公开(公告)号：CN103520713A

公开(公告)日：2014-01-22

申请号：CN201310485936.3

申请日：2013-10-16

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 张智英 ,  麻丽霞 ,  李欣憶 ,  张婷婷 ,  张优优 ,  刘中天

IPC: A61K39/00 ,  A61P9/10 ,  A61P3/06 ,  C12N15/81 ,  C12N1/19 ,  C12R1/865

Abstract: 本发明公开了一种ApoB100酵母重组疫苗及其制备方法和应用，该酵母重组疫苗以酵母作为宿主细胞，转染包含ApoB100基因片段的真核表达载体；所述的ApoB100基因片段的核苷酸序列如SEQ.ID.NO.1所示，所述的真核表达载体为JMB88-HA-OVA-hApoB100。该酵母重组疫苗通过口服的方式饲喂，能够在酵母中被硫酸铜诱导下表达OVA-hApoB融合蛋白，并在体内被裂解释放，经过抗原呈递引起集体的体液和细胞免疫反应，达到缓解和治疗动脉粥样硬化的目的，可应用于动脉粥样硬化的药物的制备。

公开(公告)号：CN103520713B

公开(公告)日：2015-10-28

申请号：CN201310485936.3

申请日：2013-10-16

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 张智英 ,  麻丽霞 ,  李欣憶 ,  张婷婷 ,  张优优 ,  刘中天

IPC: A61K39/00 ,  A61P9/10 ,  A61P3/06 ,  C12N15/81 ,  C12N1/19 ,  C12R1/865

Abstract: 本发明公开了一种ApoB100酵母重组疫苗及其制备方法和应用，该酵母重组疫苗以酵母作为宿主细胞，转染包含ApoB100基因片段的真核表达载体；所述的ApoB100基因片段的核苷酸序列如SEQ.ID.NO.1所示，所述的真核表达载体为JMB88-HA-OVA-hApoB100。该酵母重组疫苗通过口服的方式饲喂，能够在酵母中被硫酸铜诱导下表达OVA-hApoB融合蛋白，并在体内被裂解释放，经过抗原呈递引起集体的体液和细胞免疫反应，达到缓解和治疗动脉粥样硬化的目的，可应用于动脉粥样硬化的药物的制备。

公开(公告)号：CN104031853A

公开(公告)日：2014-09-10

申请号：CN201310429660.7

申请日：2013-09-22

Applicant: 西北农林科技大学 ,  陕西省畜牧技术推广总站

Inventor： 张智英 ,  张志强 ,  辛颖 ,  安宁 ,  张涛 ,  白义春 ,  邵斯旻 ,  张建峰 ,  任充华 ,  李铎 ,  张龙 ,  闫强 ,  林娟 ,  徐华荣 ,  李欣憶 ,  刘中天 ,  梁明福

IPC: C12N1/19 ,  C12N15/63 ,  C12N15/66

Abstract: 本发明公开了一种可用于大规模生产的MSTN酵母菌种的构建方法，该方法步骤为：KanMX4基因片段的扩增和pBlue-KanMX4载体的构建；酵母基因同源臂的插入；pBlue-kan-NTS2-5’3'-MSTN整合载体的构建；将MSTN载体整合入酵母基因组；抗性基因KanMX4的敲除。本发明构建了不含有筛选基因的Myostatin整合型酵母菌株，该菌种可以在富集型培养基中生产，安全可靠成本低，不会造成目的基因丢失，适合于大规模生产重组酵母，采用本发明大规模生产的酵母菌株直接饲喂动物，可在动物体内产生高水平MSTN特异性抗体，解除其抑制作用，促进肌肉生长，这对动物生产具有重要意义。

公开(公告)号：CN106011171B

公开(公告)日：2019-10-11

申请号：CN201610333062.3

申请日：2016-05-18

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 张智英 ,  白义春 ,  徐坤 ,  魏泽辉 ,  和林洁 ,  任充华 ,  邵斯旻 ,  吴芸 ,  刘中天

IPC: C12N15/85

Abstract: 本发明主要属于基因编辑技术领域，具体涉及一种基因无缝编辑方法。该方法构建靶向CCR5和eGFP的CRISPR/Cas9表达载体CCR5.CRISPR/Cas9和eGFP.CRISPR/Cas9，并构建供体CCR5‑Donor载体；随后通过两次转染，利用CRISPR‑Cas9系统及细胞内的HR和SSA修复机制，通过细胞的嘌呤霉素和更昔洛韦正负向筛选，完成无缝编辑。

公开(公告)号：CN106011171A

公开(公告)日：2016-10-12

申请号：CN201610333062.3

申请日：2016-05-18

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 张智英 ,  白义春 ,  徐坤 ,  魏泽辉 ,  和林洁 ,  任充华 ,  邵斯旻 ,  吴芸 ,  刘中天

IPC: C12N15/85

Abstract: 本发明主要属于基因编辑技术领域，具体涉及一种利用CRISPR/Cas9技术基于SSA修复的基因无缝编辑方法。所述基因无缝编辑方法首先构建靶向CCR5和eGFP的CRISPR/Cas9表达载体CCR5. CRISPR/Cas9和eGFP.CRISPR/Cas9，并构建供体CCR5‑Donor载体，所述CCR5‑Donor质粒载体具有pXL‑BACII‑L‑arm‑CAG‑TK‑PGK‑PuroR‑T2A‑eGFP‑bGH pA ‑R‑arm结构，其中，L‑arm和R‑arm为左右同源臂，L‑arm和R‑arm中间的CAG‑TK‑PGK‑PuroR‑T2A‑eGFP‑bGH pA为筛选标记组件；通过两次转染，利用CRISPR‑Cas9系统及细胞内的HR和SSA修复机制，通过细胞的嘌呤霉素和更昔洛韦正负向筛选，完成无缝编辑。