公开(公告)号：CN106906233A

公开(公告)日：2017-06-30

申请号：CN201710019559.2

申请日：2017-01-10

Applicant: 海南大学

Inventor： 牛晓磊 ,  许文茸 ,  刘秦 ,  冯世鹏 ,  何朝族

IPC: C12N15/70 ,  C12N15/10

CPC classification number: C12N15/70 ,  C12N15/10

Abstract: 本发明公开了一种基于ccdB致死基因和SmaI酶切位点的酶切连接共体系同时进行的方法。将ccdB基因插入载体pUC18的EcoRI和HindIII位点之间，得到pUC18‑ccdB质粒，然后将pUC18‑ccdB质粒、DNA片段、限制性内切酶SmaI、T4连接酶、T4连接酶buffer和水混合形成反应体系进行反应，由此得到连接产物。本发明以常见的pUC18载体为骨架载体，结合ccdB致死基因的筛选机制以及ccdB致死基因内部含有的SmaI酶切位点，构建出一套快速、高效、低背景的克隆方法，无需对ccdB重组载体及PCR产物进行双酶切及胶回收等步骤，可以直接将PCR产物连接到克隆载体，效率高，整个时间控制在20分钟以内，极大地减少了实验成本，加快了实验进度，该克隆体系具有极为广阔的应用前景。

公开(公告)号：CN108575761B

公开(公告)日：2019-10-01

申请号：CN201810617301.7

申请日：2018-06-15

Applicant: 海南大学

Inventor： 陈健妙 ,  何朝族 ,  罗红丽 ,  栾林莉 ,  周广振 ,  张盛敏

IPC: C12N5/04 ,  A01H4/00

Abstract: 本发明提供了一种橡胶树胚状体诱导培养基、胚性愈伤组织的诱导方法及抗性愈伤组织植株再生的培育方法，属于植物组织培养技术领域。所述橡胶树胚状体诱导培养基，以改良MS培养基为基本培养基，包括Kt、NAA、6‑BA、水杨酸、亚精胺、酸水解酪蛋白、椰子液体胚乳椰子水、活性炭、蔗糖和植物凝胶。本发明提供的胚状体诱导培养基进行橡胶树花药体细胞胚诱导胚性愈伤组织的体细胞胚诱导率相较于花药脱分化愈伤组织的提高2.04～2.16倍。

公开(公告)号：CN105230497B

公开(公告)日：2018-03-02

申请号：CN201510815703.4

申请日：2015-11-23

Applicant: 海南大学

Inventor： 陈健妙 ,  胡新文 ,  吴友根 ,  何朝族

IPC: A01H4/00

Abstract: 本发明属植物组培技术领域，涉及一种海南地区白花油茶组培苗的生产方法，是取开花后170～190d发育时期的油茶果实幼胚子叶作为外植体，经脱分化诱导出结节胚性组织、增殖培养、再分化培养得到体细胞胚，将体细胞胚转接至植株再生诱导培养基上诱导得到具健壮胚芽和主根的体细胞胚再生植株。本发明利用组织培养，选择花后180d油茶果发育时期的种子未成熟胚子叶为外植体进行油茶组培快繁，建立一整套经体细胞胚发生途径获得油茶再生植株的体系，为海南地区白花油茶工厂化育苗提供技术依据，并为海南地区白花油茶的基因工程改良奠定了材料和技术基础。