一种基于体细胞胚发生的灰绿碱蓬快速繁殖方法

    公开(公告)号:CN117502237A

    公开(公告)日:2024-02-06

    申请号:CN202311670398.5

    申请日:2023-12-07

    Abstract: 本发明公开了一种基于体细胞胚发生的灰绿碱蓬快速繁殖方法,其包括以下过程:种子灭菌及萌发、愈伤组织诱导、芽诱导和根诱导。愈伤组织诱导的过程如下:黑暗条件生长的幼苗,将下胚轴切割下分成小段,放置于愈伤诱导培养基上诱导愈伤组织,每2周更换一次培养基进行继代培养,继代两次后观察统计愈伤的生长情况;有愈伤诱导的外植体用于下一步的芽诱导,芽诱导的过程如下:有愈伤诱导的外植体,转移到芽诱导培养基上进行芽诱导,诱导的愈伤组织每2周转移到新培养基上;根诱导的过程如下:从愈伤组织上分离出再生芽,其下端插入到根诱导培养基中进行生根培养。本发明的有益效果为:能够从愈伤组织中获取单个细胞来源的再生植株,具有高繁殖系数的优点。

    菠萝转录因子AcWRKY38基因的克隆、表达载体构建及其在菠萝寒害中的应用

    公开(公告)号:CN118109501A

    公开(公告)日:2024-05-31

    申请号:CN202311775305.5

    申请日:2023-12-22

    Abstract: 本发明公开了菠萝转录因子AcWRKY38基因的克隆方法、表达载体构建及其在调控植物冷胁迫中的应用,首先提取菠萝叶片的RNA,反转录获得cDNA;再以菠萝cDNA为模版,根据目的基因的序列设计特异性引物,通过特异性引物AcWRKY38F,AcWRKY38R进行PCR扩增获得目的片段。AcWRKY38基因的目的片段连接到pENTR载体上并进行热激转化,连接成功进行PCR鉴定,测序无误后,提取质粒。然后将已连接上GATEWAY入门载体pENTR的目的载体与中间载体pGWB505进行LR重组反应。构建成功后,利用农杆菌介导的遗传转化技术将目的基因转入菠萝愈伤组织,通过潮霉素筛选,获得菠萝过表达阳性植株。将转基因菠萝植株通过冷胁迫处理,通过表型观察发现,过表达AcWRKY38转基因菠萝植株增强了菠萝耐冷和抗逆性,有利于培育高产、优质、高抗性的优良菠萝品种。

    百香果病毒介导的基因沉默体系的构建方法及其应用

    公开(公告)号:CN117230111A

    公开(公告)日:2023-12-15

    申请号:CN202311088561.7

    申请日:2023-08-28

    Abstract: 本发明公开了百香果病毒介导的基因沉默体系的构建方法及其应用,构建方法是:(1)提取百香果嫩叶的RNA,反转录获得cDNA;(2)选择百香果PePDS基因为干扰片段;(3)设计PePDS扩增的特异性上、下游引物,并进行cDNA片段PCR扩增,纯化后获得PePDS基因干扰片段;(4)将纯化的PePDS基因干扰片段通过重组反应同步连接到植物病毒pTRV2载体上,构建得到百香果PePDS基因沉默体系(pTRV1,pTRV2‑PePDS),命名为TRV‑PePDS。本发明构建的TRV‑PePDS可应用到农杆菌转化和百香果叶片浸染过程中,并表现出了明显的沉默效率。本发明能够快速高效获得转基因植株,稳定性强,操作简单。实现了快速降低目的基因表达水平的目的,达到敲除目的基因的效果,加快百香果功能基因组学的研究进程。

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