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公开(公告)号：CN112941107A
公开(公告)日：2021-06-11
申请号：CN202110365085.3
申请日：2021-04-01
Applicant: 西北农林科技大学
IPC: C12N15/85 , C12N15/55 , C12N15/113
Abstract: 本发明公开了一种原核Argonaute蛋白的基因编辑应用，通过构建源于细菌的Argonaute蛋白的原核表达载体，以及在转化宿主细胞后对该Argonaute蛋白的表达载体和共转化载体的降解的检测以及基因组位点的检测，发现了其具有被特异性转录本激活并靶向特定DNA靶序列的能力，并且在真核细胞中转录的导向RNA的参与下，实现了对基因组靶序列进行inDel频率为3％的基因编辑。实验结果表明原核Argonaute蛋白可以用于细胞内基因编辑工具的开发。
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公开(公告)号：CN111961686A
公开(公告)日：2020-11-20
申请号：CN202010888329.1
申请日：2020-08-28
Applicant: 西北农林科技大学
Abstract: 本发明公开了一种利用CRISPR/Cas9和PiggyBac实现双等位精确基因组编辑的系统。构建CRISPR/Cas9表达载体、PiggyBac系统介导的供体载体以及PiggyBac转座酶表达载体，通过CRISPR/Cas9表达载体打靶基因组，造成DNA双链断裂，使用PiggyBac系统介导的供体载体进行HDR修复，再利用PiggyBac转座酶表达载体进行筛选标记的删除，从而实现高效、精确的双等位无筛选标记的基因组编辑，可应用于畜禽转基因育种。
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公开(公告)号：CN111961686B
公开(公告)日：2024-08-06
申请号：CN202010888329.1
申请日：2020-08-28
Applicant: 西北农林科技大学
Abstract: 本发明公开了一种利用CRISPR/Cas9和PiggyBac实现双等位精确基因组编辑的系统。构建CRISPR/Cas9表达载体、PiggyBac系统介导的供体载体以及PiggyBac转座酶表达载体，通过CRISPR/Cas9表达载体打靶基因组，造成DNA双链断裂，使用PiggyBac系统介导的供体载体进行HDR修复，再利用PiggyBac转座酶表达载体进行筛选标记的删除，从而实现高效、精确的双等位无筛选标记的基因组编辑，可应用于畜禽转基因育种。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN112941107B
公开(公告)日：2024-01-23
申请号：CN202110365085.3
申请日：2021-04-01
Applicant: 西北农林科技大学
IPC: C12N15/85 , C12N15/55 , C12N15/113
Abstract: 本发明公开了一种原核Argonaute蛋白的基因编辑应用，通过构建源于细菌的Argonaute蛋白的原核表达载体，以及在转化宿主细胞后对该Argonaute蛋白的表达载体和共转化载体的降解的检测以及基因组位点的检测，发现了其具有被特异性转录本激活并靶向特定DNA靶序列的能力，并且在真核细胞中转录的导向RNA的参与下，实现了对基因组靶序列进行inDel频率为3％的基因编辑。实验结果表明原核Argonaute蛋白可以用于细胞内基因编辑工具的开发。
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公开(公告)号：CN105861552A
公开(公告)日：2016-08-17
申请号：CN201610261461.3
申请日：2016-04-25
Applicant: 西北农林科技大学
Abstract: 本发明主要属于高等生物体基因组编辑技术领域，具体涉及一种T7 RNA聚合酶介导的CRISPR/Cas9基因编辑系统的构建方法。所述方法基于T7 RNA聚合酶和T7启动子的高度特异性识别原理，首先构建T7启动子?sgRNA，将T7启动子?sgRNA、Cas9表达质粒以及T7 RNA聚合酶表达质粒共同转入细胞，T7 RNA聚合酶催化T7启动子启动sgRNA的转录，从而引导Cas9在靶位点处，进行切割，完成基因编辑过程。本发明所述方法利用T7启动子表达sgRNA，简化了CRISPR/Cas9系统的设计步骤，使得更多的人能够快速简便使用CRISPR/Cas9这一基因编辑工具研究感兴趣的基因位点。
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公开(公告)号：CN105861552B
公开(公告)日：2019-10-11
申请号：CN201610261461.3
申请日：2016-04-25
Applicant: 西北农林科技大学
Abstract: 本发明主要属于高等生物体基因组编辑技术领域，具体涉及一种T7 RNA聚合酶介导的CRISPR/Cas9基因编辑系统的构建方法。所述方法基于T7 RNA聚合酶和T7启动子的高度特异性识别原理，首先构建T7启动子‑sgRNA，将T7启动子‑sgRNA、Cas9表达质粒以及T7 RNA聚合酶表达质粒共同转入细胞，T7 RNA聚合酶催化T7启动子启动sgRNA的转录，从而引导Cas9在靶位点处，进行切割，完成基因编辑过程。本发明所述方法利用T7启动子表达sgRNA，简化了CRISPR/Cas9系统的设计步骤，使得更多的人能够快速简便使用CRISPR/Cas9这一基因编辑工具研究感兴趣的基因位点。
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公开(公告)号：CN110305888A
公开(公告)日：2019-10-08
申请号：CN201910574438.3
申请日：2019-06-28
Applicant: 西北农林科技大学
Abstract: 本发明属于基因工程领域，具体涉及一种检测人工核酸酶诱导Indels突变检测系统的构建与应用。采取的具体技术方案为：提供一种ara-mFabI检测系统，包括3个检测载体，每个载体单独负责一种类型插入片段的定量与定性揭示。3个载体的区别在于：mFabI基因开放阅读框的类型不同；分别由mFabI基因扩增引物的上游引物分别引入9、10、11个碱基以改变mFabI基因的ORF。使用本发明提供的检测系统，能实现核酸酶诱导的各类型Indels突变频率的定量揭示；并能达到与扩增子测序相近的Indels突变频率与类型分布。
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公开(公告)号：CN105255937A
公开(公告)日：2016-01-20
申请号：CN201510500937.X
申请日：2015-08-14
Applicant: 西北农林科技大学
Abstract: 本发明是利用一个真核细胞III型启动子（U6或H1）启动由Drosha切割位点串联的多个发卡结构小RNA的表达，在真核细胞内表达后可以产生多个有生物活性的CRISPR sgRNA，以U6-sgRNA-shRNA-sgRNA的结构为例，这种U6启动表达的结构在一次转录中产生含有多个sgRNA和shRNA的初级转录本，在真核细胞中这些sgRNA经过加工后可以分别识别各自的靶位点，从而指导Cas9蛋白打靶多个位点，为多基因编辑打下基础。相比于传统的分别表达多个单一gRNA的方法和植物上新近报道的tRNA-gRNA系统，本发明的结构更简单，构建更方便。此外，本发明还可以通过Golden Gate的方法继续串联shRNA-sgRNA的序列打靶更多的位点或者表达多个shRNA干扰基因的表达。
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