公开(公告)号：CN109880876A

公开(公告)日：2019-06-14

申请号：CN201811620616.3

申请日：2018-12-28

Applicant: 江南大学

Inventor： 邬敏辰 ,  李闯 ,  宗迅成 ,  文正 ,  胡蝶 ,  李剑芳

IPC: C12P41/00 ,  C12P7/22 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种利用菜豆环氧化物水解酶制备(R)-间硝基苯乙二醇的方法，属于生物催化技术领域。本发明以表达有环氧化物水解酶PvEH2的大肠杆菌全细胞为催化剂，根据其针对外消旋间硝基环氧苯乙烷的优良的立体选择性特性，通过建立一种双相体系——石油醚/水，提高了底物的初始上样浓度和整个催化反应的效率，减轻了单水相体系中高浓度的间硝基环氧苯乙烷对于PvEH2活性的抑制，同时降低了底物自发水解的程度，产物邻二醇的对映体纯度(eep)可达90.2％，底物的转化率可达99.5％。

公开(公告)号：CN108559737A

公开(公告)日：2018-09-21

申请号：CN201810033873.0

申请日：2018-01-15

Applicant: 江南大学

Inventor： 邬敏辰 ,  宗迅成 ,  徐雄峰 ,  王瑞 ,  李雪晴 ,  李剑芳

IPC: C12N9/14 ,  C12N15/55

Abstract: 本发明公开一种立体选择性提高的菜豆环氧水解酶突变体，属于酶工程技术领域。本发明通过菜豆来源的环氧水解酶进行单向定点突变，获得对映选择性与对映归一性提高的突变酶P184L。P184L对外消旋间氯环氧苯乙烷(rac-mCSO)的最终eep，在25℃下从3.1％提高到27.3％。与野生型相比，P184L对外消旋对氯环氧苯乙烷rac-pCSO的E值从2.6提高至20，对rac-pCSO的对映选择性提高了7.7倍。

公开(公告)号：CN108048429A

公开(公告)日：2018-05-18

申请号：CN201810033898.0

申请日：2018-01-15

Applicant: 江南大学

Inventor： 邬敏辰 ,  宗迅成 ,  李闯 ,  石小玲 ,  袁风娇 ,  李剑芳

IPC: C12N9/24 ,  C12N15/56 ,  C12N15/75 ,  C12N1/21 ,  C12N1/19

CPC classification number: C12N9/2497 ,  C12N15/75

Abstract: 本发明公开一种立体选择性提高的菜豆环氧水解酶突变体及构建方法，属于酶工程技术领域。本发明通过菜豆来源的环氧水解酶进行单向定点突变，获得对映选择性与对映归一性提高的突变酶W102L。W102L对外消旋间氯环氧苯乙烷(rac‑mCSO)的最终eep，在25℃下从3.1％提高到81.7％。与野生型相比，W102L对外消旋对氯环氧苯乙烷rac‑pCSO的E值从2.6提高至25.5，对rac‑pCSO的对映选择性提高了9.8倍。

公开(公告)号：CN107164342A

公开(公告)日：2017-09-15

申请号：CN201710474254.0

申请日：2017-06-21

Applicant: 江南大学

Inventor： 邬敏辰 ,  李闯 ,  宗迅成 ,  王瑞 ,  李剑芳

IPC: C12N9/14 ,  C12N15/55 ,  C12N1/21 ,  C12P41/00 ,  C12P17/02 ,  C12R1/19

CPC classification number: C12N9/14 ,  C12P17/02 ,  C12P41/001 ,  C12Y303/02

Abstract: 本发明公开了一种菜豆来源的环氧化物水解酶及其应用，属于生物技术领域。本发明公布了一种来源于豆科植物菜豆(Phaseolus vulgaris)的环氧化物水解酶基因(pveh2)及对应的氨基酸序列；提供了含有该基因的重组质粒pET28a(+)‑pveh2和基因工程菌E.coli BL21(DE3)/pET28a(+)‑pveh2，并利用该菌株表达制备重组环氧化物水解酶；提供了一种利用在本发明中构建的重组菌株发酵所产酶进行生物催化的方法，制备得到对映纯的R型环氧苯乙烷(ee>99％)，并且，其最终产率达到49.3％，接近理论值50％。