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公开(公告)号：CN103160517A
公开(公告)日：2013-06-19
申请号：CN201110422761.2
申请日：2011-12-16
Applicant: 江南大学
Abstract: 一种酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)中Rav1p基因的克隆与表达方法，本发明设计了一对特异性引物，引物1：5’-ACCGGAATTCATGTCATTGAACTTTCTTCCAGGACGCC-3’(EcoR I)引物2：5’-CTACGCGTCGACTACAAAGTCATCTAGTAAGTTCTTG-3’(Sal I)，构建了酿酒酵母Rav1p的克隆方法和高效表达方法。RAVE复合物是调节酿酒酵母V-ATP酶活性的蛋白复合体，而Rav1p是RAVE复合物中分子量最大的一个亚基，利用本发明人构建的重组质粒可以实现Rav1p在酿酒酵母细胞内的基因敲除，从而构建高压二氧化碳敏感型酿酒酵母菌株。在食品饮料发酵后，可用高压二氧化碳灭活此酵母菌，既达到了除菌的目的，又不会影响食品的风味。
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公开(公告)号：CN101955923B
公开(公告)日：2012-05-23
申请号：CN201010297893.2
申请日：2010-09-30
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明名称为一种提高过氧化氢酶存储稳定性的方法本发明以Serratia marcescens SYBC08(保藏号为CGMCC No.3449)为出发菌株，经过深层发酵、菌体破壁和离心后获得了胞内过氧化氢酶液，其酶活力不低于20000U/ml(体积等同于发酵液体积)。在该酶液中同时添加一定浓度的NaCl和CaCl2后，其使用效果明显高于单独添加NaCl、CaCl2、明胶、甘油的效果：酶液在30℃储存30d内，过氧化氢酶的活力得到提高，增强了酶的使用效果；酶液在30℃存储90d后，酶活保留率高达90％以上，显著提高了酶的稳定性。该方法解决了液态过氧化氢酶易失活的问题，属于酶制剂技术领域。
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公开(公告)号：CN105838696A
公开(公告)日：2016-08-10
申请号：CN201610265921.X
申请日：2016-04-26
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C12N9/2437
Abstract: 本发明涉及到提高纤维素酶的方法，通过向发酵体系当中添加一种产酶促进剂壳聚糖，使得产酶得到提高。所述添加剂壳聚糖为经过脱乙酰化的动物甲壳，添加量为0.5g/L～2.0g/L。通过添加壳聚糖，能使纤维素酶酶活提高50％～60％。而且，壳聚糖本身来源广泛价格低廉容易获得，不仅降低了生产成本，而且了提高生产效率，因此在生产纤维素酶工业中具有良好的应用前景。
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公开(公告)号：CN105543155A
公开(公告)日：2016-05-04
申请号：CN201610034151.8
申请日：2016-01-19
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C07K14/245 , C07K5/06026 , C12N9/1029 , C12N15/67 , C12N15/70 , C12N2800/101
Abstract: 本发明公开了一种提高含有重组DNA的L-丙氨酰-L-谷氨酰胺生物合成系统活性的方法，该重组大肠杆菌携带的重组质粒具有能够催化L-谷氨酰胺与L-丙氨酸甲酯盐酸盐生成L-丙氨酰-L-谷氨酰胺的氨基酸酯酰基转移酶编码基因(SAET)以及能够将L-丙氨酰-L-谷氨酰胺从胞内转运至胞外的多药外排转运蛋白编码基因(ydeE)，两者共表达可以有效地改善菌种的稳定性，提高菌种的产量与转化率。其中的重组质粒是通过将SAET以及ydeE重组到同一质粒上，或将分别含有两个基因的不同抗性的两种重组质粒共转化得到的。该重组菌的L-丙氨酰-L-谷氨酰胺产量提高到了原来的3.33倍。
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公开(公告)号：CN104278047A
公开(公告)日：2015-01-14
申请号：CN201310283918.7
申请日：2013-07-04
Applicant: 江南大学
IPC: C12N15/70 , C12N15/77 , C12N15/78 , C12N15/75 , C12N15/81 , C12N1/21 , C12N1/19 , C12P13/24 , C12R1/19
Abstract: 公开了一种使含有重组DNA的反式-4-羟脯氨酸生物合成系统活性增强的方法。其中，含有重组DNA的反式-4-羟脯氨酸生物合成系统是在2-酮戊二酸和亚铁离子存在下，作用于游离的L-脯氨酸并生成反式-4-羟脯氨酸的具有脯氨酸4-羟化酶活性的重组微生物。同时，本发明还提供反式-4-羟脯氨酸的生物合成方法。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN102071188A
公开(公告)日：2011-05-25
申请号：CN201010297883.9
申请日：2010-09-30
Applicant: 江南大学
Abstract: 一种酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)中Rav2p基因克隆与表达的方法，属于微生物基因工程领域。本发明设计了引物1：5’CGCCATATGAGTGTTGATTTGTTTCC-3’(Nde I)和引物2：5’-GAGCGGCCGCCTTATATGTACTTAAC-3’(Not I)，建立了酿酒酵母中Rav2p基因克隆的方法，建立了Rav2p基因原核表达载体构建的方法，建立了Rav2p在大肠杆菌中高效表达的方法。Rav2p为酿酒酵母中RAVE复合物的重要组成部分，利用本发明人构建的重组表达质粒可以实现Rav2p在酿酒酵母细胞内的基因删除，方便构建高压二氧化碳低耐受性的酵母菌株，为食品饮料行业提供新型发酵菌株。
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公开(公告)号：CN104276990B
公开(公告)日：2017-08-15
申请号：CN201310286354.2
申请日：2013-07-04
Applicant: 江南大学
IPC: C07D207/16 , B01J20/28 , B01D15/08
Abstract: 本发明涉及一种利用活性炭对L‑羟脯氨酸发酵液脱色的方法，由活性炭的预处理、发酵液的预处理、L‑羟脯氨酸发酵液的连续脱色和活性炭的再生等步骤组成。本发明在层析柱内填充粉末状活性炭对L‑羟脯氨酸发酵液进行连续脱色，与用粉末状活性炭分批脱色相比，活性炭可以反复多次使用，而且不用反复装柱，脱色后可直接进行再生，降低劳动强度，减少购买活性炭的成本。另外整个过程在室温下进行，在大批量脱色时更加容易操作，避免高温危险，并节约能源和降低成本。本发明主要用于L‑羟脯氨酸发酵液中色素的去除，适合工业应用。
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公开(公告)号：CN106434735A
公开(公告)日：2017-02-22
申请号：CN201610892831.3
申请日：2016-10-12
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C12N15/815 , C12N9/2482 , C12N2800/22 , C12Y302/01008
Abstract: 本发明公开提供了一种提高半纤维素酶、纤维素酶或木质纤维素水解辅助酶蛋白在毕赤酵母中异源表达量的方法。本发明通过毕赤酵母密码子偏好的特性，对来源于黑曲霉Aspergillus niger的木聚糖酶(XynC)基因进行密码子优化，其优化后的核苷酸序列(AxynC)经人工合成，并构建重组毕赤酵母表达载体pPIC9K-AxynC和pPICZαA-AxynC。利用两步电击转化法，构建高产木聚糖酶的重组毕赤酵母，即将线性化的pPIC9K-AxynC转化毕赤酵母GS115，获得了一株产酶能力较强的菌株。以该高酶活菌株作为宿主菌进行第二次电击转化，将线性化的pPICZαA-AxynC电击转化该菌株，获得了一株高产木聚糖酶的双质粒重组毕赤酵母。通过检测表明，经过密码子优化的木聚糖酶基因能够在毕赤酵母中成功表达，而且利用两步电击转化法构建的高产木聚糖酶重组菌能稳定高效生产木聚糖酶，摇瓶
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公开(公告)号：CN105603017A
公开(公告)日：2016-05-25
申请号：CN201610035787.4
申请日：2016-01-19
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C12P13/24 , C12N9/0071 , C12Y114/11002
Abstract: 本发明公开了一种利用重组嗜乙酸棒杆菌发酵生产反式-4-羟基-L-脯氨酸的方法。该重组嗜乙酸棒杆菌携带的重组质粒具有催化脯氨酸生成反式-4-羟脯氨酸的脯氨酸羟化酶基因(P4H)。在重组嗜乙酸棒杆菌细胞内，脯氨酸-4-羟化酶在α-酮戊二酸以及亚铁离子存在的情况下，可以将游离的L-脯氨酸转化为反式-4-羟基-L-脯氨酸。本发明还公开了所述在嗜乙酸棒杆菌反式-4-羟基-L-脯氨酸生产中的应用。
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公开(公告)号：CN105572069A
公开(公告)日：2016-05-11
申请号：CN201610035855.7
申请日：2016-01-19
Applicant: 江南大学
IPC: G01N21/33
CPC classification number: G01N21/33
Abstract: 本发明公开一种发酵液中顺式-3-羟基L-脯氨酸的快速检测方法，旨在提供一种使用方便，快速简便，灵敏度高的顺式-3-羟基L-脯氨酸快速检测方法。该方法相比常用的高效液相色谱法和氯胺T法具有无需贵重仪器、操作简单、反应时间短、所需样品少、灵敏度较高等优点。大幅度的提高了工作效率，具有广泛的应用和推广价值。
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