公开(公告)号：CN106434735A

公开(公告)日：2017-02-22

申请号：CN201610892831.3

申请日：2016-10-12

Applicant: 江南大学

Inventor： 孙付保 ,  张云博 ,  张震宇 ,  白仁惠 ,  杨慧敏 ,  王春迪

IPC: C12N15/81 ,  C12N9/42 ,  C12R1/84

CPC classification number: C12N15/815 ,  C12N9/2482 ,  C12N2800/22 ,  C12Y302/01008

Abstract: 本发明公开提供了一种提高半纤维素酶、纤维素酶或木质纤维素水解辅助酶蛋白在毕赤酵母中异源表达量的方法。本发明通过毕赤酵母密码子偏好的特性，对来源于黑曲霉Aspergillus niger的木聚糖酶(XynC)基因进行密码子优化，其优化后的核苷酸序列(AxynC)经人工合成，并构建重组毕赤酵母表达载体pPIC9K-AxynC和pPICZαA-AxynC。利用两步电击转化法，构建高产木聚糖酶的重组毕赤酵母，即将线性化的pPIC9K-AxynC转化毕赤酵母GS115，获得了一株产酶能力较强的菌株。以该高酶活菌株作为宿主菌进行第二次电击转化，将线性化的pPICZαA-AxynC电击转化该菌株，获得了一株高产木聚糖酶的双质粒重组毕赤酵母。通过检测表明，经过密码子优化的木聚糖酶基因能够在毕赤酵母中成功表达，而且利用两步电击转化法构建的高产木聚糖酶重组菌能稳定高效生产木聚糖酶，摇瓶