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公开(公告)号：CN106011171A
公开(公告)日：2016-10-12
申请号：CN201610333062.3
申请日：2016-05-18
Applicant: 西北农林科技大学
IPC: C12N15/85
Abstract: 本发明主要属于基因编辑技术领域，具体涉及一种利用CRISPR/Cas9技术基于SSA修复的基因无缝编辑方法。所述基因无缝编辑方法首先构建靶向CCR5和eGFP的CRISPR/Cas9表达载体CCR5. CRISPR/Cas9和eGFP.CRISPR/Cas9，并构建供体CCR5‑Donor载体，所述CCR5‑Donor质粒载体具有pXL‑BACII‑L‑arm‑CAG‑TK‑PGK‑PuroR‑T2A‑eGFP‑bGH pA ‑R‑arm结构，其中，L‑arm和R‑arm为左右同源臂，L‑arm和R‑arm中间的CAG‑TK‑PGK‑PuroR‑T2A‑eGFP‑bGH pA为筛选标记组件；通过两次转染，利用CRISPR‑Cas9系统及细胞内的HR和SSA修复机制，通过细胞的嘌呤霉素和更昔洛韦正负向筛选，完成无缝编辑。
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公开(公告)号：CN105255937A
公开(公告)日：2016-01-20
申请号：CN201510500937.X
申请日：2015-08-14
Applicant: 西北农林科技大学
Abstract: 本发明是利用一个真核细胞III型启动子（U6或H1）启动由Drosha切割位点串联的多个发卡结构小RNA的表达，在真核细胞内表达后可以产生多个有生物活性的CRISPR sgRNA，以U6-sgRNA-shRNA-sgRNA的结构为例，这种U6启动表达的结构在一次转录中产生含有多个sgRNA和shRNA的初级转录本，在真核细胞中这些sgRNA经过加工后可以分别识别各自的靶位点，从而指导Cas9蛋白打靶多个位点，为多基因编辑打下基础。相比于传统的分别表达多个单一gRNA的方法和植物上新近报道的tRNA-gRNA系统，本发明的结构更简单，构建更方便。此外，本发明还可以通过Golden Gate的方法继续串联shRNA-sgRNA的序列打靶更多的位点或者表达多个shRNA干扰基因的表达。
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公开(公告)号：CN103695327A
公开(公告)日：2014-04-02
申请号：CN201310647359.3
申请日：2013-12-02
Applicant: 西北农林科技大学
Abstract: 本发明公开了一种口服重组酵母及其介导的靶向肠道DC呈递shRNA的应用，以酵母菌株作为宿主细胞，宿主细胞中转染有shRNA干扰载体，该shRNA干扰载体上设有启动子-shRNA-miR30的元件排列。该口服重组酵母能够穿过活体生物的胃肠道环境，靶向肠道DC细胞传递shRNA新方法，该方法可以有效的解决现有技术中向DC呈递时存在的弊端，能够广泛应用于基因治疗。
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公开(公告)号：CN119614632A
公开(公告)日：2025-03-14
申请号：CN202411627205.2
申请日：2024-11-14
Applicant: 西北农林科技大学
IPC: C12N15/85 , C12N15/55 , C12N15/113
Abstract: 本发明公开了一种优化的NlovFz2‑ωRNA编辑系统，通过对NlovFz2蛋白及ωRNA骨架的改造，获得最优NlovFz2系统enNlovFz2，在相比于亲本NlovFz2系统显著提升编辑效率基础上，通过将NlovFz2突变蛋白与T5核酸外切酶融合，获得编辑效率更高的enNlovFz2‑T5系统。本发明对于推进基因编辑技术在功能机制研究和临床治疗方面的广泛应用具有重要意义和价值。
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公开(公告)号：CN116716198A
公开(公告)日：2023-09-08
申请号：CN202310729111.5
申请日：2023-06-19
Applicant: 西北农林科技大学
Abstract: 本发明公开了一种防治柱状黄杆菌感染的口服重组酵母菌株及其制备方法和应用，以酵母菌株作为DNA疫苗载体，在酵母细胞中转化柱状黄杆菌GldJ基因重组表达载体，并通过向鱼类肠道细胞靶向递送GldJ基因，在鱼类肠道细胞中表达出相应的重组GldJ蛋白，该重组GldJ蛋白可以激活全身免疫反应，从而实现对柱状黄杆菌感染引起的鱼烂鳃病的防治。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN115792227A
公开(公告)日：2023-03-14
申请号：CN202211563162.7
申请日：2022-12-07
Applicant: 西北农林科技大学
IPC: G01N33/569 , C12N5/0775
Abstract: 本发明具体涉及一种绒山羊毛囊干细胞的鉴定、分离和培养方法。技术方案为：使用CD34+和/或ITGβ1+和/或KRT15+作为毛囊干细胞的标记基因。本发明首次提出了一种可准确分离、鉴定绒山羊毛囊干细胞的方法。在分离上，本发明联合使用酶消化法和机械分离法共同获得细胞，并提供了一种可专用于培养绒山羊毛囊干细胞的培养基，以快速获得所需细胞。在鉴定上，本发明首次联合使用了几种新的标记基因，可快速、准确鉴定所需细胞。
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公开(公告)号：CN112370525A
公开(公告)日：2021-02-19
申请号：CN202011262351.1
申请日：2020-11-12
Applicant: 西北农林科技大学
Abstract: 本发明公开了一种用于瘦素免疫调节的口服重组酵母菌株，以酵母菌株作为宿主细胞，宿主细胞中转染有ob基因重组表达载体，通过向哺乳动物肠道DC细胞靶向递送ob基因重组表达载体，在DC细胞中表达出相应的重组瘦素蛋白，重组瘦素蛋白通过DC细胞呈递，使黏膜免疫系统产生瘦素抗体，并通过免疫反应降低血液中的瘦素水平，实现对机体高瘦素导致的瘦素不敏感的肥胖的治疗。
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公开(公告)号：CN111876422A
公开(公告)日：2020-11-03
申请号：CN202010778704.7
申请日：2020-08-05
Applicant: 西北农林科技大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/65 , C12N15/85
Abstract: 本发明公开了一种可用于富集CRISPR/Cas9介导的精确NHEJ修复细胞的筛选报告系统，包括精确NHEJ修复筛选报告载体以及与该筛选报告载体共转染于目标编辑细胞的细胞基因组长片段打靶载体，精确NHEJ修复筛选报告载体包括筛选报告基因表达盒及两个sgRNA表达盒，所述筛选报告基因表达盒的转录区包括用于插入在药物筛选基因序列选定隔断位置的双sgRNA靶位点构建序列，双sgRNA靶位点分别以两个sgRNA表达盒转录的sgRNA作为打靶筛选报告基因表达盒的导引序列。本发明的筛选报告系统通过共转染并进行药物筛选，可以高效的富集目的基因长片段精确删除的阳性细胞克隆。
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公开(公告)号：CN111850051A
公开(公告)日：2020-10-30
申请号：CN202010642589.0
申请日：2020-07-06
Applicant: 西北农林科技大学
Abstract: 本发明公开了双供体介导的基于药物/荧光协同筛选的双等位基因编辑系统，系统包括两个供体载体，供体载体序列包含左右两段目的基因同源序列和点突变位点及位于左右两段目的基因同源序列之间的外源序列，外源序列分为带有胸腺激酶筛选基因、绿色荧光蛋白、嘌呤霉素抗性基因的若干个表达盒和带有胸腺激酶筛选基因、红色荧光蛋白、博来霉素抗性基因的若干个表达盒。本发明构建的基因编辑系统可以用于对基因组进行精确、高效的双等位编辑。
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公开(公告)号：CN106191116B
公开(公告)日：2019-10-08
申请号：CN201610703246.4
申请日：2016-08-22
Applicant: 西北农林科技大学
Abstract: 本发明提供基于CRISPR/Cas9的外源基因敲入整合系统及其建立方法和应用，系统包括同时具有报告/供体功能的载体及Cas9表达载体，所述报告/供体载体包括两条目标基因同源臂以及位于两条目标基因同源臂之间的外源序列片段；两条目标基因同源臂在目标基因上的同源序分别列位于目标基因靶序列的两侧并与目标基因靶序列相接；外源序列片段包括依次排列的启动子、抗性基因、剪切肽序列、报告基因以及polyA尾，抗性基因内部插入有两段该抗性基因的SSA修复同源序列，并且在两段SSA修复同源序列之间插入有目标基因靶序列。本发明构建了一套能够高效定点精确靶向整合外源基因到內源基因序列的敲入系统，而且能够进行较高效率的双染色体等位基因的双敲入。
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