酸进行定点突变，即将ω-转氨酶32位置处的Y突变成L，190位置处的S突变成A，212位置处的L突变成M，215位置处的I突变成M，得到了一种可以催化西他沙星五元环关键中间体的ω-转氨酶突变体。本发明突变体Y32L/S190A/L212M/I215M催化效率Kcat/Km为0.64min-1·mM-1，催化(S)-5-benzyl-5-azaspiro[2.4]heptan-7-amine生成5-benzyl-5-azaspiro[2.4]heptan-7-one时，突变体的5-benzyl-5-azaspiro[2.4]heptan-7-one最大转化率为79.02％。本发明得到的突变体适用于在工业上手性合成西他沙星五元环关键中间体的应用。